《医用合成药物分析》.ppt

四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院合成药毒物合成药毒物四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院合成药毒物 概念 合成药毒物指那些通过人工化学合成，用于临 床治疗，但如果使用不当或过量也可造成中毒 甚至死亡的化合物。种类 此类化合物非常多，常见的有：安眠镇静药、抗精神病药、解热镇痛药、兴奋药以及麻醉药 等。性状 纯品多为白色固体粉末，易溶于有机溶剂，分 离提取以有机溶剂提取为主，属于非挥发性有 机毒物或有机浸出毒物。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院非挥发性毒物的分离提取方法四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院有机溶剂提取法（萃取法extraction)原理 利用非挥发性有机毒物在有机溶剂中有较大溶解度的性质，通过振摇浸泡和过滤或通过萃取，将检材中的毒物转移到有机溶剂中去，从而达到分离提取的目的。故非挥发性有机毒物又称“有机浸出毒物”。方法 直接提取法 液液萃取法 四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院直接提取法（浸取法）方法 检材加有机溶剂浸泡或振摇，过滤，滤液直接或浓 缩后供检。特点 a.简便、快速、提取率较高。b.提取杂质较多。适用检材 a.固体或半固体检材 b.成分简单（复杂的需净化）四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院液液萃取法（1）（liquid-liquid extraction,LLE)原理 利用溶质在两种互不相溶的溶剂中溶解度大小的差异，可使之从一种溶剂中转移到另一种溶剂中去。通常将溶质从水相转移到有机相的过程称为“萃取”；将溶质从有机相转移到水相的过程称为“反萃取”。利用萃取或反萃取可将毒物从检材中分离提取出来或对提取液进一步净化，还可对混合毒物进行分离。萃取 反萃取 乙醚 酸水 水相 氯仿 四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院液液萃取法（LLE)（2）分配比（分配比（distribution distribution coefficient,Dcoefficient,D)一种毒物是否能被萃取或反萃取，主要由其在两相中的分配比决定。CO (W W1)/VO CO VO 有机相D =W-W1 CA W1/VA CA VA W1 水相D值随温度、浓度、酸碱性变。在一定条件下，D值可看成定值。同一溶剂中，D值越大，在有机溶剂中的溶解度越大。一种毒物在不同溶剂系统中的D值不同（选提取溶剂 ）。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院液液萃取法（LLE)（3）VA n 萃取率 fn=1 -VA+DVO D值越大，越有利于萃取；反之，越利于反萃取。D值一定时，增加萃取溶剂体积可提高萃取率。萃取溶剂体积一定时，增加萃取次数可提高萃取率四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院液液萃取法（LLE)（4）萃取方式 适用 情况 装置一次萃取 含量高 D值大 定性 分液漏斗 试管多次萃取 含量较低 D值较小 定量 分液漏斗 试管连续萃取 D值特别小 易乳化 连续萃取装置四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院连续液液萃取法 连续萃取原理 利用萃取溶剂自身的重力和静压力，在无需振摇的情况下，使两种比重不同、互不相溶的的液体充分接触，通过溶质在两相中的重新分配达到萃取的目的。特点 无需振摇，避免乳化。节约溶剂，引入杂质少，易浓缩。省力不省时。适用于D值特别小的毒物。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院连续液液萃取装置 轻液提取器 重液提取器 1检材 2萃取溶剂 3冷凝管四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院液液萃取法的应用应用 a.直接从液体检材中分离提取有机毒物。b.对直接提取法所得的有机提取液进行净化，方 法有反提法（反萃取）和洗涤法。c.根据极性或酸碱性不同，可分离混合毒物。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院提高溶剂提取率的措施关键 增大毒物在提取溶剂中的分配比。方法 A.调节酸碱性 a.增大毒物在提取溶剂中的溶解度。b.应注意避免毒物分解。B.无水硫酸钠脱水 a.增加毒物在提取溶剂中的溶解量（半流体检材 固化）。b.减少有机萃取液中水溶性杂质的引入。c.避免乳化。C.选择合适的提取溶剂 a.对毒物的溶解度大，对杂质的溶解度小。b.分析目的不明确时，选溶解范围宽的。c.毒性小，易浓缩。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院酸碱性的调节用有机溶剂提取毒物时酸性药毒物酸性碱性药毒物碱性中性药毒物各种pH均可两性药毒物等电点对含酯、酰胺等不稳定结构的化合物，调酸碱性不可过强，以免分解。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院分离提取前处理方法 用有机溶剂提取法或固相萃取法分离提取生物检材中的有机毒物时，为了避免杂质干扰以后的分析工作或提高分离提取效率，常在提取之前，先对检材进行适当处理，最常用的方法有除去蛋白和水解结合物。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院除去蛋白质检材 血、肝匀浆等含蛋白质较多的检材。目的避免对后续检测方法产生干扰，影响分析结 果的可靠性和准确性。保护仪器，减少对仪器的污染和损坏。减轻液液萃取时产生的乳化现象。方法 使蛋白质变性、凝聚或生成不溶性盐而沉 淀，通过过滤或离心除去。其它超速离心、微孔滤膜超滤、平衡透析等。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院常用沉淀蛋白试剂 试 剂 常 用 机 理 适 用 强极性 甲醇 乙醇 强亲水作用，破坏蛋白 应用范围广，有机溶剂 乙腈 表面水化膜，同时抑制 绝大多数毒物 蛋白解离，使蛋白凝聚 可直接进仪器 三氯醋酸 低于等电点pH，带正电 酸、中性毒物 无机酸 高氯酸 荷的蛋白与酸根形成不 碱性毒物慎用 钨酸 溶性盐。对ECD有干扰 硫酸锌 高于等电点pH，带负电 避免用于可能金属离子 汞、铜盐 荷的蛋白与金属离子形 含金属毒物的 成不溶性盐。检材 高浓度 硫酸铵 盐析作用，蛋白脱水 各类毒物 无机盐 硫酸钠 加热可促进蛋白沉淀 对热不稳定的慎 用四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院沉淀蛋白反应与酸根成盐 COO-2H+COOH WO42-COOH 2Pr 2Pr (Pr )2 WO4 NH3+NH3+NH3+与金属离子成盐 COO-OH-COO-Zn2+COOZn/2 2Pr Pr Pr NH3+NH2 NH2四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院水解结合物 检材 毒物与体内蛋白质、葡萄糖醛酸、硫酸等 结合率较高、提取率低的生物检材。目的 使结合的药毒物解离，提高提取率。方法 利用强酸或酶对结合物进行水解。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院常用水解方法方法 酸 水 解 酶 水 解 葡萄糖醛酸甙试剂 盐酸 加热 硫酸酯酶 胃蛋白酶 胰蛋白酶等 温度低 作用温和 优点 试剂价廉 简便快速 水解专一 毒物破坏少 水解液净化度好 水解专一性不强 水解时间较长缺点 有些毒物可被破坏 水解液杂质多适用 性质稳定、目的明确 各种毒物四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院分离提取液的净化目的 进一步除去提取样品液中的脂肪、蛋 白质、色素等杂质，尽可能排除杂质 对后续检测的干扰，减少对仪器的污 染和损害。方法 液液萃取法（反提法和洗涤法）吸附柱法 薄层色谱法四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院反提法方法 用酸水液或碱水液对有机提取液进行反萃取，使药毒物转变成极性较大的盐而溶于水相，将极性相对较小和中性的杂质留在有机溶剂中。适合毒物 酸性药毒物碱水液反提 碱性药毒物酸水液反提注意事项 对有些有机碱性毒物，不宜从氯仿溶剂中反萃取。酸碱液浓度不宜过高，以免毒物分解。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院洗涤法 方法 用稀酸液或稀碱液对有机提取液进行处理，使极性较大 或具有酸碱性的杂质溶于水相而除去，使有机相中的药 毒物得到净化。适用毒物 一般用于中性药毒物注意事项 酸性毒物不能用碱水液洗涤，碱性毒物不能用酸水液 洗。经碱水液或酸水液洗涤后的有机相，应用蒸馏水洗涤，并用无水硫酸钠脱水。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院吸附柱净化方法 用对杂质吸附力较强的吸附剂作为柱填料，对 有机提取液进行处理，使杂质被吸附于柱上，而药毒物随溶剂或洗脱剂流出柱子。吸附剂 三氧化二铝色素、蜡质、脂肪等 硅镁吸附剂蜡质、脂肪等 活性炭色素 无水硫酸钠水四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院薄层板净化方法 将有机提取液点于薄层板上，展开，使药毒物 分离，定位后将疑是药毒物的斑点刮下，用有 机溶剂溶解洗脱。适用 少量样品四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院改良Stas-otto法 利用乙醇溶解范围宽且具有沉淀蛋白质的性质，先用乙醇作为提取溶剂，从检材中将毒物分离提取出来，同时沉淀除去检材中的蛋白质。然后再用其它溶剂进行萃取和反萃取处理，使提取的样品溶液进一步净化，并使检材中可能存在的各类毒物得以分离。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院改良Stas-otto法的流程 检检 材材 酸化酸化 95%95%乙醇浸泡乙醇浸泡 过滤过滤 乙醇浸出液乙醇浸出液 水浴蒸发水浴蒸发 加无水乙醇加无水乙醇 过滤过滤 无水乙醇滤液无水乙醇滤液 水浴蒸干水浴蒸干 酸性水溶解酸性水溶解 酸性水溶液酸性水溶液 乙醚萃取乙醚萃取 乙醚液乙醚液 酸性水溶液酸性水溶液 1molNaOH1molNaOH反提反提 NaOHNaOH碱化碱化,乙醚萃取乙醚萃取 乙醚液乙醚液 碱水液碱水液 乙醚液乙醚液 碱水液碱水液 HClHCl酸化酸化 5%HCl5%HCl中和中和 乙醚萃取乙醚萃取 弱碱碱化弱碱碱化 有机溶剂萃取有机溶剂萃取 乙醚液乙醚液 萃取液萃取液 中性毒物中性毒物 酸性毒物酸性毒物 碱性毒物碱性毒物 两性毒物两性毒物四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院改良Stas-otto法的优缺点优点提取范围宽，适用于系统分离。对腐败检材的净化度较好。可直接用于用乙醇浸泡防腐保存的检材。缺点操作费时、费工。溶剂消耗量大。回收率低，所需检材量大。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院液固萃取法（liquid-solid extraction)固相萃取法 利用药毒物与检材中其它成分在吸附、分配、分子大小以及酸碱性等性质方面的差异，使用经特殊制备的固相材料和溶剂对检材进行处理，使药毒物和杂质分离的方法。常用柱式，将固相材料填于柱中。方式 将固相材料悬于检材中。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院固相萃取管(Disk)四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院固相萃取过程 选柱 活化 加样 洗脱四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院 固相萃取法分类 方法反相固相萃取法正相固相萃取法离子交换固相萃取法吸附固相萃取法四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院固相材料分类 亲酯型 亲水型 离子交换型类型 键合硅胶 交联树脂 分配型 吸附型 阳离子型 阴离子型 氧化硅胶 XAD系列 硅胶 三氧化二铝 -COOH N(CH3)3X材料 C18 C8 苯乙烯和 硅藻土 硅镁吸附剂 -SO3H -NR2 氰基 氨基 二乙烯苯 活性炭 -PO3H NHR-NH2 聚合物机理 分配为主 网孔阻碍 分配 吸附 形成离子对 吸附为辅 吸附 吸附 吸附适用 水性基质 水性基质 水性基质 有机基质 水性或有机基质 憎水性的 极性较大 极性较小 杂质 碱性毒物 酸性毒物 药毒物 的药毒物 的药毒物 应用广 不受pH 回收率较高 净化效果好特点 具浓缩作用 限制 净化效果较好 回收率高 简便省时 省时 洗脱剂量大 操作麻烦费时 价昂吸附碱性毒 较方便 反相 正相 吸附 离子交换四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院固相微萃取(solid phase miacro extaction,SPME)原理 将用高分子材料做成的萃取头(或纤维头)直接伸入检样中（浸入 式）或置于检样上方（顶空方式）,保留一段时间,待毒物吸附于其 上后,取出用于GC或HPLC 分析.过程 吸附药毒物 进样 解吸特点 简便、快速，集采样、萃取、浓缩、进样为一体。成本较高。进样口GC热解吸附HPLC 溶解洗脱四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院分离提取净化方法的选择 以下几方面综合考虑:毒物 a.分析目的物是否明确？单一毒物还是多种毒物？（溶剂 选择 b.毒物的性质（溶解度、酸碱性、稳定性等）c.中毒量大小（取材量、浓缩体积、检测方法）d.体内代谢情况（是否需水解？是否需检验代谢物？）检材 a.毒物含量（取材量、检测方法）b.毒物的存在状态（分离方法、检测方法）c.组成(分离净化方法）检测方法 a.原理（应除去哪些杂质、溶剂选择）b.选择性（有无分离能力）c.灵敏度（取样量、浓缩体积）四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院安眠镇静药内容一般介绍检材处理检测方法结构性质种类中毒情况取材四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院安眠镇静药一般介绍常见种类 苯马并二氮杂卓类、吩噻嗪类、巴比妥类、眠尔通 等。中毒可能性大，种类多，价廉；应用广，易得；城市居多。中毒原因 自杀（较多）投毒(他杀、麻醉抢劫、制造假象掩盖死因）滥用（多属于国际公约二类精神药物管制品种）意外中毒方式 口服（多见自杀）投于饮食中（多见他杀或其它麻醉目的）注射（多见职业杀人）中毒症状 症状相似，缺少特征性；病理上无明显特征性改 变。中毒结果 与用药者的职业、文化程度、目的等有关。致死 长时间昏迷 嗜睡四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院安眠镇静药检验的取材体外检材 *现场遗留的药物制剂 *剩余的饮食物（饮料、水果等）*现场可能装过药物的容器（杯子、注射器、药瓶等）*胃内容或洗胃液 （一般成分比较简单、含量较高，利于寻找检验方向）体内检材 *活体材料（血、尿）*尸体材料（胃内容、血、肝、脑脊液等）（成分较复杂，含量相对较低。定量结果利于确定死因。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院苯骈二氮杂卓类(benzodiazepines)母体结构母体结构 1，4-苯骈二氮杂卓类的母体结构 三唑仑苯骈二氮杂卓类的母体结构 四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院常见苯骈二氮杂卓类药物的结构及常见剂型与常见苯骈二氮杂卓类药物的结构及常见剂型与规格规格 母体结构与名称 常用别名 取代基 常用剂型与规格1，4-苯骈二氮杂卓类苯骈二氮杂卓类地西泮（diazepam）安定 1-CH3，7-Cl，R1=-H 白色片剂，2.5mg或5mg。氟西泮（flurazepam）氟安定 1-CH2CH2N(C2H5)2，片剂，15mg。7-Cl，R1=-F硝西泮（nitrazepam）硝基安定 7-NO2，R1=-H 白色或微黄色片剂，5mg。氯硝西泮（clonazepam）氯硝安定 7-NO2，R1=-Cl 类白色片剂，0.5mg,或2mg。奥沙西泮(oxazepam)去甲羟基安定 3-OH，7-Cl，R1=-H 白色片剂，15mg。氯氮卓（chlordiazepoxide 利眠宁 2-NHCH3，4O,7-Cl，微黄色片剂，5mg或10mg。2,3位双键，R1=-H三唑仑苯骈二氮杂卓类三唑仑苯骈二氮杂卓类三唑仑（triazolam）三唑安定 R2=-CH3，R3=-Cl 浅蓝色片剂，0.25mg。艾司唑仑（estazolam）舒乐安定 R2=-H，R3=-H 白色片剂，1mg或2mg。阿普唑仑（alprazolam）甲基三唑安定 R2=-CH3，R3=-H 白色片剂，0.4mg。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院苯骈二氮杂卓类的性质多为白色或黄色结晶，无臭，味苦。弱碱性，可与强酸成盐；奥沙西泮（去甲羟基安定）为两性。游离化合物的极性差异较大，一般难溶于水，易溶于有机溶剂；氟西泮（氟安定）极性较大可溶于水。与酸形成的盐可溶于水，略溶于氯仿，不溶于乙醚。七元环在强酸、强碱中加热，可水解开环。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院吩噻嗪类(phenothiazines)母体结构以吩噻嗪环为母体结构，又称苯骈噻嗪或硫氮杂蒽。R1多为碱性侧链；R2多为电负性较大的基团。泰尔登结构与吩噻嗪的相似，但不含氮原子。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院几种常见吩噻嗪类药物的结构及药物性状四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院吩噻嗪类药物的性质多为油状液体或低熔点的固体；多为油状液体或低熔点的固体；碱性较强碱性较强，可与多种酸成盐；药用制剂多为其盐酸盐；，可与多种酸成盐；药用制剂多为其盐酸盐；游离态难溶于水，易溶于有机溶剂；盐可溶于水，也可溶游离态难溶于水，易溶于有机溶剂；盐可溶于水，也可溶于有机溶剂乙醇、氯仿等；于有机溶剂乙醇、氯仿等；有有荧光荧光；性质不稳定性质不稳定，遇光、氧化剂等易变色遇光、氧化剂等易变色；药物制剂多为糖衣片或注射液。药物制剂多为糖衣片或注射液。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院巴比妥类结构母体结构为丙二酰脲；药用的多在5位碳上有两个取代基，称5，5二取代巴比妥，取代基为氢时，称巴比妥酸；少数在1位氮上有取代基的称1，5，5三取代巴比妥；2位碳上的氧被硫取代时，称硫代巴比妥，如硫喷妥。取代基一般为烷基、不饱和烃基、芳香烃基等。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院常见巴比妥类药物取代基和制剂四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院巴比妥类的性质除硫喷妥为浅黄、略带蒜臭外，多为白色结晶，无臭、有苦除硫喷妥为浅黄、略带蒜臭外，多为白色结晶，无臭、有苦味；味；有固定熔点，有固定熔点，可升华可升华；极性中等，易溶于极性有机溶剂，微溶于水，难溶于石油醚；极性中等，易溶于极性有机溶剂，微溶于水，难溶于石油醚；二酰亚胺互变异构成烯醇式时二酰亚胺互变异构成烯醇式时，具弱酸性，可与氢氧化钠等具弱酸性，可与氢氧化钠等强碱成盐而熔于碱水液；强碱成盐而熔于碱水液；内酰亚胺结构内酰亚胺结构不很稳定，在不很稳定，在强碱性溶液强碱性溶液中长时间放置，中长时间放置，可开可开环环，并放出二氧化碳；，并放出二氧化碳；导眠能性质与巴比妥类的相似，在强碱液中更不稳定，很快导眠能性质与巴比妥类的相似，在强碱液中更不稳定，很快分解。分解。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院安眠镇静药的检材处理体外检材 成分简单，药片、药粉等固体检材一般可直接用乙醇溶解或提取后 检测；注射液、饮料等液体检材，可适当调酸碱性后液液萃取。体内检材血和肝匀浆，提取时一般需先经过沉淀蛋白。提取吩噻嗪类药物时，无机酸类沉淀蛋白剂应慎用。苯骈二氮卓类的用药量较小，体内结合率较高，必要时可先行水解再提取。用有机溶剂萃取时，应先调节检材的酸碱性，使被提取的药物处于游离状态。苯骈二氮杂卓类弱酸性到弱碱性；吩噻嗪类碱性；巴比妥类酸性。氟西泮游离碱的水溶性较大，不宜用萃取法提取。吩噻嗪类提取时应避光。有机提取液可通过吸附柱或反提法净化。巴比妥类不宜在碱液中久置。血尿也可直接用固相萃取小柱提取净化。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院安眠镇静药的检测方法体外检材预试化学反应、UV 定性鉴别TLC、HPLC、GC、GC-MS、IR等定量UV、HPLC、GC体内检材四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院化学法检识安眠镇静药方法 微量颜色反应和微量结晶反应操作 瓷反应板、载玻片或试管适用 体外检材中安眠镇静药的预试筛选 和检识鉴别四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院苯马并马并二氮卓类的化学检识反应 方法方法 结果结果 适用适用 偶氮色素反应偶氮色素反应 芳伯胺结构亚硝酸盐芳伯胺结构亚硝酸盐重氮盐重氮盐 检识利眠宁、硝基检识利眠宁、硝基 +盐酸萘基乙二胺盐酸萘基乙二胺紫红紫红偶氮色素偶氮色素 安定、舒乐安定等安定、舒乐安定等 碱性碱性萘酚萘酚橙红橙红色偶氮色素色偶氮色素 地西泮、氟西泮阴性地西泮、氟西泮阴性 稳定、灵敏，定量稳定、灵敏，定量 甘氨酸反应甘氨酸反应 水解物甘氨酸水解物甘氨酸 茚三酮茚三酮蓝紫色蓝紫色 鉴别鉴别 定量定量 其他其他 可与碘可与碘-碘化铋钾、甲醛碘化铋钾、甲醛-硫酸、硅钨酸等显色；多数酸性条件硫酸、硅钨酸等显色；多数酸性条件 下有荧光下有荧光,一般用于预试，薄层显色。一般用于预试，薄层显色。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院吩噻嗪类药物的化学检识机理：此类药物易被氧化剂氧化成醌类化合物而显色，或与 试剂生成有色络合物。浓硫酸 硫酸FeCl3 FPN试剂 氯化钯 机理 氧化 氧化 氧化 络合 氯丙嗪 红 红紫（较慢）红紫 橙红异丙嗪 红 红紫（较慢）红紫 紫奋乃静 红 红紫（较慢）桃红 橙红三氟拉嗪 橙 不明显 橙 橙黄泰尔登 橙黄 不明显 橙 浅黄 特点 易褪色 灵敏度较低 敏度较高、显色稳定FPNFPN试剂：试剂：5%5%三氯化铁三氯化铁 +20%+20%高氯酸高氯酸 +11+11硝酸（硝酸（5455054550）四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院巴比妥类的化学反应 方方 法法 结结 果果 适适 用用碱性硝酸钴反应碱性硝酸钴反应 巴比妥类、导眠能巴比妥类、导眠能 紫色络合物。紫色络合物。类别预试类别预试 纯品结晶纯品结晶 碱水液酸化，放置，析出结晶。碱水液酸化，放置，析出结晶。巴比妥巴比妥长方形片状长方形片状 检识鉴别检识鉴别 苯巴比妥苯巴比妥针状簇晶针状簇晶 I-KII-KI磷酸结晶磷酸结晶 巴比妥巴比妥棕黑棕黑色棒状和针状色棒状和针状 苯巴比妥苯巴比妥深棕黑色深棕黑色细针状簇晶细针状簇晶 巴比妥类的检识和鉴别巴比妥类的检识和鉴别 异戊巴比妥异戊巴比妥棕黄色棕黄色片状片状 戊巴比妥戊巴比妥黑色黑色花束状花束状 司可巴比妥司可巴比妥无无铜盐铜盐-吡啶反应吡啶反应 巴比妥巴比妥淡紫色淡紫色小十字结晶小十字结晶 苯巴比妥苯巴比妥淡紫色淡紫色不规则小结晶不规则小结晶 巴比妥的检识巴比妥的检识 硫喷妥硫喷妥绿色绿色氨性硝酸银结晶反应氨性硝酸银结晶反应 巴比妥巴比妥 透明卵形小结晶透明卵形小结晶 巴比妥的确证巴比妥的确证 汞盐二苯卡巴腙汞盐二苯卡巴腙 巴比妥类及导眠能汞盐巴比妥类及导眠能汞盐白色白色 可用于可用于TLCTLC显色显色 二苯卡巴腙二苯卡巴腙 紫堇色紫堇色 或比色测定或比色测定 异羟月亏酸铁反应异羟月亏酸铁反应 导眠能羟胺铁离子导眠能羟胺铁离子紫色紫色 酰亚胺或酯类酰亚胺或酯类四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院巴比妥和苯巴比妥的结晶四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院紫外分光光度法除眠尔通外，绝大部分的安眠镇静药都有明显的紫外吸收除眠尔通外，绝大部分的安眠镇静药都有明显的紫外吸收光谱光谱,对一些成分简单的体外检材对一些成分简单的体外检材,如药片、注射液、剩余如药片、注射液、剩余饮食物或胃内容物和洗胃液中的药物残渣，经简单处理后饮食物或胃内容物和洗胃液中的药物残渣，经简单处理后即可用紫外光谱预试或筛选。即可用紫外光谱预试或筛选。三类安眠镇静药的紫外光谱完全不同，可用于鉴别。三类安眠镇静药的紫外光谱完全不同，可用于鉴别。在定性的基础上，常用于定量。在定性的基础上，常用于定量。常用于常用于HPLCHPLC方法的检测。方法的检测。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院苯马并马并二氮卓类的紫外光谱 因取代基不同，光谱相同者甚少，不宜用做一类药物因取代基不同，光谱相同者甚少，不宜用做一类药物的预试筛选，但可用于本类药物的鉴别的预试筛选，但可用于本类药物的鉴别。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院吩噻嗪类药物的吸收 此类药物吸收光谱相似，一般在此类药物吸收光谱相似，一般在250 250 260260、300300310nm310nm范围范围有两个吸收带，可用于预试，但不有两个吸收带，可用于预试，但不能鉴别。能鉴别。因易氧化分解，分解产物氧化亚砜因易氧化分解，分解产物氧化亚砜有四个吸收砜，且吸收较原药长移；有四个吸收砜，且吸收较原药长移；所测的光谱常因混合物的比例不定，所测的光谱常因混合物的比例不定，难有固定光谱，不易对照；难有固定光谱，不易对照；为使光谱相对固定，便于对照，可为使光谱相对固定，便于对照，可将样液先用硫酸氧化或用锌还原后将样液先用硫酸氧化或用锌还原后再进行检测。再进行检测。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院巴比妥类的紫外光谱因解离情况不同，光谱随样品溶液的pH而变。5,5二取代巴比妥的解离如下：四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院巴比妥类和导眠能的吸收波长 nm 酸性 弱碱性 强碱性 pH2 pH910 pH13145,5-二取代巴比妥 211 240 2551,5,5-三取代巴比妥 222 244 244 硫喷妥 238，287 304 304 导眠能 251.5 257.5 263.5(醇）235（强，很快消失）四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院适用性5，5二取代巴比妥类药物结构相似，在同一酸碱性条件下，光谱相似，不能鉴别，但可用于预试和筛选。1，5，5三取代巴比妥类药物，因1位被占，不存在二级解离，故样品在pH10和pH14的条件下，紫外光谱基本不变，可与5，5二取代巴比妥类药物区别。导眠能光谱与巴比妥类的完全不同，可以资区别。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院红外光谱法的应用可反映物质结构的细微差别可反映物质结构的细微差别,可鉴别结构非常相似的化合可鉴别结构非常相似的化合物物,如戊巴比妥和异戊巴比如戊巴比妥和异戊巴比妥，后者因取代基末端有同妥，后者因取代基末端有同碳二甲基碳二甲基 ，使，使C-HC-H弯曲振动弯曲振动的吸收峰的吸收峰1370cm1370cm-1-1分裂成分裂成1355cm1355cm-1-1和和1378cm1378cm1 1两个峰。两个峰。因受样品纯度和样品量的限因受样品纯度和样品量的限制制,红外在毒物分析中直接应红外在毒物分析中直接应用的机会较少用的机会较少,仅用于一些含仅用于一些含量和纯度都较高的体外检材量和纯度都较高的体外检材.四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院荧光分光度法的应用吩噻嗪类有较强的荧光，苯马并二氮卓类加稀硫酸也可产生荧光。可用于预试、薄层显色、高效液相色谱检测等。因吩噻嗪类分解产物较复杂，不宜直接用光谱定性，如需定量可先加过氧化氢氧化，而后测定氧化产物的荧光。药物 荧光颜色盐酸氯丙嗪 黄绿色 盐酸异丙嗪 蓝色 奋乃静 黄绿色 三氟拉嗪 黄色 泰尔登 蓝色 四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院薄层色谱法的特点和适用性特点简单、快速、成本低分离度和检测灵敏度有限适用体外检材成分较简单简单且含量较高，经提取净化、浓缩后，一般都可用此法检验。因此类毒物毒性较小，中毒死亡往往需要较大量，故有时体内检材也可用此法检出。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院薄层色譜法检验苯马并马并二氮卓类吸附剂 硅胶G展开剂苯:丙酮:28氨水（50:10:5）丙酮:28氨水（99:1）叔丁醇:1mol/L氨水（27:3）需氯仿:乙醇:丙酮（8:1:1）显色剂 碘化铋钾（橙色）；50%硫酸和乙醇混合液（荧光）说明此类药物为弱碱性，一般碱性展开剂的效果较好。此类药物较多，单一条件很难将所有药物完全分开，需通过不同的条件分离。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院薄层色谱法检验吩噻嗪类吸附剂和展开剂硅胶板 a.甲醇:水（7:3）b.环己烷:二乙胺（9:1）c.苯:环己烷:二乙胺（15:75:20）碱性板 a.甲醇:氯仿（1:9）b.甲醇:浓氨水（100:1.5）显色剂 荧光、硫酸、氯化钯试剂说明碱性较强，常因硅胶吸附而使斑点拖尾，可通过铺碱性硅胶板或碱性较强，常因硅胶吸附而使斑点拖尾，可通过铺碱性硅胶板或于展开剂加入适量碱来改善分离效果于展开剂加入适量碱来改善分离效果。在展开剂中加入适量碱，可拉开几种药物斑点的Rf值的距离。此类药物易氧化分解，常出现多个斑点，不宜对照，可先将样品此类药物易氧化分解，常出现多个斑点，不宜对照，可先将样品在原点氧化或分解后再行展开；在原点氧化或分解后再行展开；四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院吩噻嗪类药物薄层的Rf值四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院吩噻嗪类药物薄层斑点显色四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院薄层色谱法检验巴比妥类展开剂氯仿:丙酮（41）乙酸乙酯:甲醇:浓氨水（80:10:5）异丙醇:氯仿:浓氨水（9:9:2）显色剂硫酸汞硫酸汞-0.2%-0.2%二苯卡巴腙醇液二苯卡巴腙醇液,白色白色紫堇色紫堇色;NN，2 2，6-6-三氯对苯醌亚胺（三氯对苯醌亚胺（NCBINCBI），蓝色蓝色；高锰酸钾，司可巴比妥褪色。高锰酸钾，司可巴比妥褪色。说明 硫喷妥易分解成戊巴比妥，故常显两个斑点。硫喷妥易分解成戊巴比妥，故常显两个斑点。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院气相色谱法检验安眠镇静药特点灵敏度高、分离能力强。要求被分析物易挥发、对热稳定。适用体内、成分复杂、含量低的检材。苯马并二氮卓类 部分适用。有些热稳定性差或极性太大的效果不好，如去甲羟基安定。多数易被固定相吸附而造成拖尾或难出峰，宜选OV-1、DB-!等弱极性固定液吩噻嗪类 受热易分解，效果不好。巴比妥类一般选用中等极性柱，如OV-17；FID检测器。极性较大，普通条件下峰形不佳，可通过甲基衍生化可改善峰形，并提高检测灵敏度和准确性。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院GC法检测苯马并马并二氮卓类药毒物实例 取1mL血液检材，加入50L内标液，1mL饱和NaHCO3溶液，混合均匀，然后加入0.5gNaCl，混合后加入3mL甲苯，在振荡器上混合15min，离心分层，分出有机层并在氮气流下吹干，残渣加50L甲苯溶解，取2L进样。色谱条件为：DB-1毛细管柱（15m 0.53mm i.d.，膜厚1.5m），ECD检测器，初始柱温为150（1min），经程序升温（16/min）至300（10min），进样口280，检测器300，载气为氦气（1mL/min）。几种药物在此色谱条件下的保留时间见表5-3。表5-3 几种常见苯骈二氮杂类药物的GC保留时间 名称 保留时间(min)名称 保留时间(min)氯硝西泮 10.45 地西泮 8.60 艾司唑仑 10.50 硝西泮 10.00 三唑仑 11.30 氟西泮 10.10 四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院高效液相色谱法检验安眠镇静药特点灵敏度较高、分离能力强。应用体内检材、样品有紫外吸收的。三类药物均可适用，特别对热稳定性差或极性大的，效果较GC 好。一般采用C18反相液相色谱法；紫外或荧光检测。三类药物均具有酸碱性，常通过在流动相中加入适量酸抑制解离或形成离子对可改善分离效果。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院HPLC法检测苯骈二氮卓类药物实例 取2mL血液或血清检材，加入20L内标溶液及2mL丙酮，充分搅拌混合后离心分离，取上清液在减压下挥干溶剂，残渣用0.2mol/L硼酸缓冲溶液（pH9）溶解，将溶解液通过C18固相萃取柱，先用1mL水冲洗，再用1mL 15%甲醇水溶液冲洗，然后用甲醇将药物洗脱，洗脱液50下在氮气流中吹干，残渣用20L甲醇溶解，取10L进样分析。色谱条件：色谱柱为Kontrsorb RP（反相柱，相当于C18-键合相，25cm4.6mm i.d.），流动相为乙腈和0.09mol/L磷酸钾（pH2.3）的混合溶液，流速为1.3mL/min，二极管阵列检测器，检测波长为190nm-430nm。在上述色谱条件下各种药物的保留时间见表5-4。表5-4几种常见苯骈二氮杂卓类药物的HPLC保留时间 名称 保留时间(min)名称 保留时间(min)氯氮卓 2.85 氯硝西泮 7.96 奥沙西泮 3.53 阿普唑仑 10.29 氟西泮 4.04 三唑仑 11.07 硝西泮 6.43 地西泮 14.94 艾司唑仑 7.85 四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院局部麻醉药检验原因 用以自杀投毒的相对较少，检验多涉及医疗纠纷，如操作不当（注入血管、打穿硬膜、速度过快）、特敏体质等。种类 目前临床使用较多的有普鲁卡因、利多卡因、布比卡因等。氨基苯甲酸酯类 酰基苯胺衍生物 四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院理化性质酯烃侧链上均有叔氮结构，显碱性，临床用药多为其盐酸盐。盐酸盐均为白色或无色结晶性粉末，可溶于水、乙醇，溶于或微溶于氯仿，乙醚中几乎不溶。普鲁卡因结构中的酯键极易水解；利多卡因和布比卡因结构中的酰胺键也可水解。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院体内过程及检材处理检验特点 水解代谢快，取材检验应及时，且应注意代谢产物的检测。普鲁卡因入体后10分钟即有40水解生成对氨基苯甲酸。利多卡因24小时原形排出量约12。检材 体外检材 剩余药液、药瓶、注射器等。生物检材 局部肌肉、血液、脑脊液等。检材处理 弱碱性条件下乙醚提取，必要时，可用酸水液反提净化。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院局麻药的检验化学方法苦味酸盐结晶 脂肪叔胺苦味酸黄色结晶（不通熔点）重氮化偶合 普鲁卡因芳伯胺亚硝酸钠重氮盐 重氮盐萘酚 红色偶氮色素与重金属离子 酰基苯胺类酰胺基上的N+Cu+或Co+有色配合物沉淀紫外光谱法 均含苯环结构，紫外区有特征吸收。检验多为麻醉药剂如镇痛泵、输液等或生物体液中药物的含量测定。常用HPLC方法四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院其它合成药毒物甲丙氨酯(meprobamate)又称眠尔通(miltown)或安宁 含酰胺结构，近中性；饱和结构，无紫外吸收。异烟肼(isoniziazid)又名雷米封 抗结核药，弱碱性；还原性强，遇光、氧、微量金属离子易氧化变色；强酸、碱性条件下易水解。咖啡因(caffeine,coffein)生物碱，仅咪唑环上无取代的N显弱碱性。氯胺酮(ketamine)麻醉镇静剂，毒品中称“K”粉。碱性，临床常用其盐酸盐。四川大学华西基础医学与法医学院四川大学华西基础医学与法医学院期中考试题 就你最熟悉的地区，试根据地方物产、社会情况、民间习俗等各方面因素考虑，分析可能会有哪些与毒物有关的事件和案件？你曾耳闻目睹过的又有哪些？