化妆品中金黄色葡萄球菌检测.ppt

化妆品中金黄色葡萄球菌检测组别：第六组组别：第六组 成员：钱龙成员：钱龙 朱凯朱凯 许祥博许祥博 林志豪林志豪简介金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)(Staphyloccocus aureus)是人类的一种是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（StaphylococcusStaphylococcus），有），有“嗜肉菌嗜肉菌 的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量，卫生感染。而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量，卫生部于部于20112011年年1111月月2424日公布食品安全国家标准速冻面米制品日公布食品安全国家标准速冻面米制品，允许金葡菌限量存在。，允许金葡菌限量存在。流行病学金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的机会很和动物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的机会很多。美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染多。美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的中毒，占整个细菌性食物中毒的33%33%，加拿大则更多，占到，加拿大则更多，占到45%45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。引发病症金黄色葡萄球菌肠炎是金黄色葡萄球菌引起的，多因原发疾金黄色葡萄球菌肠炎是金黄色葡萄球菌引起的，多因原发疾病长期用抗生素引起肠道菌群失调所致，抗生素敏感菌株受病长期用抗生素引起肠道菌群失调所致，抗生素敏感菌株受到抑制，耐药的金黄色葡萄球菌株趁机繁殖。金黄色葡萄球到抑制，耐药的金黄色葡萄球菌株趁机繁殖。金黄色葡萄球菌为侵袭性细菌，能产生毒素，对肠道破坏性大，所以金黄菌为侵袭性细菌，能产生毒素，对肠道破坏性大，所以金黄色葡萄球菌肠炎起病急，中毒症状严重，主要表现为呕吐、色葡萄球菌肠炎起病急，中毒症状严重，主要表现为呕吐、发热、腹泻。呕吐常在发热前出现，发热很高。轻症大便次发热、腹泻。呕吐常在发热前出现，发热很高。轻症大便次数稍多，为黄绿色糊状便；重症大便次数频数，每日可达数数稍多，为黄绿色糊状便；重症大便次数频数，每日可达数十次，大便呈暗绿色水样便，外观像海水，所以叫海水样便。十次，大便呈暗绿色水样便，外观像海水，所以叫海水样便。粘液多，有腥臭味，有时可排出片状伪膜，将伪膜放入生理粘液多，有腥臭味，有时可排出片状伪膜，将伪膜放入生理水，脱落的肠粘膜即漂在水面上，对诊断帮助很大。体液损水，脱落的肠粘膜即漂在水面上，对诊断帮助很大。体液损失多，患儿脱水、电解质紊乱和酸中毒严重，可发生休克。失多，患儿脱水、电解质紊乱和酸中毒严重，可发生休克。挑选大便粘液部分涂片，在显微镜下检查可见大量脓细胞，挑选大便粘液部分涂片，在显微镜下检查可见大量脓细胞，如经革兰氏染色，显微镜检查可见成堆的大量革兰氏阳性球如经革兰氏染色，显微镜检查可见成堆的大量革兰氏阳性球菌。大便培养金黄色葡萄球菌生长，即可明确诊断。菌。大便培养金黄色葡萄球菌生长，即可明确诊断。1.方法提要 根据本菌特有的形态及培养物质性，应用根据本菌特有的形态及培养物质性，应用Baird ParkerBaird Parker平板进行分离，该平板中的氯化锂可抑制革兰氏阴性细菌生平板进行分离，该平板中的氯化锂可抑制革兰氏阴性细菌生长，丙酮酸钠可刺激金黄色葡萄球菌生长，以提高检出率，长，丙酮酸钠可刺激金黄色葡萄球菌生长，以提高检出率，并利用分解甘露醇和血浆凝固酶等特征，以兹鉴别。并利用分解甘露醇和血浆凝固酶等特征，以兹鉴别。2.7.5的氯化钠肉汤成分：蛋白胨成分：蛋白胨 10g 10g牛肉膏牛肉膏 3g 3g氯化钠氯化钠 75g 75g蒸馏水蒸馏水 1000ml 1000ml制法：将上述成分加热溶解，调制法：将上述成分加热溶解，调pHpH为为7.47.4，分装，分装，121(15 121(15 1b)15min1b)15min高压灭菌。高压灭菌。3.血琼脂培养基成分：营养琼脂成分：营养琼脂 100ml 100ml脱纤维羊血脱纤维羊血(或兔血或兔血)10ml)10ml制法：将营养琼脂加热溶化，待冷至制法：将营养琼脂加热溶化，待冷至5050左右以左右以 无菌手无菌手续加入脱纤维羊血，摇匀，制成平板，置冰箱内备用。续加入脱纤维羊血，摇匀，制成平板，置冰箱内备用。4.甘露醇发酵培养基成分：成分：蛋白胨蛋白胨 10g 10g氯化钠氯化钠 5g 5g甘露醇甘露醇 10g 10g牛肉膏牛肉膏 5g 5g0.20.2溴麝香草酚蓝溶液溴麝香草酚蓝溶液 12ml 12ml蒸馏水蒸馏水 1000ml 1000ml制法：制法：将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏加到蒸馏水中，加热溶将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏加到蒸馏水中，加热溶解，调解，调pH7.4pH7.4，加入甘露醇和指示剂，混匀后分装试管中，加入甘露醇和指示剂，混匀后分装试管中，115(10 1b)20min115(10 1b)20min灭菌备用。灭菌备用。5.兔血浆制备 取取3.83.8柠檬酸钠溶液柠檬酸钠溶液121(15 1b)30min121(15 1b)30min灭菌灭菌1 1份份加兔全血加兔全血4 4份，混匀静置，份，混匀静置，200020003000r/min3000r/min离心离心3 35min5min。血球下沉，取上面血浆。血球下沉，取上面血浆。6.设备和材料6.16.1显微镜。显微镜。6.2 6.2 培养箱。培养箱。6.3 6.3 离心要。离心要。6.4 6.4 灭菌吸管：灭菌吸管：1ml1ml，5ml5ml，10ml10ml。6.5 6.5 灭菌试管。灭菌试管。6.6 6.6 载玻片。载玻片。6.7 6.7 酒精灯。酒精灯。7.操作步骤7.1 7.1 增菌：取增菌：取1 1：1010稀释的样品稀释的样品10ml10ml接种到接种到90mlSCDLP90mlSCDLP液体培液体培养基中养基中(如无此培养基也可用如无此培养基也可用7.57.5氯化钠肉汤氯化钠肉汤)，置，置3737培培养箱，养箱，培养培养24h24h。注：如无此培养基也可用注：如无此培养基也可用7.57.5氯化钠肉汤，检验含防腐剂氯化钠肉汤，检验含防腐剂的化妆品时，可在的化妆品时，可在 1000ml 1000ml此培养基中加此培养基中加1g1g卵磷脂、卵磷脂、7g7g吐温吐温8080。7.2分离 自上述增菌培养液中，取自上述增菌培养液中，取1 12 2接种环，划线接种到接种环，划线接种到血琼脂平板，置血琼脂平板，置3737培养培养24244848。在血琼脂平板上菌落呈金。在血琼脂平板上菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置3737培养培养24H24H。7.3 染色镜检 挑取分纯菌落，涂挑取分纯菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检。片，进行革兰氏染色，镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无芽性菌，排列成葡萄状，无芽胞，无夹膜，致病性葡萄球胞，无夹膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为菌，菌体较小，直径约为0.50.51m1m。7.4 甘露醇发酵试验 取述分纯菌落接种到甘取述分纯菌落接种到甘露醇发酵培养基中，置露醇发酵培养基中，置3737培养培养24h24h，金黄色葡萄球菌，金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇产酸。应能发酵甘露醇产酸。7.5 血浆凝固酶试验7.5.17.5.1玻片法玻片法 取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴灭菌生理盐水，另取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴灭菌生理盐水，另一端滴加一滴血浆，用接种环挑取待检菌落，分别在生理盐一端滴加一滴血浆，用接种环挑取待检菌落，分别在生理盐水及血浆中充分研磨混合。血浆与菌苔混悬液在水及血浆中充分研磨混合。血浆与菌苔混悬液在5min5min内出现内出现团块或颗粒状凝块时，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固现象者团块或颗粒状凝块时，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固现象者为阳性，如两者均无凝固现象则为阴性。凡玻片试验呈阴性为阳性，如两者均无凝固现象则为阴性。凡玻片试验呈阴性反应或盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试反应或盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验。验。7.5.2 7.5.2 试管法试管法 吸取吸取1 1：4 4新鲜血浆新鲜血浆0.5ml0.5ml，放入灭菌小试管中，再加入，放入灭菌小试管中，再加入待检菌待检菌24h24h肉汤培养物肉汤培养物0.5ml0.5ml。混匀，放。混匀，放3737温箱或水浴中，温箱或水浴中，每半小时观察一次，每半小时观察一次，24h24h之内如呈现凝块即为阳性。同时以之内如呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各0.5ml 10.5ml 1：4 4血浆混匀，做为对照。血浆混匀，做为对照。8.检验结果报告 凡在上述选择平板上凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸。球菌，并能发酵甘露醇产酸。血浆凝固酶试验阳性者，可血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。萄球菌。检验报告1 1）按常规程序检验，凡分离出革兰氏）按常规程序检验，凡分离出革兰氏阳性葡萄球菌的疑似菌落，经证实可发阳性葡萄球菌的疑似菌落，经证实可发酵甘露醇、血浆凝固酶阳性的菌株，可酵甘露醇、血浆凝固酶阳性的菌株，可报告检出金黄色葡萄球菌。报告检出金黄色葡萄球菌。2 2）如果分离的疑似菌落不发酵甘露醇，）如果分离的疑似菌落不发酵甘露醇，但血浆凝固酶阳性也可断定为检出金黄但血浆凝固酶阳性也可断定为检出金黄色萄葡球菌。色萄葡球菌。3 3）分离出的葡萄球菌疑似菌落，不发）分离出的葡萄球菌疑似菌落，不发酵甘露醇、血浆凝固醇阴性，判断未检酵甘露醇、血浆凝固醇阴性，判断未检出金黄色葡萄球菌。在此添加段落内容出金黄色葡萄球菌。在此添加段落内容Content2 21 1Thank you!Thank you!Thank you!Thank you!后面内容直接删除就行后面内容直接删除就行资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用主要经营：网络软件设计、图文设计制作、主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等发布广告等公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！到让客户满意！致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPTPPT设计、计划书、策划案、学习课件、各设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求类模板等方方面面，打造全网一站式需求The user can demonstrate on a projector The user can demonstrate on a projector or computer,or print the presentation or computer,or print the presentation and make it into a film to be used in a and make it into a film to be used in a wider fieldwider field