GB 5009.154-2016 食品安全国家标准 食品中维生素B6的测定.pdf

中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 6食品安全国家标准食品中维生素B6的测定2 0 1 6 - 1 2 - 2 3发布2 0 1 7 - 0 6 - 2 3实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 总 局发 布G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 6 前 言 本标准代替G B/T5 0 0 9.1 5 42 0 0 3 食品中维生素B6的测定 、G B5 4 1 3.1 32 0 1 0 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素B6的测定 。本标准与G B/T5 0 0 9.1 5 42 0 0 3相比, 主要变化如下: 标准名称修改为“ 食品安全国家标准 食品中维生素B6的测定” ; 增加了高效液相色谱法。G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 61 食品安全国家标准食品中维生素B6的测定1 范围本标准规定了食品中维生素B6的测定方法。本标准第一法为高效液相色谱法, 适用于添加了维生素B6的食品测定; 第二法为微生物法, 适用于各类食品中维生素B6的测定。第一法 高效液相色谱法2 原理试样经提取等前处理后, 经C1 8色谱柱分离, 高效液相色谱-荧光检测器检测, 外标法定量测定维生素B6( 吡哆醇、 吡哆醛、 吡哆胺) 的含量。3 试剂和材料除非另有说明, 本方法所用试剂均为分析纯, 水为G B/T6 6 8 2规定的一级水。3.1 试剂3.1.1 辛烷磺酸钠(C8H1 7N a O3S) 。3.1.2 冰乙酸(C2H4O2) 。3.1.3 三乙胺(C6H1 5N) : 色谱纯。3.1.4 甲醇(CH4O) : 色谱纯。3.1.5 盐酸(HC l) 。3.1.6 氢氧化钠(N a OH) 。3.1.7 淀粉酶: 酶活力1.5U/m g。3.2 试剂配制3.2.1 盐酸溶液(5.0m o l/L) : 量取4 5m L盐酸, 用水稀释并定容至1 0 0m L。3.2.2 盐酸溶液(0.1m o l/L) : 吸取9m L盐酸, 用水稀释并定容至10 0 0m L。3.2.3 氢氧化钠溶液(5.0m o l/L) : 称取2 0g氢氧化钠, 加5 0m L水溶解, 冷却后, 用水定容至1 0 0m L。3.2.4 氢氧化钠溶液(0.1 m o l/L) : 称取0.4g氢氧化钠, 加5 0 m L水溶解, 冷却后, 用水定容至1 0 0m L。3.3 标准品3.3.1 盐酸吡哆醇(C8H1 2C l NO3,C A S号:5 8 - 5 6 - 0) : 纯度9 8%, 或经国家认证并授予标准物质证书G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 62 的标准物质。3.3.2 盐酸吡哆醛(C8H1 0C l NO3,C A S号:6 5 - 2 2 - 5) : 纯度9 9%, 或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.3.3 双盐酸吡哆胺(C8H1 4C l2N2O3,C A S号:5 2 4 - 3 6 - 7) : 纯度9 9%, 或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.4 标准溶液配制3.4.1 吡哆醇标准储备液(1m g/m L) : 准确称取6 0.8m g盐酸吡哆醇标准品, 用0.1m o l/L盐酸溶液溶解后定容到5 0m L, 在-2 0下避光保存, 有效期1个月。3.4.2 吡哆醛标准储备液(1m g/m L) : 准确称取6 0.9m g盐酸吡哆醛标准品, 用0.1m o l/L盐酸溶液溶解后定容到5 0m L, 在-2 0下避光保存, 有效期1个月。3.4.3 吡哆胺标准储备液(1m g/m L) : 准确称取7 1.7m g双盐酸吡哆胺标准品, 用0.1m o l/L盐酸溶液溶解后定容到5 0m L, 在-2 0下避光保存, 有效期1个月。3.4.4 维生素B6混合标准中间液(2 0g/m L) : 分别准确吸取吡哆醇、 吡哆醛、 吡哆胺的标准储备液各1.0 0m L, 用0.1m o l/L盐酸溶液稀释并定容至5 0m L。临用前配制。3.4.5 维生素B6混合标准系列工作液: 分别准确吸取维生素B6混合标准中间液0.5m L、1.0m L、2.0m L、3.0 m L、5.0 m L, 至1 0 0 m L容量瓶中, 用水定容。该标准系列浓度分别为0.1 0g/m L、0.2 0g/m L、0.4 0g/m L、0.6 0g/m L、1.0 0g/m L。临用前配制。注:标准储备液在使用前需要进行浓度校正, 校正方法参照附录A。4 仪器和设备4.1 高效液相色谱仪: 带荧光检测器。4.2 天平: 感量1m g和0.0 1m g。4.3 p H计: 精度0.0 1。4.4 涡旋混合器。4.5 超声波振荡器。4.6 分光光度计。4.7 恒温培养箱, 或性能相当者。5 分析步骤5.1 试样制备5.1.1 含淀粉的试样a) 固体试样: 称取混合均匀的固体试样约5g( 精确至0.0 1g) , 于1 5 0m L锥形瓶中, 加入约2 5m L4 55 0的水, 混匀。加入约0.5g淀粉酶, 混匀后向锥形瓶中充氮, 盖上瓶塞, 置5 06 0培养箱内约3 0m i n。取出冷却至室温。b) 液体试样: 称取混合均匀的液体试样约2 0g( 精确至0.0 1g) 于1 5 0m L锥形瓶中, 混匀。加入约0.5g淀粉酶, 混匀后向锥形瓶中充氮, 盖上瓶塞, 置5 06 0培养箱内约3 0m i n。取出冷却至室温。5.1.2 不含淀粉的试样a) 固体试样: 称取混合均匀的固体试样约5g( 精确至0.0 1g) , 于1 5 0m L锥形瓶中, 加入约2 5G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 63 m L4 55 0的水, 混匀。静置5m i n 1 0m i n, 冷却至室温。b) 液体试样: 称取混合均匀的液体试样约2 0g( 精确至0.0 1g) 于1 5 0m L锥形瓶中。静置5m i n1 0m i n。5.1.3 待测液的制备用盐酸溶液, 调节上述试样溶液的p H至1.70.1, 放置约1m i n。再用氢氧化钠溶液调节试样溶液的p H至4.50.1。把上述锥形瓶放入超声波振荡器中, 超声振荡约1 0m i n。将试样溶液转移至5 0m L容量瓶中, 用水冲洗锥形瓶。洗液合并于5 0m L容量瓶中, 用水定容至5 0m L。另取5 0m L锥形瓶, 上面放入漏斗和滤纸, 把定容后的试样溶液倒入其中, 自然过滤。滤液再经0.4 5m微孔滤膜过滤, 用试管收集, 转移1m L滤液至进样瓶作为试样待测液。注:操作过程应避免强光照射。5.2 仪器参考条件仪器参考条件列出如下:a) 色谱柱:C1 8柱, 柱长1 5 0mm, 柱内径4.6mm, 柱填料粒径5m, 或相当者;b) 流动相: 甲醇5 0m L、 辛烷磺酸钠2.0g、 三乙胺2.5m L, 用水溶解并定容到10 0 0m L后, 用冰乙酸调p H至3.00.1, 过0.4 5m微孔滤膜过滤;c) 流速:1m L/m i n;d) 柱温:3 0;e) 检测波长: 激发波长2 9 3n m, 发射波长3 9 5n m;f) 进样体积:1 0L。5.3 标准曲线的制作将维生素B6混合标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪中, 测定各组分的峰面积, 以相应标准工作液的浓度为横坐标, 以峰面积为纵坐标, 绘制标准曲线。5.4 试样溶液的测定将试样溶液注入高效液相色谱仪中, 得到各组分相应的峰面积, 根据标准曲线得到待测试样溶液中维生素B6各组分的浓度。6 分析结果的表述试样中维生素B6各组分的含量按式(1) 计算:Xi=Vm1 0 010 0 0(1) 式中:Xi 试样中维生素B6各组分的含量, 单位为毫克每百克(m g/1 0 0g) ; 根据 标 准 曲 线 计 算 得 到 的 试 样 中 维 生 素B6各 组 分 的 浓 度, 单 位 为 微 克 每 毫升(g/m L) ;V 试样溶液的最终定容体积, 单位为毫升(m L) ;m 试样质量, 单位为克(g) ;1 0 0 换算为1 0 0克样品中含量的换算系数;10 0 0 将浓度单位g/m L换算为m g/m L的换算系数。G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 64 试样中维生素B6的含量按式(2) 计算:X=X醇+X醛1.0 1 2+X胺1.0 0 6(2) 式中:X 试样中维生素B6( 以吡哆醇计) 的含量, 单位为毫克每百克(m g/1 0 0g) ;X醇 试样中吡哆醇的含量, 单位为毫克每百克(m g/1 0 0g) ;X醛 试样中吡哆醛的含量, 单位为毫克每百克(m g/1 0 0g) ;1.0 1 2 吡哆醛的含量换算成吡哆醇的系数;X胺 试样中吡哆胺的含量, 单位为毫克每百克(m g/1 0 0g) ;1.0 0 6 吡哆胺的含量换算成吡哆醇的系数。结果保留三位有效数字。7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的1 5%。8 其他当取样量为5.0 0g时, 方法检出限为: 吡哆醇0.0 2 m g/1 0 0g, 吡哆醛0.0 2 m g/1 0 0g, 吡哆胺0.0 2m g/1 0 0g; 方法定量限为: 吡哆醇0.0 5m g/1 0 0g, 吡哆醛0.0 5m g/1 0 0g, 吡哆胺0.0 5m g/1 0 0g。第二法 微生物法9 原理食品中某一种细菌的生长必须要有某一种维生素的存在, 卡尔斯伯(S a c c h a r o m y c e sC a r l s b r g e n s i s)酵母菌在有维生素B6存在的条件下才能生长, 在一定条作下维生素B6的量与其生长呈正比关系。用比浊法测定该菌在试样液中生长的浑浊度, 与标准曲线相比较得出试样中维生素B6的含量。1 0 试剂和材料除非另有说明, 本方法所用试剂均为分析纯, 水为G B/T6 6 8 2规定的二级水。培养基可使用符合测试要求的商品化的培养基。1 0.1 试剂1 0.1.1 盐酸(HC l) 。1 0.1.2 硫酸(H2S O4) 。1 0.1.3 氢氧化钠(N a OH) 。1 0.1.4 吡哆醇Y培养基: 不得含维生素B6生长因子。1 0.1.5 琼脂 (C1 2H1 8O9)n 。1 0.1.6 氯化钠(N a C l) 。1 0.1.7 溴甲酚绿(C2 1H1 4B r4O5S) 。G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 65 1 0.2 试剂配制1 0.2.1 盐酸溶液(0.0 1m o l/L) : 吸取0.9m L盐酸, 用水稀释并定容至10 0 0m L。1 0.2.2 硫酸溶液(0.2 2m o l/L) : 于20 0 0m L烧杯中加入7 0 0m L水、1 2.3 2 m L硫酸, 用水稀释至10 0 0m L。1 0.2.3 硫 酸 溶 液 (0. 5 m o l/L) : 于20 0 0 m L烧 杯 中 加 入7 0 0 m L水、2 8 m L硫 酸, 用 水 稀 释 至10 0 0m L。1 0.2.4 氢氧化钠溶液(1 0 m o l/L) : 称取4 0g氢氧化钠, 加4 0 m L水溶解, 冷却后, 用水定容至1 0 0m L。1 0.2.5 氢氧化钠溶液(0.1m o l/L) : 移取1 0m o l/L氢氧化钠溶液1m L, 用水定容至1 0 0m L。1 0.2.6 生理盐水(9g/L) : 称取9g氯化钠, 用水溶解后定容至10 0 0m L, 于1 2 1下高压灭菌1 5m i n,冷却后备用。1 0.2.7 溴甲酚绿溶液(0.4g/L) : 准确称取0.1g溴甲酚绿于研钵中, 加1.4m L0.1m o l/L氢氧化钠溶液研磨, 加少许水继续研磨, 直至完全溶解, 用水稀释到2 5 0m L。1 0.3 培养基 ( 培养基组分与配制方法参见附录C)1 0.3.1 吡哆醇Y培养基。1 0.3.2 吡哆醇Y琼脂培养基。1 0.3.3 麦芽浸粉琼脂培养基。1 0.3.4 YM肉汤培养基。1 0.3.5 YM肉汤琼脂培养基。1 0.4 标准品盐酸吡哆醇(C8H1 2C l NO3,C A S号:5 8 - 5 6 - 0) : 纯度9 9%, 或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。1 0.5 标准溶液配制1 0.5.1 吡哆醇标准储备液(1 0 0g/m L) : 准确称取1 2 2m g盐酸吡哆醇标准品, 用0.0 1m o l/L的盐酸溶液溶解并定容至10 0 0m L。于4下避光保存, 有效期1个月。1 0.5.2 吡哆醇标准中间液 (1g/m L) : 准确 吸取1 m L吡哆醇标 准储备液, 用 水稀释并定 容至1 0 0m L。1 0.5.3 吡哆醇标准工作液(5 0n g/m L) : 准确吸取5m L吡哆醇标准中间液, 用水定容至1 0 0m L。1 1 仪器和设备1 1.1 光栅分光光度计。1 1.2 天平: 感量1m g和0.1m g。1 1.3 电热恒温培养箱, 或性能相当者。1 1.4 高压釜, 或性能相当者。1 1.5 涡旋混合器。1 1.6 离心机。1 1.7 超净工作台, 或性能相当者。G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 66 1 2 分析步骤注:预包埋了菌种的商业化维生素B6检测试剂盒, 其检测原理相同, 检测效果相当, 实际使用时按试剂盒中的操作指南进行操作。1 2.1 菌种的制备及保存( 避光处理)1 2.1.1 菌种复壮: 卡尔斯伯酵母(S a c c h a r o m y c e sc a r l s b e r g e n s i s) ,AT C C#9 0 8 0菌种或等效菌种冻干品, 加入约0.5m LYM肉汤培养基或生理盐水复溶, 取几滴复溶的菌液分别接种2支装有1 0m LYM肉汤培养基的试管中, 于3 0水浴振荡培养2 0h2 4h。1 2.1.2 月储备菌种制备: 将菌种复壮培养液划线接种于YM肉汤琼脂培养基( 传代培养基) 斜面上, 于3 0培养2 0h2 4h, 于28冰箱内保存, 此菌种为第一代月储备菌种; 以后每月将上一代的月储备菌种划线接种于YM肉汤琼脂培养基( 传代培养基) 斜面, 于3 0培养2 0h2 4h, 于28冰箱内保存, 有效期一个月, 此菌种为当月储备菌种。1 2.1.3 周储备菌种制备: 每周从当月储备菌种接种于YM肉汤琼脂培养基( 传代培养基) 斜面, 于3 0培养2 0h2 4h, 于28冰箱内保存, 有效期7d。保存数星期以上的菌种, 不能立即用作制备接种液之用, 一定要在使用前每天移种一次, 连续2d 3d, 方可使用, 否则生长不好。1 2.1.4 接种菌悬液制备: 在维生素B6测定实验前一天, 将周储备菌种转接于1 0m LYM肉汤培养基( 种子培养液) 中, 可同时制备2管, 于3 0振荡培养2 0h2 4h, 得到测定用的种子培养液, 从月储备菌种到种子培养液总代数不超过5代。将该种子培养液于30 0 0r/m i n下离心1 0m i n, 倾去上清液; 用1 0m L生理盐水洗涤, 离心, 倾去上清液, 用生理盐水重复洗涤2次; 再加1 0m L消毒过的生理盐水, 将离心管置于涡旋混匀器上充分混合, 使菌种成为混悬液, 将此菌悬液倒入已消毒的注射器内, 立即使用。1 2.2 试样处理1 2.2.1 称取试样0.5g 1 0g( 精确至0.0 1g, 其中维生素B6含量不超过1 0n g) 放入1 0 0m L锥形瓶中, 加7 2m L0.2 2m o l/L硫酸溶液。放入高压釜1 2 1下水解5h, 取出冷却, 用1 0.0m o l/L氢氧化钠溶液和0.5m o l/L硫酸溶液调p H至4.5, 用溴甲酚绿做指示剂( 指示剂由黄-黄绿色) , 将锥形瓶内的溶液转移到1 0 0m L容量瓶中, 用蒸馏水定容至1 0 0m L, 滤纸过滤, 保存滤液于冰箱内备用( 有效期不超过3 6h) 。注:整个试样处理过程需要注意避光操作。1 2.2.2 标准曲线的制备:3组试管各加0.0 0m L、0.0 2m L、0.0 4m L、0.0 8m L、0.1 2m L和0.1 6m L吡哆醇工作液, 再加吡哆醇Y培养基补至5.0 0m L, 混匀, 加棉塞。1 2.2.3 试样管的制备: 在试管中分别加入0.0 5m L、0.1 0m L、0.2 0m L样液, 再加入吡哆醇Y培养基补至5.0 0m L, 用棉塞塞住试管, 将制备好的标准曲线和试样测定管放入高压釜1 2 1 下高压灭菌1 0m i n, 冷至室温备用。1 2.2.4 接种和培养: 每管种一滴接种液, 于3 00.5恒温箱中培养1 8h2 2h。1 2.3 测定将培养后的标准管和试样管从恒温箱中取出后, 用分光光度计于5 5 0n m波长下, 以标准管的零管调零, 测定各管的吸光度值。以标准管维生素B6所含的浓度为横坐标, 吸光度值为纵坐标, 绘制维生素B6标准工作曲线, 用试样管得到的吸光度值, 在标准曲线上查到试样管维生素B6的含量。G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 67 1 3 分析结果的表述试样提取液中维生素B6的浓度按式(3) 计算:=1+2+33(3) 式中: 试样提取液中维生素B6的浓度, 单位为纳克每毫升(n g/m L) ;i 各试样测定管中维生素B6的浓度, 单位为纳克每毫升(n g/m L) 。试样中维生素B6的含量按式(4) 计算:X=V1 0 0m1 06(4) 式中:X 试样中维生素B6( 以吡哆醇计) 的含量, 单位为毫克每百克(m g/1 0 0g) ; 试样提取液中维生素B6的浓度, 单位为纳克每毫升(n g/m L) ;V 试样提取液的定容体积与稀释体积总和, 单位为毫升(m L) ;m 试样质量, 单位为克(g) ;1 0 01 06 折算成每1 0 0g试样中维生素B6的毫克数。计算结果保留到小数点后两位。1 4 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的1 5%。1 5 其他当取样量为1.0 0g时, 定量限为0.0 0 2m g/1 0 0g。G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 68 附 录 A维生素B6各组分标准溶液的浓度校正方法A.1 标准校正溶液的配制分别准确吸取1.0 0 m L吡哆醇、 吡哆醛、 吡哆胺标准储备液, 用0.1 m o l/L盐酸溶液定容到1 0 0m L, 作为标准校正液。A.2 对照溶液的配制以0.1m o l/L盐酸溶液作为对照溶液。A.3 吸收值的测定用1c m比色杯于相应最大吸收波长下, 以对照溶液为空白对照, 测定各标准校正溶液的吸收值。A.4 标准溶液的浓度计算各标准储备液的质量浓度按式(A.1) 计算:i=AiMiiVFi(A.1) 式中:i 维生素B6各组分( 吡哆醇、 吡哆醛、 吡哆胺) 标准储备液的质量浓度, 单位为微克每毫升(g/m L) ;Ai 维生素B6各组分( 吡哆醇、 吡哆醛、 吡哆胺) 标准测试液在各自最大吸收波长m a x下的吸收值( 见表A.1) ;Mi 维生素B6各组分( 吡哆醇、 吡哆醛、 吡哆胺) 标准品的分子量( 见表A.1) ;i 维生素B6各 组 分 ( 吡 哆 醇、 吡 哆 醛、 吡 哆 胺) 在0. 1 m o l/L盐 酸 溶 液 中 的 吸 收 系 数( 见表A.1) ;V 稀释因子;Fi 无维生素B6各组分( 吡哆醇、 吡哆醛、 吡哆胺) 的对照溶液的换算因子( 见表A.1) 。表A.1 维生素B6各组分标准溶液浓度校正的相关参数化合物溶剂m a xMig/m o limm o l-1c m-1Fi盐酸吡哆醇(p y r i d o x i n e - h y d r o c h l o r i d e)0.1m o l/LHC l(p H1)2 9 12 0 5.68.60.8 2 3盐酸吡哆醛(p y r i d o x a l - h y d r o c h l o r i d e)0.1m o l/LHC l(p H1)2 8 82 0 3.69.00.8 2 1双盐酸吡哆胺(p y r i d o x a m i n e - d i h y d r o c h l o r i d e)0.1m o l/LHC l(p H1)2 9 22 4 1.18.20.6 9 8G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 69 附 录 B维生素B6液相色谱图 维生素B6的液相色谱图见图B.1。图B.1 维生素B6标准溶液的液相色谱图G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 61 0 附 录 C培养基组分与配制方法C.1 吡哆醇Y培养基每升溶液成分: 葡萄糖4 0.0g,L -天冬酰胺4.0g, 硫酸铵4.0g, 磷酸二氢钾3.0g, 硫酸镁1.0g, 氯化钙0.4 9g,D L -蛋氨酸4 0.0m g,D L -色氨酸4 0.0m g,D L -异亮氨酸4 0.0m g,D L -缬氨酸4 0.0m g, 盐酸组氨酸2 0.0m g, 核黄素2 0.0m g, 生物素8.0m g, 肌醇5.0m g, 硫酸亚铁5 0 0.0g, 盐酸硫胺素4 0 0.0g,泛酸钙4 0 0.0g, 胆碱酸4 0 0.0g, 硼酸2 0 0.0g, 碘化钾2 0 0.0g, 钼酸铵4 0.0g, 硫酸锰8 0.0g, 硫酸铜9 0.0g, 硫酸锌8 0.0g, 蒸馏水10 0 0m L。称量5.3g上述吡哆醇Y培养基培养基, 溶解于1 0 0m L蒸馏水中, 调p H至4.10.0 5,1 2 1灭菌1 5m i n, 备用。C.2 吡哆醇Y琼脂培养基称量5.3g上述吡哆醇Y培养基, 溶解于1 0 0m L蒸馏水中, 调p H至4.10.0 5, 加入1.2g琼脂,加热煮沸使琼脂融化, 混合均匀后分装于试管中, 每管1 0m L,1 2 1灭菌1 5m i n, 摆成斜面备用。C.3 麦芽浸粉琼脂培养基称取麦芽糖1 2.7 5g、 糊精2.7 5g、 丙三醇2.3 5g、 蛋白胨0.7 8g, 溶解于10 0 0m L蒸馏水中, 调p H至4.70.2, 加入1 5.0g琼脂, 加热煮沸使琼脂融化, 混合均匀后分装于试管中, 每管1 0m L,1 2 1灭菌1 5m i n, 摆成斜面备用。用于制备卡尔斯伯酵母的每月和每周传代菌种培养基。C.4 YM肉汤培养基每升溶液成分: 酵母浸膏3.0g, 麦芽浸膏3.0g, 蛋白胨5.0g, 葡萄糖1 0.0g, 蒸馏水10 0 0m L。按2.1g/1 0 0m L水的比例称量培养基, 加入对应体积的蒸馏水, 搅拌均匀, 调p H至6.20.2, 分装于试管中, 每管1 0m L,1 2 1灭菌1 5m i n, 冷却后放入冰箱4保存, 有效期一个月, 作为卡尔斯伯酵母菌种复苏培养液和日常检测用种子培养液培养基。C.5 YM肉汤琼脂培养基按2.1g/1 0 0m L水的比例称量上述YM肉汤培养基, 并按1.3g/1 0 0m L的比例加入琼脂后, 加入对应体积的蒸馏水, 加热至沸腾, 分装于试管中, 每管1 0m L,1 2 1下灭菌1 5m i n, 摆成斜面, 放入冰箱4保存, 有效期一个月, 用于制备卡尔斯伯酵母的每月和每周传代菌种培养基。