碱性磷酸酶Km值的.ppt

碱性磷酸酶碱性磷酸酶Km值的测定值的测定底物浓度底物浓度酶浓度酶浓度pH温度温度激活剂激活剂抑制剂抑制剂 研究一种因素的影响时，其余各因素均恒定。研究一种因素的影响时，其余各因素均恒定。影响影响 酶促反应的因素酶促反应的因素底物浓度对反应速率影响底物浓度对反应速率影响在其他因素不变在其他因素不变的情况下，底物浓度的情况下，底物浓度对反应速率的影响呈对反应速率的影响呈矩形双曲线矩形双曲线关系。关系。SSV VS：底物浓度：底物浓度V：不同：不同S时的反应初速度时的反应初速度Vmax：最大反应速度：最大反应速度(maximum velocity)m：米氏常数：米氏常数(Michaelis constant)VmaxS Km+S Km值值 Km等于等于酶促反应速度为最大反应速度一半时酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度的底物浓度。意义：意义：a)Km是酶的是酶的特征性特征性常数之一；常数之一；b)Km可近似表示酶对底物的可近似表示酶对底物的亲和力亲和力；c)同一酶对于不同底物有不同的同一酶对于不同底物有不同的Km值。值。v KmKmS 2Km+S Vmax VmaxSV VmaxmaxV VSSKKmmV Vmaxmax/2 /2 双倒数作图法双倒数作图法 VmaxS Km+SV=（林贝氏方程）（林贝氏方程）+1/V=KmVmax 1/Vmax 1/S 两边同取倒数两边同取倒数 m值与值与max值的测定值的测定注意事项注意事项1 底物和酶取样准确底物和酶取样准确2 保温时间准确保温时间准确 1234567加入酶的时加入酶的时间间加入碱性溶液加入碱性溶液终止反应的终止反应的时间时间9:00:009:00:309:01:309:02:009:02:309:03:009:01:009:15:009:15:309:16:009:16:309:17:009:17:309:18:00保证每个试管的反应时间为保证每个试管的反应时间为1515分钟分钟实验报告实验报告1 绘制矩形双曲线图绘制矩形双曲线图2 绘制双倒数图，并通过双倒数图读出碱绘制双倒数图，并通过双倒数图读出碱性磷酸酶对磷酸本二钠的性磷酸酶对磷酸本二钠的Km值值注意事项注意事项1 做如下表格做如下表格2 可电脑作图可电脑作图3 若人工作图，在坐标轴上禁止出现分数若人工作图，在坐标轴上禁止出现分数(1/2,1/16)4 实验的最终目的是测得实验的最终目的是测得Km值，因此实验报告最终值，因此实验报告最终必须得出结论：必须得出结论：Km值等于多少值等于多少1234567AbsS1/ABS1/S