免疫学临床应用.ppt

n免疫诊断n免疫治疗n免疫预防免疫学诊断 一、抗原或抗体的检测二、淋巴细胞的测定三、免疫学检测方法的应用免免疫疫学学诊诊断断（一）抗原抗体反应的原理免免疫疫学学诊诊断断一、抗原或抗体的检测1 1、抗原抗体反应的、抗原抗体反应的 特异性特异性（1 1）特异性：基于两）特异性：基于两 种分子间种分子间 的结构互补性和亲和性。的结构互补性和亲和性。（2 2）可逆性）可逆性（3 3）适适宜宜的的条条件件：电电解解质质、pHpH、温度等温度等2 2、抗原抗体反应的可见性、抗原抗体反应的可见性 抗原抗体按适当比例结合，形成肉眼可抗原抗体按适当比例结合，形成肉眼可见的现象。见的现象。应 用1、利用已知抗原检测未知抗体（1）检测病原微生物的相应抗体以辅助诊断疾病：伤寒病、流行性乙型脑炎、AIDS病等。（2）检测自身抗体诊断自身免疫病：SLE、类风湿性关节炎等2、利用已知抗体检测未知抗原（1）鉴定病原菌：诊断疾病（2）检测肿瘤相关抗原：检测甲胎蛋白以诊断肝癌（3）检测血型抗原、HLA抗原：鉴定血型，亲子鉴定（4）检测药物半抗原：确认运动员是否服用兴奋剂（二）抗原或抗体的检测方法 凝集反应沉淀反应补体参与的抗原抗体反应免疫标记技术 （一）（一）凝集反应（凝集反应（agglutinationagglutination）颗颗颗颗粒粒粒粒性性性性抗抗抗抗原原原原（红红红红细细细细胞胞胞胞、细细细细菌菌菌菌、乳乳乳乳胶胶胶胶颗颗颗颗粒粒粒粒等等等等）与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。1 1、直接凝集、直接凝集(direct agglutination)(direct agglutination)玻片凝集、试管凝集玻片凝集、试管凝集2 2、间接凝集（、间接凝集（indirect agglutinationindirect agglutination）可溶性抗原包被在乳胶颗粒或红细胞表面，与相应可溶性抗原包被在乳胶颗粒或红细胞表面，与相应 抗抗 体混合出现的凝集现象。体混合出现的凝集现象。3 3、抗球蛋白试验（、抗球蛋白试验（CoombsCoombs试验）试验）抗原与单价抗体（不完全抗体）结合不出现凝集块，再加入抗球蛋白后即抗原与单价抗体（不完全抗体）结合不出现凝集块，再加入抗球蛋白后即形成凝集块。形成凝集块。用于检测抗用于检测抗RhRh抗体以诊断新生儿溶血性贫血。抗体以诊断新生儿溶血性贫血。乳胶颗粒乳胶颗粒红细胞红细胞类风湿因子检测类风湿因子检测妊娠试验妊娠试验间接凝集直接凝集（二）沉淀反应（二）沉淀反应（precipitationprecipitation）可溶性抗原可溶性抗原（免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液等）与相应抗体结合，（免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液等）与相应抗体结合，形成不溶性免疫复合物，出现不透明的沉淀物。多在半固体琼脂凝胶上进行，形成不溶性免疫复合物，出现不透明的沉淀物。多在半固体琼脂凝胶上进行，形成白色的沉淀。可分为单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验、免疫电泳、形成白色的沉淀。可分为单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验、免疫电泳、免疫比浊法等。免疫比浊法等。免疫比浊法：快速简便。用于血免疫比浊法：快速简便。用于血清清IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM、补体补体C3C3、C4C4含含量测定量测定 （三）补体参与的抗原抗体反应（三）补体参与的抗原抗体反应1 1、50%50%补体溶血试验（补体溶血试验（补体溶血试验（补体溶血试验（CH50CH50测定）测定）测定）测定）血清总补体量测定血清总补体量测定血清总补体量测定血清总补体量测定2、补体结合试验(complement fixation test)：检测抗原或抗体。原理：用已知的指示系统检测试验系统是否结合补体进行诊断试验原理？试验原理？检测系统：待测样品和已知检测系统：待测样品和已知抗原（或抗体）抗原（或抗体）指示系统：指示系统：SRBCSRBC和溶血素和溶血素溶血溶血阴性；不溶血阴性；不溶血阳性阳性补体补体 用用标记物标记抗体或抗原标记物标记抗体或抗原进行抗原抗体反应借以提高免疫学诊断的敏感性进行抗原抗体反应借以提高免疫学诊断的敏感性荧光素荧光素 ：异硫氰酸荧光素（黄绿异硫氰酸荧光素（黄绿色荧光）、藻红蛋白、色荧光）、藻红蛋白、罗丹明罗丹明（红色荧光）（红色荧光）放射性同位素：放射性同位素：125125I I、131131I I酶：酶：酶：酶：辣根过氧化物辣根过氧化物辣根过氧化物辣根过氧化物酶、硷性磷酸酶酶、硷性磷酸酶酶、硷性磷酸酶酶、硷性磷酸酶免疫荧光检测法（免疫荧光检测法（IFAIFA）放射免疫检测法（放射免疫检测法（RIARIA）酶免疫检测法（酶免疫检测法（EIAEIA）（四）免疫标记技术液相（液相（ELISAELISA）、固相（免疫组化技术）、固相（免疫组化技术）直接荧光法直接荧光法间接荧光法间接荧光法免疫荧光技术间接法间接法双抗夹心法双抗夹心法竞争法竞争法E:辣根过氧化酶辣根过氧化酶 HRPS:底物底物 二氨基联苯胺二氨基联苯胺 DAB/邻苯胺邻苯胺酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA法）间接法DAB双抗夹心法DAB BAS-ELISABAS-ELISA法法（biotin-avidin-systembiotin-avidin-system，生生物物素素-抗抗生生物物素素系系统统-ELISA-ELISA法法）：敏敏感感性性更更高高。用用于于抗抗原原抗抗体体以以及及DNADNA、RNARNA的检测。的检测。卵白及某些微生物中的蛋白质 灵敏度达灵敏度达pgpg水平。常用于微量物质测定，如胰岛素、生长激素、甲状腺水平。常用于微量物质测定，如胰岛素、生长激素、甲状腺素、孕酮等激素、吗啡、地高辛等药物以及素、孕酮等激素、吗啡、地高辛等药物以及IgEIgE等。等。放射免疫检测法（RIA）竞争法竞争法能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量，常用于检测多种病毒的抗体或抗能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量，常用于检测多种病毒的抗体或抗原，如抗原，如抗HIVHIV抗体的检测。抗体的检测。免疫印迹法免疫印迹法 二、淋巴细胞的测定（一）淋巴细胞的分离与类型鉴定1 1、淋巴细胞的分离：外周血葡聚糖、淋巴细胞的分离：外周血葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法泛影葡胺密度梯度离心法白膜层白膜层单核细胞单核细胞淋巴细胞淋巴细胞B BT T吸附分离吸附分离过尼龙毛柱分离过尼龙毛柱分离（1）间接免疫荧光法：鉴定细胞的群、亚群。用CD3、CD4、CD8单克隆抗体检测患者外周血T细胞表面相应抗原CD3+T细胞，计算T细胞总数。CD4+CD4+T细胞，计算CD4+T细胞数。CD8+CD8+T细胞，计算 CD8+亚群T细胞数 计算CD4+/CD8+比例 正常人PMB中T细胞占6575%CD4+/CD8+约为1.522 2、淋巴细胞的类型鉴定：淋巴细胞表面标记检测、淋巴细胞的类型鉴定：淋巴细胞表面标记检测、记数记数用mIgM、mIgD单克隆抗体检测患者外周血B细胞表面相应的抗原已检测B细胞的数量正常人外周血中SmIg+细胞占812%（2）流式细胞术（flow cytometry）（二）淋巴细胞功能测定（二）淋巴细胞功能测定1 1、T T细胞功能测定细胞功能测定（1 1）T T细胞增殖试验（淋转）细胞增殖试验（淋转）：丝裂原、抗：丝裂原、抗CD3CD3单克隆抗体单克隆抗体 等能非特异地激活等能非特异地激活T T细胞，使之发生转化增殖，计算淋巴母细胞转化率（正细胞，使之发生转化增殖，计算淋巴母细胞转化率（正常值常值6580%6580%）。形态学观察法形态学观察法 3 3H-TdRH-TdR渗入法：用液体闪烁仪测定样品的渗入法：用液体闪烁仪测定样品的 射线放射活性射线放射活性 MTTMTT法法（2 2）淋巴细胞介导的细胞毒试验（）淋巴细胞介导的细胞毒试验（LMCLMC）检测检测CTLCTL、NKNK、LAKLAK、TILTIL细胞杀伤靶细胞的功能细胞杀伤靶细胞的功能（2）抗体形成细胞测定 溶血空斑试验 （hemolytic forming cell assay，HFC）计算HFU/ml2 2、B B细胞功能测定细胞功能测定（1）B细胞增殖试验：LPSLPS、SPASPA刺激，检查抗体形成细胞刺激，检查抗体形成细胞 的数目的数目 可用于鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功可用于鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功能。能。IL-2、IL-2R、rIFN、TNF等检测。免疫学方法：免疫学方法：ELISAELISA、RIARIA等。等。细胞生物学方法细胞生物学方法 分子生物学方法，如聚合酶链反应（分子生物学方法，如聚合酶链反应（PCRPCR）法等）法等3、细胞因子检测4、体内免疫细胞功能测定：皮肤试验（1 1）迟发型超敏反应：）迟发型超敏反应：旧结核菌素试验（旧结核菌素试验（OTOT试验试验 ）皮试（皮试（+）有一定的细胞免疫能力有一定的细胞免疫能力 皮试（皮试（）细胞免疫功能缺损细胞免疫功能缺损（2 2）速发型超敏反应：青霉素皮试、）速发型超敏反应：青霉素皮试、异种血清皮试异种血清皮试免疫治疗(immunotherapy)针对机体低下或亢进的免疫状态，人为地针对机体低下或亢进的免疫状态，人为地增强或抑制增强或抑制机体的免疫功能机体的免疫功能 以达到治疗疾病以达到治疗疾病的治疗方法称之。的治疗方法称之。免疫调节（免疫调节（immunomodulationimmunomodulation）利利用用物物理理、化化学学和和生生物物学学的的手手段段来来调调节节机机体体的的免免疫功能，使原有的免疫功能增强或减弱。疫功能，使原有的免疫功能增强或减弱。免疫重建免疫重建(immunoreconstitution(immunoreconstitution)将将免免疫疫功功能能正正常常个个体体的的造造血血干干细细胞胞或或淋淋巴巴细细胞胞移移植植给给患患有有免免疫疫功功能能缺缺陷陷的的个个体体，使使后后者者的的免免疫疫功功能能全全部部或部分得到恢复。或部分得到恢复。一、免疫增强疗法和免疫抑制疗法三、主动免疫治疗（active immunotherapy）和被动免疫治疗（passive immunotherapy）二、特异性免疫治疗和非特异性免疫治疗（一）免疫增强剂（一）免疫增强剂（一）免疫增强剂（一）免疫增强剂化学制剂：化学制剂：化学制剂：化学制剂：1 1、左旋咪唑、左旋咪唑、左旋咪唑、左旋咪唑 2 2、西西西西 咪咪咪咪替丁替丁替丁替丁 微生物制剂：微生物制剂：1 1、卡介苗（、卡介苗（BCGBCG）2 2、短小棒状杆菌、短小棒状杆菌 3 3、微生物提取物、微生物提取物 中药制剂：中药制剂：黄芪、人参、黄芪、人参、枸杞子等枸杞子等免疫增强剂与免疫抑制剂免疫因子：免疫因子：1 1、转移因子、转移因子 2 2、免疫核糖核酸、免疫核糖核酸 3 3、胸腺肽、胸腺肽 适应症适应症：免疫功能低下的患者：免疫功能低下的患者 （1 1）恶性肿瘤）恶性肿瘤 （2 2）免疫缺陷病）免疫缺陷病 （3 3）传染病）传染病副作用副作用：较轻：较轻 二、二、免疫抑制剂免疫抑制剂化学制剂化学制剂化学制剂化学制剂1 1 1 1、烷化剂：环磷酰胺、烷化剂：环磷酰胺、烷化剂：环磷酰胺、烷化剂：环磷酰胺2 2 2 2、抗代谢药：激素：糖皮质激素、抗代谢药：激素：糖皮质激素、抗代谢药：激素：糖皮质激素、抗代谢药：激素：糖皮质激素真菌代谢产物真菌代谢产物真菌代谢产物真菌代谢产物1 1 1 1、环孢素环孢素环孢素环孢素A A A A：对：对：对：对T T T T，尤其是，尤其是，尤其是，尤其是THTHTHTH有较好的选择性抑制作用有较好的选择性抑制作用有较好的选择性抑制作用有较好的选择性抑制作用2 2 2 2、FK-506FK-506FK-506FK-506：其作用强于环孢素：其作用强于环孢素：其作用强于环孢素：其作用强于环孢素A10-100A10-100A10-100A10-100倍，且与环孢素倍，且与环孢素倍，且与环孢素倍，且与环孢素A A A A有明有明有明有明显的协同作用。显的协同作用。显的协同作用。显的协同作用。中药及其有效成分中药及其有效成分中药及其有效成分中药及其有效成分雷公藤多甙雷公藤多甙雷公藤多甙雷公藤多甙 免疫抑制药物的适应症和副作用免疫抑制药物的适应症和副作用 适应症：适应症：适应症：适应症：免疫功能过高引起机体损害的患者免疫功能过高引起机体损害的患者免疫功能过高引起机体损害的患者免疫功能过高引起机体损害的患者 1 1、抗移植排斥、抗移植排斥、抗移植排斥、抗移植排斥 2 2、超敏反应性疾病：激素、超敏反应性疾病：激素、超敏反应性疾病：激素、超敏反应性疾病：激素 3 3、自身免疫病：激素、雷公藤多甙、自身免疫病：激素、雷公藤多甙、自身免疫病：激素、雷公藤多甙、自身免疫病：激素、雷公藤多甙 4 4、感染性炎症：激素、感染性炎症：激素、感染性炎症：激素、感染性炎症：激素副作用：副作用：明显明显 ，主要是骨髓抑制、肝肾毒性等主要是骨髓抑制、肝肾毒性等 其抑制作用是非特异性的，长期应用可导致：继其抑制作用是非特异性的，长期应用可导致：继 发性免疫缺陷发性免疫缺陷 、严重感染、严重感染、肿瘤肿瘤 抗体为基础的免疫治疗一、免疫血清一、免疫血清抗毒素血清、胎盘（丙种）球蛋白、抗菌免疫血清、抗病毒免疫血清、抗抗毒素血清、胎盘（丙种）球蛋白、抗菌免疫血清、抗病毒免疫血清、抗淋巴细胞丙种球蛋白等淋巴细胞丙种球蛋白等二、单克隆抗体（二、单克隆抗体（mAbmAb）：）：用于靶向治疗等。用于靶向治疗等。三、基因工程抗体：降低抗体的免疫原性三、基因工程抗体：降低抗体的免疫原性嵌合抗体、人源化抗体、单链抗体、双价抗体、双特异性抗体等嵌合抗体、人源化抗体、单链抗体、双价抗体、双特异性抗体等抗原为基础的免疫治疗细胞因子及其拮抗剂为基础的免疫治疗LAKLAK（lymphokine activated killer cellslymphokine activated killer cells）细胞）细胞淋巴因子活化的杀伤细胞淋巴因子活化的杀伤细胞。是将外。是将外周血淋巴细胞在体外经过周血淋巴细胞在体外经过IL-2IL-2培养后诱导产生的一种新型的杀伤细胞，具有更强的培养后诱导产生的一种新型的杀伤细胞，具有更强的杀瘤特性。其杀伤肿瘤细胞不需抗原致敏且无杀瘤特性。其杀伤肿瘤细胞不需抗原致敏且无MHCMHC限制性。主要为限制性。主要为NKNK细胞细胞TIL(tumorinfiltrating lymphocytes)TIL(tumorinfiltrating lymphocytes)细胞细胞肿瘤侵润淋巴细胞肿瘤侵润淋巴细胞。是从实体瘤组织中。是从实体瘤组织中分离得到的，经体外分离得到的，经体外IL-2IL-2培养后获得比培养后获得比LAKLAK细胞更强的杀伤活性。细胞更强的杀伤活性。细胞为基础的免疫治疗疫苗疫苗 应用微生物制备的具有免疫原性的物质。应用微生物制备的具有免疫原性的物质。包括包括包括包括灭活疫苗（死疫苗）和减毒活疫苗。如灭活疫苗（死疫苗）和减毒活疫苗。如灭活疫苗（死疫苗）和减毒活疫苗。如灭活疫苗（死疫苗）和减毒活疫苗。如 麻疹疫苗，脊麻疹疫苗，脊麻疹疫苗，脊麻疹疫苗，脊髓灰质炎疫苗，乙肝疫苗等。髓灰质炎疫苗，乙肝疫苗等。髓灰质炎疫苗，乙肝疫苗等。髓灰质炎疫苗，乙肝疫苗等。类毒素类毒素将细菌毒素用甲醛减毒后制备的具有免疫将细菌毒素用甲醛减毒后制备的具有免疫 原性的物质。原性的物质。如喉类毒素，破伤风类毒素。如喉类毒素，破伤风类毒素。（二）人工被动免疫（artificial passive immunization）是给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞因子等制剂，以治疗或紧急预防感染的措施。如抗毒素、人免疫球蛋白制剂、细胞因子制剂、单抗制剂等。（一）人工主动免疫（artificial active immunization）用疫苗、类毒素接种机体，使之产生特异性的免疫，从而预防感染的措施。一、人工免疫（三）计划免疫免疫预防二、新型疫苗的发展三、疫苗的应用1 1、抗感染、抗感染2 2、抗肿瘤、抗肿瘤3 3、计划生育、计划生育4 4、防止免疫病理损伤、防止免疫病理损伤复 习 题一、名词解释 凝集反应、沉淀反应、ELISA、人工主动免疫、人工被动免疫、类毒素、LAK细胞、TIL细胞二、问答题 1、简述抗原抗体反应的特点。2、何谓免疫标记技术？简述三大免疫标记技术 的原理和应用。3、试比较人工主动免疫与人工被动免疫。