酶工程复习要点.doc

1、酶的催化作用特点：具有专一性，催化效率高和反应条件温和等显著特点。2、酶研究的两个方向：理论研究方向和应用研究方向。理论研究方向：酶的理化性质、催化性质、催化机制等。应用研究：促进了酶工程的形成。3、酶工程的定义：利用酶或者微生物细胞，动植物细胞，细胞器，借助于酶的催化作用，通过工程学手段生产产品或提供社会服务的科学体系。4、酶工程的应用范围：对生物资源中天然酶的开发和生产自然酶的分离纯化与鉴定技术酶的固定化技术酶反应器的研制与应用与其它生物技术领域的交叉与渗透。5、酶工程的组成：酶的发酵生产酶的分离纯化酶分子修饰酶和细胞固定化酶反应器和酶的应用等方面。6、酶工程的主要任务：通过预先设计，经过人工操作控制而获得大量所需的酶，并通过各种方法使酶发挥其最大的催化功能。8、酶的分类：第1类，氧化还原酶；第2类，转移酶；第3类，水解酶；第4类，裂合酶；第5类，异构酶；第6类，合成酶；第7类，核酸类酶。9、酶的作用机制：酶的催化机理可能与几种因素有关：酶与底物结合时，两者构象的改变使它们互相契合，底物分子适当地向酶分子活性中心靠近，并且趋向于酶的催化部位，使活性中心这一局部地区额底物浓度大大增高，并使底物分子发生扭曲，易于断裂。在另一些情况中，可能还有一些其他的因素使酶反应速度稍有一些提高，如酶与底物形成有一定稳定度的过渡态中间物共价的ES中间物，这种ES中间物又可迅速地分解成产物，又如酶活性中心的质子供体和质子受体对底物分子进行了广义的酸碱催化等。10、酶的催化能力：酶仅能改变化学反应的速度，并不不能改变化学反应的平衡点。酶本身在反应前后也不发生变化例如肽键遇水自发地进行水解的反应极为缓慢，当有蛋白酶存在时，这个反应则进行得十分迅速，可降低反应的活化能。在一个化学反应体系中，反应开始时，反应物(S)分子的平均能量水平较低为“初态”，在反应的任何一瞬间反应物中都有一部分分子具有了比初态更高一些的能量，高出的这一部分能量称为活化能，使这些分子进入“过渡态”，这时就能形成或打破一些化学键，形成新的物质产物（P）。即S变为P。这些具有较高能量，处于活化态的分子称为活化分子，反应物中这种活化分子愈多，反应速率就越快。活化能的定义是在一定温度下一摩尔底物全部进入活化态所需要的自由能，单位是焦耳/摩尔。11、酶的专一性：酶的专一性是指一种酶只能催化一种或一类结构相似的底物进行某种类型的反应。 如果没有酶的专一性，在细胞中有秩序的物质代谢将不复存在，而且酶的应用将如同其他非酶催化剂那样受到局限。 酶的专一性可以分为两类：绝对专一性：一种酶只能催化一种物质进行一种反应，这种高度的专一性称为绝对专一性。相对专一性：一种酶能够催化一类结构相似的物质进行某种相同类型的反应，这种专一性称为相对专一性。12、酶的专一性确定过程：首先要选择一种该酶可催化的物质作为该酶的作用底物，通过实验确定其最适PH、温度等反应条件，其次是实验底物浓度对反应速度的影响，确定其米氏常数Km，然后用其他有可能是该酶作用底物的物质，在相同条件下逐个进行实验，有时要在不同条件下逐个试验，观察是否有催化反应发生，从而确定该酶是属于绝对专一性还是相对专一性，可作用于一类物质，可以选择几种有代表性的底物，求出各自的值，在某些情况下，不同底物有不同的最适PH值，而PH对Km有一定的影响，此时必须作出不同底物各自的PH曲线。然后再在各自的最适PH值条件下进行试验，以确定各底物相对应的Km值，在进行酶的专一性试验时，所使用的酶和各种底物都要尽可能地纯。对于有对称碳原子的物质，应分别对不同的光学异构进行试验。13、酶活力是酶的数量的量度指标，酶的比活力是酶纯度的量度指标，酶转换数是酶催化效率的量度指标，而酶结合效率是酶被固定比例的量度指标。14、固定化酶活性损失的原因：酶本身失活、没从载体上脱落或载体破碎或溶解。15、酶活的可调节性：酶活性调解的几种方式：酶浓度的调节激素调节共价修饰调节限制性蛋白水解抑制剂调节反馈调节金属离子和其它小分子调节。16、几种调节机理：别构效应的调控可逆共价修饰调控酶原的激活激促蛋白质或抑制蛋白质的调控。17、酶活力单位：每一min催化1mol的底物转化为产物的酶量定义为一个活力单位。18、酶的比活力：是指在特定条件下，每1mg酶蛋白所具有的酶活力单位数，即酶比活力=酶活力/mg酶蛋白。19、酶与抑制剂结合后如果Km值增加，则该抑制属于竞争性抑制，Km不变，抑制属于非竞争性抑制。Km减小，抑制属于反竞争性抑制。20、酶的生产菌种要求：酶的产量高。酶的性质应符合使用要求，而且最好是胞外酶生产菌；酶的产量高发酵周期短，培养条件易控制。；菌种产酶性能稳定，不易变异退化，不易感染噬菌体；酶产物易分离纯化，回收率高；不是致病菌，在系统发育上，最好与病原体无关，不产毒素。21、终止酶反应的方法有：反应时间一到，立即取出适量的反应液，置于沸水裕中，加热使酶失活立即加入适宜的酶变性剂，使酶失活加入酸或钾溶液，使反应的PH值迅速远离酶催化反应的最适PH，从而终止反应。将取出的反应液立即置于冰粒堆中，或冰盐溶液中，使反应液的温度迅速降低至10摄氏度以下等等。22、维持酶的稳定化的作用力：金属离子、底物、辅因子和其他低相对分子质量配体的结合作用盐桥和氢键二硫键对氧化修饰敏感的氨基酸含量较低氨基酸残基的坚实装配疏水相互作用。蛋白质蛋白质和蛋白质脂的作用。23、稳定天然酶的方法：固定化非共价修饰化学修饰蛋白质工程。24、酶生物合成的基本过程：RNA的生物合成；翻译；肽链合成的起始；肽链的延长；肽链合成额终止：随着肽链的延伸，mRNA与70s核糖体不断地作相対移动，当mRNA分子中的终止密码子（UAA,UAG,UGA）移动到核糖体的A位时，没有相应的氨酰-tRNA进入，此时释放因子（Release Factor）进入A位，并与终止密码子结合。据研究表明，释放因子有两种，其中RF-1可与UAA和UAG结合，而RF-2可与UAA和UGA结合。在释放因子进入A位后，已合成的完整肽链从P位转移到A位时，被释放出来，随之70s核糖体解离成为30s亚基和50s亚基，可重新用于下一次肽链的合成。新合成的肽链释放出来后，还需经过加工才能形成完整空间结构的酶或蛋白质。加工过程首先经过脱肽甲酰酶的作用，使甲酰甲硫氨酸残基上的甲酰基除去。有时还需要在氨肽酶的作用下从肽链的N-末端切除一个或数个氨基酸残基，然后自动折叠盘曲成完整的空间结构。25、酶生物合成的调节：转录水平的调节控制，又称为基因的调节控制，这种控制理论最早是由雅各和莫诺德于1960年提出的操纵子学说来阐明的，基因对酶生物合成的调节控制有3种模式。即分解代谢物阻遏作用，酶合成的诱导作用以及酶合成的反馈阻遏作用。操纵子学说认为DNA分子中的酶生物合成有关基因有四种，即操纵基因、调节基因、启动基因和结构基因，它们共同作用只能执行一个基因功能。26、酶的合成类型：酶的生物合成模式分为4种：同步合成型：E合成与细胞合成生长同步。当细胞进入对数生长期，酶大量产生，细胞进入平衡期酶合成停止，其生物合成可被诱导，不受分解代谢产物和尾产物阻遏，对应的mRNA不稳定。延续合成型：酶合成伴随着细胞生长开始，但在细胞进入平衡期后，酶还可延续合成较长的一段时间。可诱导，不受尾产物阻遏和降解代谢产物阻遏，其对应的mRNA相对稳定。中期合成型：酶的合成在细胞生长一段时间后才开始，而进入细胞平衡期之后合成终止。受尾产物阻遏，其对应的mRNA不稳定。滞后合成型：只有当细胞生长进入平衡期后酶才开始大量积累，可能受分解代谢产物阻遏，阻遏解除后，酶合成开始，其对应的mRNA稳定性高。27、最理想的合成模型是延续合成型：属于该类的酶可以使组成酶也可以是诱导酶。28、提高酶产量的措施：添加诱导物控制阻遏物浓度添加表面活性剂添加产酶促进剂其他条件的控制，如菌体浓度，基质浓度，二氧化碳等。29、酶（蛋白质）的分离纯化步骤：材料的预处理及细胞破碎：将酶从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性。蛋白质的抽提：通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质抽提出来。蛋白质粗制品的获得：选用适当的方法将所要的蛋白质以其他杂蛋白分离开来。样品的进一步纯化：所得的蛋白质一般含有其他杂蛋白质，需进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。将酶从细胞或培养基中提出，在与杂质分开，而获得与使用目的要求相适应的有一定纯度的酶产品的过程。30、酶分离纯化的原则（思路）：原料来源方便，成本低，酶含量及比活力高，可容性和稳定性好。了解酶生物合成的基因分子学背景。三八加工条件尽可能温和，减少破坏天然构象而导致失活。提供有利于酶活保持的最适溶液环境。建立灵敏、特异、精确的检测手段，有效评估纯化过程。选择恰当的纯化策略。31、酶固定化的四种方法：包埋法吸附法交联法共价偶联法。32、固定化酶的优点：极易将固定化酶与底物、产物分开可长时间进行反应可提高酶的稳定性酶反应过程能严格控制产物溶液中无酶残留，产物易提取适合于多酶反应可增加产物收率，提高产物质量酶的使用效率高，成本低。33、固定化酶的缺点：固定化时酶活力有损失只是用于可溶性底物，而且较适用于小分子底物不像完整细胞能进行多酶序列反应，特别是需要辅因子的反应对胞内酶生产较麻烦。34、固定化后酶活力变化的可能原因：酶分子空间构象有所变化，甚至影响活性中心的氨基酸；酶分子空间自由度（空间位阻）受到限制，影响活性中心对底物的定位作用；骨扩散阻力使底物分子与活性中心的接近受阻；包埋时酶被高分子物质半透膜包围，大分子底物不能透过膜与酶接近。35、固定化后对酶稳定性的影响：热稳定性提高对各种有机试剂及酶抑制剂的稳定性提高对PH稳定性、对蛋白酶稳定性、贮存稳定性和操作稳定性提高。36、固定化后提高稳定性的原因：固定化后酶分子与载体多点连接，可防止酶分子伸展变形。酶的活力缓慢释放抑制酶的自降解。37、固定化酶的最适温度的变化：最适温度升高，这是个有利的结果。38、固定化后最适PH和米氏常数也会变化。39、评价酶固定化的指标：固定化酶的比活操作半衰期酶结合效率固定化指标酶活力回收率相对酶活力40、酶的化学修饰就是对酶在分子水平上用化学方法进行改造，即在体外将酶分子通过人工方法与一些化学基团，特别是具有生物相容性的大分子进行共价连接，从而改变酶分子的酶学性质的技术。 其目的在于提高酶的稳定性，对于医学上的治疗用酶，还有一个目的就是要降低或消除酶分子的免疫原性，在基础酶学研究中，化学修饰也是研究酶的活性中心性质的重要手段。41、酶化学修饰的机理：影响蛋白质化学修饰反应进程的因素主要有两个：一是蛋白质功能基团的反应性，二是修饰剂的反应性。（1）影响酶蛋白功能基反应性的因素：A、微区的极性对整个反应速度的影响还与反应的类型有密切的关系。B、氢键效应维持其稳定性，也是使PK发生改变的一个因素。C、静电效应影响蛋白质中可电离氨基酸侧链的PK值的重要因素。D、位阻效应的空间障碍影响反应基团性质。（2）修饰剂反应性的决定因素：A、选择吸附能使修饰过程的速度加强了。B、静电相互作用可使修饰剂向多功能部位中的一个残基定位，或向双功能基的一侧定位。C、位阻因素可能阻止修饰剂与功能基的正常反应。D、催化因素也可以增加其稳定性。42、修饰酶的特性：热稳定性提高。抗各类失活因子能力提高；抗原性消除。体内半衰期延长最适PH改变酶学性质变化对组织分布能力改变。43、简述修饰酶热稳定性提高的原因：由于修饰剂共 价连接于酶分子后，使酶的天然构象产生一定的“刚性”，不易伸展失活，并减少了酶分子内部基团的热振动，从而增加了热稳定性。而且这种热稳定性效果和修饰 剂与酶之间的交联点的数目有关，通常交联点增多，酶的热稳定性就可提高。热稳定性提高的另外一个原因是修饰剂本身增加了酶分子的表面亲水性，使酶分子在水 溶液中形成新的氢键和盐桥。44、简述修饰酶抗各类失活因子能力提高的原因：修饰剂所产生的的空间屏蔽有效地阻挡了水解酶、抑制剂等失活因子的进攻，或酶分子中对蛋白水解酶等失活因子敏感的基团被修饰。45、酶反应器的类型：游离酶反应器（搅拌罐式反应器、超滤膜酶反应器）固定化酶反应器（搅拌罐型反应器、固定床型反应器、流化床型反应器、膜型反应器）鼓泡塔型反应器。46、酶反应器的选择（依据）：(1)酶的形状、大小及机械强度；(2)底物的性质；(3)反应操作的要求； (4)反应动力学及传质传热特性；(5)酶的稳定性、再生及更换；(6)反应器的制造成本，运行成本及应用的可塑性等。47、酶反应器的操作要点：控制酶反应器中流动状态维持酶反应器的恒定生产能力保持酶反应器的稳定，使其能长期运转使用防止酶反应器的污染。48、简述微生物污染对酶反应器操作的影响：因为微生物污染会消耗底物或产物，产生酶和代谢产物，进而使产物降解，或者产生令人厌恶的副产物，或者使目定化酶活性载体降解。当产物如抗生素、酒精、有机酸能抑制微生物生长时，污染会减小。向底物加入杀菌剂、抑菌剂、有机溶剂或将底物料液预先过滤等也是防止污染的办法之一。在温度45以上或在酸性、碱性缓冲液中进行操作都可减少微生物的污染。高浓度底物可以提高渗透压、降低水活度、抑制微生物生长。此外，酶反应器在每次使用后，反应器要进行适当消毒。49、模拟酶：又称人工酶或酶模型。一般来说，模拟酶是在分子水平上模拟酶的活性部位的形状、大小及其微环境等结构特征，以及酶的作用机理的立体化学等特征而设计的一种具有催化作用的人工物质。、50、设计人工酶模型考虑的因素：对酶活性中心底物复合物的了解对酶的专一性机器同底物结合的方式与能力的了解应具有足够的水溶性，并在接近生理条件下保持其催化活性。51、模拟酶的分类：主客体酶模型：包括糊精、冠醚、穴醚、杂环大环化合物和卟啉类。胶束酶模型肽酶抗体酶分子印迹酶模型半合成酶。52、酶与抗体的区别：酶：能与反应过渡态物质进行选择性结合的催化物质。抗体：机体的免疫系统生产的，可以和基态分子结合的物质。抗体分子具有的多样性赋予它几乎无限的识别能力，从而产生高度特异性和亲和性。53、抗体酶：利用抗体的高度选择性和酶的高效催化能力相结合，生产的一类具有催化活力的免疫球蛋白。54、抗体酶的制备：拷贝法、引入法、诱导法等。55、酶在非水相催化的意义：可作用于水不溶底物，拓宽底物范围改变平衡点，调节反应方向刚性增加，增强专一性，有利于调控催化底物的选择性。酶的热稳定性提高酶不溶于有机溶剂，反应后酶易回收可避免微生物污染减少由水引起的副产物有机相中产物提取简便。56、有机相反应体系：（1）非极性有机溶剂酶悬浮体系：用非极性有机溶剂取代所有的大量水，使固体酶悬浮在有机相中，但仍然含有必须的结合水以保持酶的催化活性。酶的状态可以是结晶态、冻干状态、沉淀状态或者吸附在固体载体表面上。（2）有机溶剂与水形成均匀的单相溶液体系：酶、底物合产物都能溶解在这种体系中。（3）由含有溶解酶的水相和一个非极性的有机溶剂相组成的两相体系。57、非水介质酶存在状态：第一类：固态酶：它包括冷冻干燥的酶粉或固定化酶，它们以固体形式存在有机溶剂中。利用结晶酶进行非水介质中催化反应和酶结构的研究，结晶酶的结构更接近于水溶液中酶的结构，它的催化效率也远高于其他类型的固态酶。 第二类：可溶解酶：它主要包括水溶性大分子共价修饰酶和非共价修饰的高分子酶复合物、表面活性剂酶复合物以及微乳液中的酶等。58、非水相中酶学性质：（1）热稳定性增加，原因：有机溶剂缺少使酶热失活的水分子，使得酶分子中谷氨酸等的脱氨基作用，天冬氨酸肽键的水解，二硫键的破坏等失活作用难以发生。（2）底物特异性增强：原因：有机相中底物与酶结合不再依靠疏水作用，而是利用二者结合的自由能来加速反应；底物和介质的疏水性直接影响底物在酶活中心和介质二者之间的分配，进而影响专一性和催化效率。（3）对映体选择性减弱：原因：两种对映体物质（D、L）从酶的疏水部位置换水分子的能力不同，而在疏水性很强的非水相，这种置换就变得差异不大了。（4）键选择性改变。（5）PH记忆。59、酶的定向进化是指在实验室中模仿自然进化的关键步骤（突变、重组和筛选），在较短的时间内完成漫长的自然进化过程，有效改造蛋白质，使之适于人类的需要。其特点认为引发、较短时间、认为选择。应用：提高酶的催化效率、增强酶的稳定性、改变酶的底物特异性。60、设计“L-谷氨酸脱羧酶的固定化”的固定化过程？答：固定化方法：包埋法 ；基本原理：在酶本身不发生化学反应的情况下，将其包埋进半透性的多聚物内。水分、小分子底物和产物可以自由出入，而酶蛋白却不会漏出。 步骤1：酶与载体溶液混合；解说：按1：20的比例将酶液加到50mL 2.5%海藻酸钠溶液中混合均匀。步骤2：固定造粒； 解说：用玻璃注射器将含酶混合液用20G针头滴入5%CaCl2中制成共固定化凝胶颗粒。固化4h后用水冲洗备用。颗粒直径为4-5mm。步骤3：固定化酶活力测定；解说：称取固定化L-谷氨酸脱羧酶颗粒10g，置于三角瓶中，加水12ml和pH4.6醋酸缓冲液6ml，37下恒温15min，再加入40mmol/l谷氨酸标准溶液2ml，37下恒温振荡反应30min。反应前后分别取样经适当稀释后，用茚三酮显色法测定L-谷氨酸含量。61、设计一种稳定邻苯二酚加氧酶使用性能的实验方案。答：目的：了解固定化酶的制备原理和学习酶的固定化制作方法；比较溶液酶与固定化酶的特性差异，了解固定化酶的优点。原理：固定化酶是指在一定空间内呈闭锁状态存在的酶，能连续进行反应，反应后的酶可以回收重复使用。与溶液酶相比具有下列优点：极易与底物、产物分开；可长时间反应；可提高酶的稳定性；反应过程能严格控制；产物溶液中无酶残留，产物易提取；适合于多酶反应；可增加产物收率；酶的使用效率高。方法：酶与载体溶液混合：按1：20的比例将酶液加到50mL 2.5%海藻酸钠溶液中混合均匀。固定造粒：用玻璃注射器将含酶混合液用20G针头滴入5%CaCl2中制成共固定化凝胶颗粒。固化4h后用水冲洗备用。颗粒直径为4-5mm。固定化酶活力比较：称取固定化蔗糖酶颗粒10g，置于三角瓶中，另取0.5ml蔗糖酶溶液，加pH4.6醋酸缓冲液至13ml，37下恒温15min，再各加入2%蔗糖标准溶液3ml，37下恒温振荡反应15min。反应前各加入本尼迪克特试剂7毫升，混匀后放入沸水浴中煮2-3min。观察有无红黄色沉淀产生，比较等量固定化酶与溶液酶反应速度。62、设计一种稳定加氧酶使用性能的实验方案。答：目的：了解固定化酶的制备原理和学习酶的固定化制作方法比较溶液酶与固定化酶的特性差异了解固定化酶的优点。原理：固定化酶是指在一定空间内呈闭锁状态的酶，能连续进行反应，反应后的酶可以回收重复使用，与溶液酶相比具有下列优点：极易与底物、产物分开，可长时间反应，可提高酶的稳定性，反应过程能严格控制，产物溶液中无酶残留。方法：没有载体溶液混合：按1：20的比例将酶容液加到50ml2.5%海藻酸钠溶液中混合均匀。固定制粒：用玻璃注射器将含酶混合液用20G针头滴入5%CaCl2中制成共固定化凝胶颗粒，固化4h后用水洗涤备用。固定酶活力比较：称取固定化蔗糖酶颗粒10g，置于三角瓶中，另取0.5ml蔗糖酶溶液，加PH4.6醋酸缓冲液至13ml，37摄氏度下恒温15min，再各加入2%蔗糖标准溶液3ml，37摄氏度下恒温震荡反应15min，反应前各加入本尼迪克特试剂7ml，混匀后放入沸水裕中煮2-3min，观察有无红黄色沉淀产生，比较等量固定化酶与溶液酶反应速度。63、试论述现代酶反应工程多以固定化酶为催化剂依据：酶作为蛋白质，其异体蛋白的抗原性，受蛋白水解酶水解和抑制作用，在体内半衰期短等缺点严重影响医用酶的使用效果，甚至无法使用，工业用酶常常由于酶蛋白的抗酸、碱、有机溶剂变性及抗热失活能力差，容易受产物和抑制剂的抑制，工业反应要求PH和温度不总是在酶反应的最适PH合最适温度范围内，底物不溶于水或酶的Km值过高等弱点而限制了酶制剂的应用范围。固定化酶的定义：是指在一定空间内呈闭锁状态存在的酶，能连续进行反应，反应后的酶可以回收重复使用。固定化酶技术是酶工程的核心，实际上有了酶的固定化技术，煤在工业生产中的利用价值才真正得到体现。固定化酶的优点：极易将固定化酶与底物、产物分开可长时间进行反应可提高酶的稳定性酶反应过程能严格控制产物溶液中无酶残留，产物易提取适合于多酶反应可增加产物收率，提高产物质量酶的使用效率高，成本低。64、试论述实施天然酶化学修饰的必要性和可行性？答：（1）酶的化学修饰的必要性 酶作为蛋白质，其异体蛋白的抗原性、受蛋白水解酶水解和抑制剂作用、在体内半衰期短等缺点严重影响医用酶的使用效果，甚至无法使用。工业用酶常常由于酶蛋白抗酸、碱、有机溶剂变性及抗热失活能力差，容易受产物和抑制剂的抑制；工业反应要求的pH和温度不总是在酶反应的最适pH和最适温度范围内；底物不溶于水或酶的Km值过高等弱点而限制了酶制剂的应用范围。酶的化学修饰就是对酶在分子水平上用化学方法进行改造，即在体外将酶分子通过人工方法与一些化学基团，特别是具有生物相容性的大分子进行共价连接，从而改变酶分子的酶学性质的技术。在酶工程中，酶的化学修饰的主要目的在于提高酶的稳定性。对于医学上的治疗用酶，还有一个目的就是要降低或消除酶分子的免疫原性。在基础酶学研究中，化学修饰法也是研究酶的活性中心性质的重要手段。（2）化学修饰的可行性 影响蛋白质化学修饰反应进程的因素主要有两个：一是蛋白质功能基的反应性；二是修饰剂的反应性。现分述如下。(1)影响酶蛋白功能基反应性的因素A、微区的极性：微区的极性是决定基团解离状态的关键因素之一。B、氢键效应：天然蛋白质或它的离子通过氢键来维持其稳定性，也是使pK发生改变的一个因素。C、静电效应：用高分辨率的核磁共振法对组氨酸残基的电离行为进行的研究表明，不同蛋白质中的组氨酸残基的pK是不同的。D、位阻效应：处于蛋白质表面的功能基，一般说来比较容易与修饰剂反应。但是，如果烷基在空间上紧靠功能基，会使修饰剂不能与功能基接触，这时就要出现位阻效应。（2）酶蛋白功能基的超反应性：超反应性指的是蛋白质的某个侧链基团与个别试剂能发生非常迅速的反应。多数蛋白质的功能基与简单氨基酸中的同样基团相比，反应性要差。（3）修饰剂反应性的决定因素：选择吸附：化学修饰前，修饰剂是根据各自的特点，选择性地吸附在低或高极性区的，有时可以根据对速度的饱和效应，检测出蛋白质修饰剂复合物的形成。静电相互作用：带电的修饰剂能被选择性地吸引到蛋白质表面带相反电荷的部位。位阻因素：蛋白质表面的位阻因素或者底物、辅因子、抑制剂所产生的位阻因素都可能阻止修饰剂与功能基的正常反应。（4）化学修饰的措施：修饰酶的功能基团 酶分子中的可解离基团如氨基、羧基、羟基、巯基、咪唑基等，都是可以被修饰的基团。