六-肥达反应.ppt

一一 肥达氏反应肥达氏反应原理：用已知伤寒沙门菌原理：用已知伤寒沙门菌O、H抗原，以及引起抗原，以及引起 副伤寒副伤寒的副伤寒沙门菌的副伤寒沙门菌H抗原与受检血清作定量凝集试验，测抗原与受检血清作定量凝集试验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。作为临床定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。作为临床上诊断伤寒和副伤寒的参考。上诊断伤寒和副伤寒的参考。实验材料实验材料 (1)待测血清待测血清(1:10)，伤寒杆菌，伤寒杆菌O、H菌液，甲型副伤寒杆菌液，甲型副伤寒杆菌菌(PA)和乙型副伤寒杆菌和乙型副伤寒杆菌(PB)H菌液，生理盐水。菌液，生理盐水。(2)小试管，吸管，试管架，吸耳球小试管，吸管，试管架，吸耳球(或橡皮乳头或橡皮乳头)，水浴，水浴箱，记号笔等。箱，记号笔等。方法：方法：在试管架上放在试管架上放4排试管，每排支，做好标记。排试管，每排支，做好标记。每排每支试管各加入每排每支试管各加入0.5ml生理盐水。生理盐水。每排第每排第1管中分别加入待测血清管中分别加入待测血清0.5ml。混匀后用。混匀后用吸管吸取吸管吸取0.5ml混合液加到第混合液加到第2管内。混匀后再从中管内。混匀后再从中吸取吸取0.5ml液体到第液体到第3管中，如此重复直至第管中，如此重复直至第6管。第管。第6管稀释完后吸取管稀释完后吸取0.5ml混合液弃去。第混合液弃去。第7管不加待测管不加待测血清作阴性对照。每一排试管均重复上述步骤。血清作阴性对照。每一排试管均重复上述步骤。在第在第1排每个试管中加入伤寒杆菌排每个试管中加入伤寒杆菌“O”抗原抗原0.5ml，第，第2排，第排，第3排和第排和第4排则每管分别加入排则每管分别加入0.5ml伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌的伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌的“H”抗原。抗原。将所有的试管充分振荡，使其混匀，置将所有的试管充分振荡，使其混匀，置50水浴水浴45分钟，分钟，取出观察结果。取出观察结果。肥达反应稀释法示意表肥达反应稀释法示意表试验管（每管试验管（每管0.5ml）对照管对照管 1234567生理生理盐盐水水0.50.50.50.5 0.50.5 0.5-1“O”抗原抗原 0.50.50.50.5 0.50.50.52“H”抗原抗原0.50.50.50.50.50.50.53PA抗原抗原0.50.50.50.50.50.50.54PB抗原抗原0.50.50.50.50.50.50.5血清最血清最终终稀稀释释度度 1:401:801:1601:3201:640 1:1280-抗原构造与分类成分成分产生产生抗体抗体产生特点产生特点制备制备反应特点反应特点O O抗抗原原LPSLPSIgMIgM出现早出现早维持时间维持时间短短酒精处理酒精处理或加热或加热反应速度慢反应速度慢颗粒状凝集颗粒状凝集H H抗抗原原蛋白蛋白质质IgGIgG出现较晚，出现较晚，维持时间维持时间长长甲醛固定甲醛固定后使后使O O抗原抗原被遮盖被遮盖反应速度快反应速度快絮状凝集絮状凝集肥达实验结果判定血清的凝集效价（滴度）：血清的凝集效价（滴度）：是指能与一定量的抗原发是指能与一定量的抗原发生肉眼可见的明显凝集的血清最高稀释倍数。血清效生肉眼可见的明显凝集的血清最高稀释倍数。血清效价代表血清中抗体的含量，血清效价越高，所含抗体价代表血清中抗体的含量，血清效价越高，所含抗体的量愈多。的量愈多。结果判断1、正常凝集效价、正常凝集效价 伤寒沙门菌伤寒沙门菌“O”抗体凝集效价在抗体凝集效价在1：80以下，伤寒沙以下，伤寒沙门菌门菌“H”抗体在抗体在1：160以下，以下，甲、乙型副伤寒沙门菌甲、乙型副伤寒沙门菌“H”抗体凝集效价在抗体凝集效价在1：80以以下。下。2、病程中动态观察、病程中动态观察 二份血清，第二次效价增长四倍以上有意义二份血清，第二次效价增长四倍以上有意义3、O与与H抗体在诊断上的意义抗体在诊断上的意义 O H A B 诊诊 断断 意意 义（义（可能可能）伤寒及副伤寒感染早期伤寒及副伤寒感染早期/交叉反应交叉反应伤寒及副伤寒感染晚期伤寒及副伤寒感染晚期/预防接种预防接种/非特异性回忆反应非特异性回忆反应伤寒伤寒甲型副伤寒甲型副伤寒乙型副伤寒乙型副伤寒接种伤寒及副伤寒三联疫苗接种伤寒及副伤寒三联疫苗非肠热症非肠热症/早期用抗生素早期用抗生素/免疫功能低下免疫功能低下O 与与H抗体在诊断上的意义抗体在诊断上的意义实验二实验二 其他细菌其他细菌白喉棒状杆菌：白喉棒状杆菌：G+一端或两端膨大，排列不规则，常呈一端或两端膨大，排列不规则，常呈栅栏状或英文字母样，如栅栏状或英文字母样，如V、W、X等等观察异染颗粒观察异染颗粒炭疽杆菌：炭疽杆菌：G G粗大杆菌，两端平切、排列呈粗大杆菌，两端平切、排列呈竹节状竹节状；有荚膜，有荚膜，芽胞芽胞呈椭圆形，位于菌体中央呈椭圆形，位于菌体中央肉毒梭菌肉毒梭菌：G G粗大杆菌，粗大杆菌，芽胞位于近极端，成网球拍状芽胞位于近极端，成网球拍状实验二实验二 炭疽杆菌菌落炭疽杆菌菌落 3035 3035，普通琼脂培养基上形成灰白色粗糙，普通琼脂培养基上形成灰白色粗糙型菌落，边缘不整齐，在低倍镜下观察呈卷型菌落，边缘不整齐，在低倍镜下观察呈卷发状发状