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刚果红实验
实验原理:刚果红是一种酸性染料,能溶于水和酒精,它可与具有三股螺旋链构象的多糖形成络合物,络合物的最大吸收波长同刚果红相比发生红移,在一定浓度范围内,表现为最大吸收波长的特征变化变成紫红色,当NaOH浓度大于某一数值后,最大吸收波长急剧下降。
实验内容:称取5mg发菜多糖样品,加入2.0ml蒸馏水和2.0ml80umol/L的刚果红试剂,逐渐加入1mol/L的NaOH溶液,使溶液中NaOH终浓度由0.0mol/L比逐渐升高到0.5mol/L,并用紫外可见记录光谱仪进行扫描,测得各NaOH浓度条件下的最大吸收波长,以NaOH浓度为横坐标,最大吸收波长为纵坐标作图。
所用试剂:
刚果红 天津市科密欧化学试剂开发中心
氢氧化钠 天津市广成化学试剂有限公司
所用仪器:
TU-1810紫外可见分光光度计 北京普析通用仪器有限责任公司
实验数据
NaOH浓度
0.0mol/L
0.1mol/L
0.2mol/L
0.3mol/L
0.4mol/L
0.5mol/L
对照
490nm
489nm
490nm
484nm
484nm
483nm
D2
488nm
491nm
488nm
490nm
490nm
486nm
D1
493nm
513nm
512nm
512nm
513nm
510nm
A2
493nm
496nm
497nm
497nm
495nm
496nm
A1
494nm
511nm
511nm
510nm
508nm
506nm
实验结果:
分析:
NFEPS-A1和NFEPS-D1与刚果红形成络合物的最大吸收波长同刚果红相比发生红移。在NaOH浓度为0.0mol/L到0.1mol/L时,紫外吸收移向长波,表明样品能与刚果红形成络合物,样品有规则的螺旋构象;NaOH浓度继续增大时,最大吸收波长下降,表明多糖螺旋结构解体,变成无规则的线团形式。即样品在弱碱性范围内可形成有序的3股螺旋结构,在强碱性条件下,分子间氢键破坏,3股螺旋结构解体为单股,不能与刚果红形成络合物。
NFEPS-A2和NFEPS-D2与刚果红形成络合物的最大吸收波长同刚果红相比发生红移,但结果不够明显,可以认为二者不能发生此颜色反应,但是有研究报道二者能发生此颜色反应,因此NFEPS-A2和NFEPS-D2组分是否有三维螺旋构象还需进一步研究。
说明:此两种分析结果是所查文献中的两种常见结果,即有或没有三维螺旋构象,咱们的用于论文中的NFEPS-A2用哪种结果?(变化幅度非常小……)(NFEPS-D2出现波动数据不用了 )
如果看各组分拆开的曲线图,认为有螺旋结构也能说通,毕竟有一个上升又下降的趋势……
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