法医学尸体检验切片制作理论与技术.ppt

法医病理学法医病理学 组织切片制作组织切片制作 HE染色切片染色切片一、目的要求一、目的要求 掌握取材、固定、水洗、脱水、透明、浸掌握取材、固定、水洗、脱水、透明、浸蜡与包埋，切片制作。蜡与包埋，切片制作。（一）取材（一）取材1.1.取材快，新取材快，新鲜鲜，防止，防止组织组织腐腐败败。2.2.取材刀取材刀锋锋利，垂直地切取，利，垂直地切取，严严禁禁挤压挤压或用或用钳镊钳镊钳夹钳夹，以免使，以免使组织组织或或细细胞胞变变形造成人形造成人为为的破坏。的破坏。3.3.取材大小，取材大小，lcmlcm3cm3cm1cm1cm2cm2cm0.3cm0.3cm0.5cm0.5cm。材料材料过过大在短大在短时间时间内不易固定透，影响内不易固定透，影响效果。效果。（二）方法：（二）方法：1.1.实质器官实质器官心脏：心脏：心房、瓣膜、心室。可分别取病变部位带正常心房、瓣膜、心室。可分别取病变部位带正常组织。可单独取心室肌，乳头肌，组织。可单独取心室肌，乳头肌，3 35 5块。块。肺脏：肺脏：左右两肺（五个肺叶）；可根据病变需要决定左右两肺（五个肺叶）；可根据病变需要决定取材块数，特殊情况下为区别在不同肺叶上取材，取材块数，特殊情况下为区别在不同肺叶上取材，可用形状做标志在记录时记清楚，可用形状做标志在记录时记清楚，5 57 7块。块。肾脏：肾脏：取材包括被膜、皮质、髓质和肾盂，应区别左取材包括被膜、皮质、髓质和肾盂，应区别左右肾，右肾，2 24 4块。块。胰腺：胰腺：取胰体部，必要时加取胰头、胰尾，取胰体部，必要时加取胰头、胰尾，2 2块。块。肝脏：肝脏：取长方形或三角形，取长方形或三角形，2 23 3块。块。脾脏：脾脏：取材带被膜，取材带被膜，2 23 3块。块。脑脑：全全脑脑（桥桥脑脑、延延脑脑、小小脑脑）、脊脊髓髓颈颈段及脉络丛，十一块，或根据具体情况决定：段及脉络丛，十一块，或根据具体情况决定：额额极极；前前后后中中央央回回；海海马马；内内囊囊；丘丘脑脑；枕枕叶叶；脉脉络络丛丛；桥桥脑脑；延延髓髓；中中脑脑；小小脑脑。取取材材时时要要带带上上软软脑脑膜膜、脑脑室室膜膜或或软软脊脊膜膜因因此此刀刀要要锋锋利利。需需要要时时取脊髓。取脊髓。垂体：垂体：前、中、后叶和垂体柄，从前向后前、中、后叶和垂体柄，从前向后横切。横切。2 2管腔脏器：管腔脏器：取材时注意方向，取管腔脏器的全层构造。取材时注意方向，取管腔脏器的全层构造。大大肠肠、小小肠肠：应应考考虑虑环环行行皱皱襞襞，沿沿肠肠管管的的长长轴轴取取（纵切）。（纵切）。食管、气管：食管、气管：横切面为宜。横切面为宜。胃：胃：常规取胃底。常规取胃底。取取材材后后应应将将被被膜膜面面铺铺在在滤滤纸纸上上，然然后后入入固固定定液液内，防止或减少组织受压变形与收缩。内，防止或减少组织受压变形与收缩。有病变的部位，应附带周围正常组织取材。有病变的部位，应附带周围正常组织取材。二、固定二、固定 （一一）意意义义：是是做做好好切切片片的的重重要要步步骤骤之之一一，如如果果首次组织固定不良，再重新固定效果不佳。首次组织固定不良，再重新固定效果不佳。检检材材固固定定的的关关键键：取取材材后后尽尽可可能能地地及及时时地地将将所所取取的的材材料料进进行行固固定定，以以防防止止其其“死死后后”变变化化的的进进展展，尽尽力力使使组组织织接接近近于于生生前前状状态态。为为了了防防止止组组织织结结构构及及成成份份的的破破坏坏和和溶溶解解消消失失，需需要要使使其其转转变变为为不不溶溶性性物物质质，有有利利于于组组织织结结构构保保存存-固固定定的的基基本意义。本意义。固定的目的：固定的目的：1.1.阻止死后变化，防止组织的自溶与腐败。阻止死后变化，防止组织的自溶与腐败。2 2保存组织的结构及成份。保存组织的结构及成份。3 3媒染作用，使不同的组织成份对染料有不同媒染作用，使不同的组织成份对染料有不同 亲和力，使细胞各部易于受色。亲和力，使细胞各部易于受色。4 4能使组织硬化，为制作薄切片奠定基础。能使组织硬化，为制作薄切片奠定基础。注注意意：材材料料块块不不能能过过大大，固固定定器器皿皿不不易易过过小小，固固定定液液量量不不易易过过少少，应应是是固固定定材材料料体体积积的的2020一一3030倍。倍。（二）固定液：（二）固定液：根根据据检检验验目目的的不不同同选选择择不不同同种种类类固固定定液液，如如糖糖原原检检查查：不不含含水水的的固固定液；电镜检查：锇酸固定液等；定液；电镜检查：锇酸固定液等；HEHE染色：甲醛。染色：甲醛。固定液：固定液：用以固定组织的药剂。用以固定组织的药剂。固固定定液液分分类类：单单纯纯固固定定液液，由由一一种种药药剂剂组组成成；混混合合固固定定液液（或或复复合合），由二种以上的药剂组成。由二种以上的药剂组成。1 1选择固定液的标准：选择固定液的标准：具具有有强强的的穿穿透透力力，固固定定均均匀匀，能能迅迅速速渗渗透透到到组组织织内内部部使使组组织织细细胞胞结结构构保持生活状态。保持生活状态。不使组织过度收缩与膨胀而变形。不使组织过度收缩与膨胀而变形。能迅速使组织中的蛋白质、糖、脂肪等物质凝固成为不溶性物质。能迅速使组织中的蛋白质、糖、脂肪等物质凝固成为不溶性物质。使组织达到一定的硬度便于切片制作。使组织达到一定的硬度便于切片制作。价格便宜，易价格便宜，易购购买买，配制方便。，配制方便。2单纯固定液单纯固定液 乙乙醇醇（酒酒精精）、甲甲醛醛（福福尔尔马马林林）、重重铬铬酸酸钾钾、苦苦味味酸酸、锇锇酸酸、丙丙酮酮、冰醋酸冰醋酸（1 1）乙醇（酒精）（）乙醇（酒精）（alcoholalcohol）优点：优点：价格低，易购买，易溶于水，使用方便，价格低，易购买，易溶于水，使用方便，9595浓度，无水乙醇浓度，无水乙醇100100；市售有两种：市售有两种：100%100%；95%95%；能硬化组织起固定作用；能硬化组织起固定作用；也是一种最常用的脱水剂。也是一种最常用的脱水剂。固固定定用用浓浓度度在在70708080，酒酒精精浓浓度度愈愈大大组组织织收收缩缩愈愈严严重重，浓浓度度过过低低起起不到固定作用。不到固定作用。缺点：缺点：穿穿透透力力小小，由由于于被被固固定定的的组组织织表表面面硬硬化化，固固定定液液不不容容易易渗渗透透到到组组织织中中去去，所以用乙醇固定的组织材料要小。所以用乙醇固定的组织材料要小。使组织严重收缩。使组织严重收缩。由由于于酒酒精精能能沉沉淀淀白白蛋蛋白白、球球蛋蛋白白和和核核蛋蛋白白，核核蛋蛋白白的的沉沉淀淀物物易易溶溶于于水水，使使细胞核核色不佳。细胞核核色不佳。溶解脂肪、血红蛋白和多种色素，脂肪染色必须制作冰冻切片。溶解脂肪、血红蛋白和多种色素，脂肪染色必须制作冰冻切片。2 2甲醛：（福尔马林）（甲醛：（福尔马林）（formalinformalin）最最常常用用的的固固定定液液，一一种种还还原原剂剂，无无色色透透明明极极易易挥挥发发有有强强烈烈刺刺激激性性气气味味的的液液体体，不不能能与与氧氧化化剂剂混混使使用用。可可应应用用于于组组织织学、组织化学、免疫组织化学等染色，最好用时现配。学、组织化学、免疫组织化学等染色，最好用时现配。商品甲醛：商品甲醛：37374040甲醛水溶液。甲醛水溶液。固固定定液液的的浓浓度度：4 48 8（习习惯惯上上称称为为1010或或2020的的福福尔尔马马林）。林）。固固定定时时间间：常常温温下下固固定定24h24h48h48h。快快速速固固定定，可可加加温温到到70708080或或者者加加温温煮煮沸沸10min10min即即可可。快快速速固固定定，组组织织块块不不宜宜过过厚厚或过大，缺点是组织收缩较严重。或过大，缺点是组织收缩较严重。固固定定液液配配制制：甲甲醛醛1 1份份与与9 9份份自自来来水水混混合合即即为为1010（4%4%）浓浓度度的甲醛固定液。的甲醛固定液。优点：优点：渗透力较强；渗透力较强；组织收缩小；组织收缩小；细胞核染色较好。细胞核染色较好。缺点：缺点：质量较差的质量较差的formalinformalin在低温下久存容易产生一种白色的沉在低温下久存容易产生一种白色的沉淀物称淀物称“三聚甲醛三聚甲醛”（付醛），经氧化成为甲酸而使溶液呈（付醛），经氧化成为甲酸而使溶液呈酸性，影响细胞核染色。可在备用甲醛溶液中放入适量的碳酸性，影响细胞核染色。可在备用甲醛溶液中放入适量的碳酸钙或碳酸镁，简便的办法可在溶液中投入适量的大理石或酸钙或碳酸镁，简便的办法可在溶液中投入适量的大理石或者白色粉笔作为中和剂。者白色粉笔作为中和剂。酸性福尔马林固定的组织多易产生一种褐色或黑色细颗粒酸性福尔马林固定的组织多易产生一种褐色或黑色细颗粒状物，称为福尔马林色素，在切片上形成黑色小颗粒，不溶状物，称为福尔马林色素，在切片上形成黑色小颗粒，不溶于水和酒精，影响染色效果和切片的观察。于水和酒精，影响染色效果和切片的观察。去掉福尔马林色素颗粒方法：去掉福尔马林色素颗粒方法：Schridde法法 25氨水氨水 l ml 75酒精酒精 200 ml 切切片片脱脱蜡蜡经经70酒酒精精时时，用用上上液液浸浸泡泡半半小小时时或或稍稍长长一一些时间，然后水洗再行染色。些时间，然后水洗再行染色。Verocay法法 l氢氧化钾水溶液氢氧化钾水溶液 l ml 70酒精酒精 100 ml 切片脱蜡经酒精切片脱蜡经酒精80时入上液处理时入上液处理10分钟，经分钟，经70酒酒精入水后即可染色。精入水后即可染色。（三）水洗（三）水洗 1 1.用水道流水洗涤，彻底清除组织块中的固定液。用水道流水洗涤，彻底清除组织块中的固定液。2 2.水洗时间数小时至水洗时间数小时至2424小时。小时。3 3.根据材料多少、大小可灵活掌握水洗工具，可用水洗根据材料多少、大小可灵活掌握水洗工具，可用水洗 筐或用纱布包裹，防止水流过大将组织块冲掉或丢失。筐或用纱布包裹，防止水流过大将组织块冲掉或丢失。(四四)脱水脱水 组组织织块块固固定定后后虽虽然然已已经经硬硬化化，但但达达不不到到切切薄薄片片的的硬硬度度，必须制成石蜡组织块，脱水是继固定后的重要步骤。必须制成石蜡组织块，脱水是继固定后的重要步骤。经经固固定定和和水水洗洗后后的的组组织织含含大大量量水水分分，在在这这种种情情况况下下首首先先必必须须除除去去组组织织内内部部的的水水分分，这这种种除除水水的的过过程程叫叫做做脱脱水水，脱脱水使用的药剂称为脱水剂。水使用的药剂称为脱水剂。脱脱水水必必须须逐逐渐渐依依次次从从低低浓浓度度酒酒开开始始到到高高浓浓度度酒酒，否否则则引引起起组组织织强强烈烈收收缩缩，变变脆脆不不利利制制片片。脱脱水水不不彻彻底底也也很很难难浸浸进进石石蜡。蜡。常常用用脱脱水水剂剂：溶溶于于水水和和透透明明剂剂的的试试剂剂，如如酒酒精精、丙丙酮酮、正正丁丁醇醇等。等。（1 1）酒精）酒精步骤：步骤：7070 8080 9090 9595 100100 100100，一般数小时到，一般数小时到1212小时，更换一次酒精。小时，更换一次酒精。配配低低浓浓度度酒酒精精时时，可可用用市市售售9595酒酒精精配配制制。7070酒酒精精：9595酒酒精精70ml70ml加加蒸蒸馏馏水水25ml25ml至至95ml95ml；8080酒酒精精：9595酒酒精精80ml80ml加蒸馏水至加蒸馏水至95ml95ml，依次类推。，依次类推。（2 2）丙酮）丙酮 脱水作用与酒精相似，虽其脱水作用比酒精强，但可引脱水作用与酒精相似，虽其脱水作用比酒精强，但可引起组织块的收缩较，价钱较贵，故不宜用于一般组织脱水，起组织块的收缩较，价钱较贵，故不宜用于一般组织脱水，它即有脱水作用又有透明作用，用丙酮固定的材料要小，脱它即有脱水作用又有透明作用，用丙酮固定的材料要小，脱水水1 18 8小时即可。小时即可。（五）透明（五）透明目目的的：因因为为酒酒精精与与蜡蜡不不能能相相交交换换需需要要借借助助石石蜡蜡诱诱导导剂剂的的媒媒介介作作用用。石石蜡蜡诱诱导导剂剂渗渗入入之之后后组组织织块块往往往往呈呈现现透透明明状状态态，习习惯惯上上将将石石蜡蜡诱诱导导剂剂渗渗入入组组织织内内的的过过程程叫叫透透明明，用用于于透透明明的的试试剂剂称称为为透透明剂。明剂。透透明明时时间间：根根据据组组织织块块的的大大小小而而定定，一一般般2020分分钟钟至至1 1小小时时。组组织织块块过过大大可可延延长长透透明明时时间间，透透明明好好的的材材料料如如同同油油炸炸的的感感觉觉呈呈透透明明状。状。透明剂：透明剂：二甲苯、氯仿、甲苯、香柏油等。二甲苯、氯仿、甲苯、香柏油等。最常用二甲苯最常用二甲苯。二二甲甲苯苯：无无色色透透明明有有机机溶溶媒媒，有有很很强强的的刺刺激激气气味味，易易挥挥发发，长长期期接接触触对对粘粘膜膜有有刺刺激激作作用用，透透明明作作用用很很强强，可可使使组组织织收收缩缩变变形形，透透明明时时间间不不宜宜过过长长。如如遇遇到到组组织织块块内内部部或或某某一一个个部部位位呈呈白白色色混混浊浊状状态态时时说说明明脱脱水水不不彻彻底底，如如果果造造成成透透明明不不彻彻底底应应退退回回到到100100酒精中重新透明。酒精中重新透明。六、浸蜡与包理：六、浸蜡与包理：浸浸蜡蜡的的目目的的：为为了了能能制制作作薄薄切切片片做做准准备备，将将透透明明好好的的组组织织块块浸浸到到融融化化的的石石蜡蜡中中，使使石石蜡蜡渗渗透透到到组组织织细细胞胞内内，将将组组织织细细胞胞内内的的二二甲甲苯苯完完全全彻彻底底地地取取代代出出来来，再再用用石石蜡蜡将将组组织织包包埋埋，冷冷却却后后，切切成成小小块，修整好切面，这一过程为浸蜡与包埋。块，修整好切面，这一过程为浸蜡与包埋。具体操作：具体操作：（一）浸蜡（一）浸蜡石石蜡蜡箱箱温温度度5860左左右右，内内有有标标明明、的的蜡蜡杯杯或或蜡蜡缸缸，从从透透明明的的二二甲甲苯苯取取出出组组织织块块，放放入入号号蜡蜡杯杯中中2h3h，再再将将组组织织块块移移入入号号蜡蜡杯杯（纯纯蜡蜡）2h4h，再再移移入入号号蜡蜡杯杯中中（纯纯蜡蜡）半半天天或或者者稍稍降降蜡蜡箱箱温温度度过过夜夜，最最后后用融化的纯蜡作为包埋用的蜡。用融化的纯蜡作为包埋用的蜡。注注意意：浸浸蜡蜡时时蜡蜡杯杯不不要要颠颠倒倒顺顺序序使使用用，以以免免脱脱二二甲甲苯苯不不彻彻底底。如如遇遇特特殊殊情情况况需需要要延延长长浸浸蜡蜡时时间间时时可可降降低低蜡蜡箱箱温温度度或或关关闭闭蜡蜡箱箱，需需要要时时再再开开。温温度度越越高高，时时间间越越长长组组织织块收缩越严重，而且材料脆而不易制作切片。块收缩越严重，而且材料脆而不易制作切片。（二）包埋：（二）包埋：包包埋埋方方法法：石石蜡蜡包包埋埋法法、火火棉棉胶胶包包埋埋法法、炭炭蜡蜡包包埋埋法法、明明胶胶包埋法、环氧树脂包埋法（电镜用）等。包埋法、环氧树脂包埋法（电镜用）等。步步骤骤：纯纯石石蜡蜡溶溶解解后后（60）倒倒入入包包埋埋框框内内或或纸纸盒盒内内，迅迅速速将将浸浸好好的的组组织织块块的的切切面面向向下下、放放平平，依依次次摆摆入入框框内内，待待蜡蜡逐逐渐渐冷冷却却凝凝固固后后，将将组组织织材材料料凝凝结结在在石石蜡蜡内内。然然后后按按组组织织块块大大小切成蜡块，组织四周蜡边留小切成蜡块，组织四周蜡边留0.1厘米左右即可。厘米左右即可。注注意意：如如果果操操作作不不熟熟练练或或在在冬冬天天包包埋埋时时最最好好用用酒酒精精灯灯。在在材材料料包包入入石石蜡蜡之之前前，稍稍在在酒酒精精灯灯上上过过一一下下加加温温，以以免免材材料料与与包包埋埋蜡蜡温温度度不不符符造造成成材材料料与与包包埋埋蜡蜡间间遗遗留留缝缝隙隙，切切片片时时产产生生分分离现象。离现象。蜡蜡块块背背面面要要标标记记例例号号等等字字样样的的纸纸片片，以以长长期期保保存存。切切完完的的蜡蜡块块表表面面要要用用烫烫片片板板，烫烫一一下下封封闭闭材材料料面面，隔隔离离空空气气接接触触可长期保存材料不干。可长期保存材料不干。（三）蜡的种类：（三）蜡的种类：1蜂蜂蜡蜡：是是动动物物体体内内提提取取的的蜡蜡，颜颜色色微微黄黄故故也也称称为为黄黄蜡蜡，溶溶点点在在54左左右右。特特点点是是润润滑滑带带有有粘粘性性，冬冬天天用用量量比比夏夏天天多。多。2石石蜡蜡：是是由由矿矿物物质质中中提提取取，质质地地较较疏疏松松，色色白白。根根据据蜡蜡的溶点不同又可分为软蜡及硬蜡。的溶点不同又可分为软蜡及硬蜡。软软蜡蜡：50以以下下的的石石蜡蜡。硬硬蜡蜡：溶溶点点在在50以以上上的的石石蜡蜡。两两种种蜡蜡可可以以混混合合在在一一起起使使用用。石石蜡蜡熔熔点点有有5254，5658，5860，6062。七、切片七、切片工工具具：切切片片刀刀、磨磨刀刀机机、切切片片机机、水水浴浴锅锅，干干燥燥箱箱等等；载载薄薄片片、手手术术刀刀、毛毛笔笔、弯弯镊镊子子、托托盘盘、大大平平皿皿（展展片片使使用用）、烤片盒、蛋白甘油等。、烤片盒、蛋白甘油等。（一一）切切片片机机种种类类：轮轮转转式式切切片片机机、滑滑行行式式切切片片机机（滑滑动动式）、冰冻切片机、超薄切片机等（电镜用）。式）、冰冻切片机、超薄切片机等（电镜用）。（二二）构构造造：由由四四个个基基本本部部分分组组成成：刀刀台台、标标本本台台、旋旋转转轮轮、控控制制切切片片厚厚度度的的微微动动装装置置（标标有有 l25或或150的的数数字字，每每一一数数字字代代表表一一个个微微米米）。根根据据需需要要调调节节厚厚度度，一一般般采采用用5m7m。蛋蛋白白甘甘油油：用用鸡鸡蛋蛋清清（不不要要鸡鸡蛋蛋黄黄）用用玻玻璃璃棒棒充充分分搅搅拌拌后后用数层纱布过滤后加等量的甘油搅均匀加数颗麝香草酚。用数层纱布过滤后加等量的甘油搅均匀加数颗麝香草酚。（三）切片制作（三）切片制作1将洁净的载薄片涂薄层蛋白甘油放人烤片盒内待用。将洁净的载薄片涂薄层蛋白甘油放人烤片盒内待用。2将将切切割割修修整整好好的的蜡蜡块块用用普普通通刀刀片片先先将将蜡蜡块块的的组组织织切切面面暴暴露露出出来修平，固定在切片机上的标本台上并拧紧螺旋。来修平，固定在切片机上的标本台上并拧紧螺旋。3蜡蜡块块先先固固定定在在标标本本台台上上切切片片刀刀固固定定于于刀刀台台上上，拧拧紧紧固固定定刀刀的的螺螺丝丝同同时时调调整整刀刀与与蜡蜡块块的的切切片片距距离离使使刀刀与与蜡蜡块块贴贴紧紧后后再再固固定定刀刀台螺丝，刀的角度为台螺丝，刀的角度为25度角。度角。4调节微动装置，调至切片所需厚度（一般为调节微动装置，调至切片所需厚度（一般为 5m7m）。）。5修修材材。右右手手握握旋旋转转轮轮摇摇把把按按顺顺时时针针方方向向均均匀匀地地摇摇动动直直到到组组织织块切面完整暴露为止。块切面完整暴露为止。（四）展片（四）展片 水水浴浴锅锅上上平平皿皿内内水水温温升升至至45左左右右，将将已已切切好好的的连连续续薄薄片片切切分分成成数数片片，放放在在水水面面，轻轻漂漂，水水中中展展平平，未未展展平平时时可可用用小小弯弯镊镊子子轻轻轻轻展展开开，然然后后用用涂涂有有蛋蛋白白甘甘油油的的载载片片在在水水中选择完整的切片进行捞片。中选择完整的切片进行捞片。（五）注意事项（五）注意事项 1切切片片刀刀要要锋锋利利，否否则则切切片片有有切切痕痕或或组组织织破破碎碎，甚甚至至不不能能制成切片。制成切片。2展展切切片片时时水水温温要要适适当当，水水温温低低，展展不不平平切切片片，切切片片有有皱皱折，影响效果；如果水温过高，切片入水后可发生溶化折，影响效果；如果水温过高，切片入水后可发生溶化。实习四法医病理学实习四法医病理学 组织切片染色组织切片染色目的要求：目的要求：掌握切片染色、封片等技术及操作过程。掌握切片染色、封片等技术及操作过程。一、染色前准备工作一、染色前准备工作1染染色色：准准备备的的工工具具：染染色色缸缸或或者者12个个盛盛各各种种不不同同浓浓度度的的酒酒精精染染色色筐筐广广口口瓶瓶，染染色色缸缸及及脱脱蜡蜡、透透明明用用的的各各二二个个二二甲甲苯苯染染色缸，盖片，带磨口盖树胶瓶一个，镊子色缸，盖片，带磨口盖树胶瓶一个，镊子1把。把。2染色需要的试剂及染色液的配制：染色需要的试剂及染色液的配制：0.51盐酸盐酸酒精：酒精：用于细胞核染色分色。用于细胞核染色分色。配配制制：100ml的的7080酒酒精精中中加加人人0.5ml或或者者1ml的的浓浓盐酸。盐酸。苏木素（苏木素（hematoxylin）及伊红（）及伊红（eosin）苏苏木木素素：细细胞胞核核的的染染料料，氧氧化化后后的的苏苏木木素素具具有有染染色色能能力力的的。苏苏木木素素的的配配方方：二二种种，一一是是自自然然氧氧化化的的苏苏木木素素；二二是是加加入氧化剂加速氧化的。入氧化剂加速氧化的。3苏木素的配方苏木素的配方自然氧化（自然氧化（Ehrlieh）苏木素：）苏木素：苏木精苏木精 2g 铵明矾铵明矾 3g 无水酒精无水酒精 100ml 甘油甘油 100ml 蒸馏水蒸馏水 100ml 将上述药品配在一起后装入玻璃瓶中，瓶口罩上数将上述药品配在一起后装入玻璃瓶中，瓶口罩上数层纱布以防灰尘落入染液，暴露于阳光中或空气中自然层纱布以防灰尘落入染液，暴露于阳光中或空气中自然氧化（成熟过程），约氧化（成熟过程），约6周周8周以上，染液配制越久其周以上，染液配制越久其染色能力越强，可以一次大量配制以备用。染色能力越强，可以一次大量配制以备用。自然氧化（自然氧化（Delafield）苏木素：）苏木素：苏木素苏木素 4g 无水酒精无水酒精 25ml 铵明矾饱和水溶液铵明矾饱和水溶液 400ml铵铵明明矾矾饱饱和和水水溶溶液液配配法法：10铵铵明明矾矾水水溶溶液液，或或1份份铵铵明明矾加蒸馏水矾加蒸馏水11份。份。配配制制过过程程：苏苏木木素素溶溶入入酒酒精精后后，加加入入铵铵明明矾矾液液，倒倒入入玻玻璃璃瓶瓶中中敞敞开开瓶瓶口口，罩罩以以数数层层纱纱布布，置置光光线线充充足足处处3 5天天后后过过滤滤，再再加加入入甘甘油油100ml、甲甲醇醇100ml。置置光光线线充充足足处处经经l.52个个月月后后成成熟熟。染染液液可可保保存存多多年年，染染色色时时多多采采用用蒸蒸馏水稀释的染色液。馏水稀释的染色液。加氧化剂的苏木素配制加氧化剂的苏木素配制 Harris苏木素：苏木素：液液 苏木精苏木精 l g 无水酒精无水酒精 10 ml 液液 钾（铵）明矾钾（铵）明矾 20 g 蒸馏水蒸馏水 200 ml 氧化汞氧化汞 0.5 g 冰醋酸冰醋酸 8 ml配配制制方方法法：先先将将液液用用玻玻璃璃棒棒搅搅拌拌使使苏苏木木素素溶溶解解，再再将将液液煮煮沸沸溶溶化化去去火火，速速加加入入液液，再再加加火火，煮煮沸沸后后去去火火，立立即即加加入入氧氧化化汞汞0.5g，再再煮煮沸沸，迅迅速速冷冷却却后后加加入入冰冰醋醋酸酸8ml过过滤滤使使用，组织学常用染色液。用，组织学常用染色液。4伊红（伊红（eosin）最常用的细胞质染料之一，外观为红色粉末。分两种：最常用的细胞质染料之一，外观为红色粉末。分两种：酒溶性伊红；水溶性伊红酒溶性伊红；水溶性伊红。配法：配法：0.5水溶性伊红水溶性伊红 伊红伊红0.5g+蒸馏水蒸馏水100ml，溶解后使用。，溶解后使用。0.5酒精溶性伊红酒精溶性伊红 伊红伊红0.5g+70酒精酒精100ml，溶解后使用。，溶解后使用。一一般般病病理理组组织织学学切切片片染染色色，染染细细胞胞核核用用苏苏木木素素，染染细细胞胞质质用用伊伊红红，故故一一般般称称这这种种染染色色法法为为HE染染色色（苏苏木木素素伊伊红染色法）。红染色法）。二、染色方法及步骤二、染色方法及步骤1.脱蜡：二甲苯脱蜡：二甲苯10min20min；二甲苯；二甲苯10min 20min。2脱苯：脱苯：100无水乙醇脱苯无水乙醇脱苯2min5min；100无水乙醇无水乙醇2min5min。3水水化化：95酒酒精精90酒酒精精80酒酒精精70酒酒精精各各数数秒秒至至 1min，水水浸洗数分钟。浸洗数分钟。4染细胞核：切片移入苏木素染液中染染细胞核：切片移入苏木素染液中染10min20min。5水洗（水洗一下将浮在表面的染液去掉）。水洗（水洗一下将浮在表面的染液去掉）。6分化：分化：l盐酸酒精分化时间数秒钟，观察切片组织材料呈粉红色。盐酸酒精分化时间数秒钟，观察切片组织材料呈粉红色。7水水洗洗：水水道道流流水水洗洗0.5数数小小时时，切切片片从从粉粉红红色色转转变变为为鲜鲜艳艳的的蓝蓝色色（蓝蓝化过程）。化过程）。8染细胞质：染细胞质：0.5或或l伊红溶液复染伊红溶液复染1min5min。9脱脱水水：切切片片脱脱水水由由低低浓浓度度酒酒到到高高浓浓度度酒酒精精。将将切切片片入入70酒酒精精809095。切切片片在在酒酒精精内内几几秒秒钟钟，时时间间长长，伊伊红红易易脱脱色色。应应注注意意伊红与苏木素的对比染色的色调适合。伊红与苏木素的对比染色的色调适合。10.脱水：脱水：100酒精酒精5min10min；100酒精酒精 5min10min11.透明：入二甲苯透明：入二甲苯2min5min；二甲苯；二甲苯2min5min。三、封片与染色结果三、封片与染色结果 用用中中性性树树胶胶进进行行封封固固切切片片，细细胞胞核核经经苏苏木木素素染染成成鲜鲜艳艳的蓝色，细胞质核仁、肌纤维、胶原纤维、红细胞等呈红色。的蓝色，细胞质核仁、肌纤维、胶原纤维、红细胞等呈红色。HE染染色色简简化化程程序序：（脱脱蜡蜡、水水化化）二二甲甲苯苯二二甲甲苯苯无无水水酒酒精精无无水水酒酒精精95908070水水洗洗苏苏木木素素染染色色（染染细细胞胞核核）（10min20min）自自来来水水洗洗一一下下1盐盐酸酸酒酒精精分分化化自自来来水水洗洗（核核分分化化）伊伊红红染染色色（染染细细胞胞质质）直直接接脱脱水水70809095（各各稍稍停停片片刻刻）100100（彻彻底底脱脱水水）透透明明，二二甲甲苯苯二甲苯二甲苯，中性树胶封片。，中性树胶封片。常规涂片染色的操作方法：常规涂片染色的操作方法：基本与石蜡切片染色程序一样。基本与石蜡切片染色程序一样。不同点：固定液不同，操作时间短。不同点：固定液不同，操作时间短。步步骤骤：涂涂片片自自然然干干燥燥或或加加温温干干燥燥后后甲甲醇醇固固定定，待待固固定定液液干干燥燥后后，苏苏木木素素染染色色2min5min水水洗洗一一下下去去浮浮色色1盐盐酸酸酒酒精分化（浸精分化（浸12次）次）流水洗切片（流水洗切片（5min以上）。以上）。伊伊红红染染色色2min5min脱脱水水：70酒酒精精809095各各数数秒秒，100100各各稍稍停停片片刻刻（彻彻底底脱脱水水）透透明明：二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯，中性树胶封片。，中性树胶封片。四、两种常用的特殊染色方法四、两种常用的特殊染色方法 （一）（一）Mallory染色染色 配方：配方：酸性复红酸性复红 3克克 苯胺兰苯胺兰 1克克 桔黄桔黄G 3克克 磷钼酸磷钼酸 1克克 蒸馏水蒸馏水 200ml染色方法：染色方法：1石蜡切片常规脱蜡至水。石蜡切片常规脱蜡至水。2入入3重重铬铬酸酸钾钾媒媒染染12h24h，如如果果固固定定的的材材料料含含升升汞可省此步骤，但需脱汞。汞可省此步骤，但需脱汞。3蒸馏水洗二次。蒸馏水洗二次。4入入Mallory染色液中染染色液中染5min。5.蒸馏水洗。蒸馏水洗。695酒精分化约酒精分化约3min5min，显微镜下控制染色程度。，显微镜下控制染色程度。7100、100酒精脱水。酒精脱水。8二甲苯二甲苯、二甲苯、二甲苯透明。透明。9树胶封片。树胶封片。结结果果：胶胶原原纤纤维维及及粘粘液液呈呈深深蓝蓝色色，红红细细胞胞呈呈红红黄黄色色，肌组织呈红色，弹力纤维呈玫瑰红色。肌组织呈红色，弹力纤维呈玫瑰红色。Contused myocardial fibers stained by Mallorys trichrome method （二）（二）Weigert染色（弹力纤维染色法）染色（弹力纤维染色法）配方：配方：盐基品红盐基品红 2g 间苯二酚间苯二酚 4g 蒸蒸 馏馏 水水 200ml 配配制制方方法法：将将上上述述药药品品一一起起放放入入烧烧杯杯内内，加加热热煮煮沸沸，再再加加29FeCl3水水溶溶液液25ml，用用玻玻璃璃棒棒搅搅匀匀，继继续续煮煮沸沸2min5min，冷冷却却后后过过滤滤。倾倾去去滤滤液液不不用用，将将滤滤纸纸及及沉沉淀淀物物一一同同放放入入烧烧杯杯内内，放放在在干干燥燥箱箱内内烘烘干干，取取出出加加 95酒酒精精200ml，加加水水煮煮至至沉沉淀淀物物溶溶尽尽，拿拿出出滤滤纸纸冷冷却却后后过过滤滤并并补补足足蒸蒸发发失失去去的的酒精，最后加入浓盐酸酒精，最后加入浓盐酸4ml即可，此液可保留数月。即可，此液可保留数月。染色方法：染色方法：1切片脱蜡至酒精。切片脱蜡至酒精。2Weigert氏液染色氏液染色20min60min。3用用95酒精洗去剩余染液，在显微镜下观察结构细节，酒精洗去剩余染液，在显微镜下观察结构细节，不清晰时可用不清晰时可用1盐酸酒精分化。盐酸酒精分化。4自来水洗。自来水洗。5以以l中性红做对比染色或用明矾苏木素染后，再用稀释中性红做对比染色或用明矾苏木素染后，再用稀释伊红或用伊红或用Van Gieson液染色。液染色。6用用95酒精分化，无水酒精脱水。酒精分化，无水酒精脱水。7二甲苯二甲苯、透明。透明。8树胶封片。树胶封片。结果：结果：弹力纤维显示兰黑色。用中性红做对比染色，肌组织弹力纤维显示兰黑色。用中性红做对比染色，肌组织 呈红色。呈红色。Elastic fibers Collagen and elastic system in the remodelling process ofmajor types of idiopathic interstitial pneumonias(IIP)Histopathology 2005,46,413421