微生物第八章病原学诊断与防治.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第八章 病原学诊断与防治,广州医学院,病原生物学教研室,陈 晓 湘,诊断,病原学检测,血清学检测,防治,特异性防治：人工主动免疫、人工被动免疫,非特异性防治：,抗生素、抗病毒药物、抗真菌药物,第一节 细菌学诊断,细菌学诊断,检测病原菌及其抗原，产物或核酸,血清学诊断,检测患者血清中特异性抗体,一、病原菌检测,标本采集与送检原则：,根据不同疾病和不同病期，采取不同标本。,无菌操作，避免杂菌污染。,应在使用抗菌药物前采集标本。,尽可能采集病变明显部位的材料。,标本必须新鲜，采集后尽快送检。,送检过程中要采取适当的保存方式。,做好标记，详细填写化验单，保证各环节准确无误。,致病菌的检验程序,标本,形态结构检查,分离培养与鉴定,病原菌抗原检测,其它检测,光镜、电镜、染色法,形态特征,培养特征,生化反应,药敏试验,血清学反应,沉淀反应,协同凝集,免疫荧光,对流免疫电泳,酶免疫测定,免疫印迹,细菌代谢产物,（气相色谱）,PCR,查细菌核酸,噬菌体分型,细菌素测定,分子生物学技术,动物试验,二、病毒的分离培养与鉴定,（一）病毒的分离,动物接种：,选择易感动物及适宜接种部位，观察发病情况,鸡胚培养：,不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。,细胞培养,：,分离病毒最常用的方法,（,1,）原代细胞来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传,2-3,代。,（,2,）二倍体细胞在体外分裂,50-100,代后仍保持,2,倍体染色体数目的单层细胞，可用于病毒分离和疫苗生产。,（,3,）,传代细胞能在体外无限传代的细胞，多由癌细胞或二倍体细胞突变而来，不能用于疫苗生产。,病毒在培养细胞中增殖的指标,细胞的变化,细胞病变效应,（,CPE,）,：,即某些病毒在细胞内增殖引起的特有的细胞病变（细胞变圆、聚集、坏死、溶解、脱落等）,细胞融合,：形成多巨核细胞,包涵体,：某些病毒在培养细胞胞浆或核内形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。,红细胞吸附,干扰现象,细胞代谢改变,（,pH）,正常细胞,病变细胞,（二）病毒的数量与感染性测定,滴定：,测定单位体积中感染性病毒的数量,蚀斑测定法,病毒感染单层细胞后，产生的局限性病灶，称蚀斑。蚀斑是由一个感染性病毒体复制形成的，称蚀斑形成单位，病毒悬液中的感染性病毒量以每毫升的蚀斑形成单位来表示。,50%,组织细胞感染量,鸡胚动物或细胞后，引起,50%,发生死亡或病变的最小量。,（三）新分离病毒的鉴定,核酸类型的测定,理化性状的检测,形态学观察,血清学鉴定,基因测序和生物对比,三、病毒感染的血清学诊断,用已知病毒抗原检测病人血清中相应抗体以诊断病毒性疾病。,中和试验,补体结合试验,血凝抑制试验,凝胶免疫扩散试验,四、病毒感染的快速诊断,（一）形态学检查,电镜和免疫电镜直接观察病毒,普通光镜观察包涵体,（二）检测病毒蛋白抗原,用已知特异性抗体直接检测病毒蛋白抗原（简便、敏感、特异）,常用方法：,免疫荧光技术（,IF）,固相放射免疫测定（,SPRIT）,酶免疫技术（,EIA）,等。,（三）检测病毒特异性,IgM,抗体,检测病毒特异性,IgM,抗体可诊断急性感染。,（四）检测病毒核酸,1,核酸杂交,斑点杂交（,dot hybridization,）,原位杂交（,in site hybridization,）,DNA,印迹杂交（,Southern blot,）,RNA,印迹杂交（,Northern blot,）,2,核酸扩增,聚合酶链反应,（,polymerase chain reaction，PCR,）,连接酶链反应（,ligase chain reaction，LCR,）,反转录,PCR（Reverse transcrptase PCR，RT-PCR,）,3,基因芯片技术（,gene chip,）,第三节 真菌学诊断,标本,直接镜检,深部标本,染色标本,G,染色,G,+,圆形,大小不均,有芽生孢子,分离培养,沙氏培养基,菌落观察,角质标本,不染色,10%,KOH,观察菌丝、孢子,类型 大小 颜色 皱摺,鉴定,动物实验,（致病性真菌）,接种,观察发病情况,死亡后取标本进一步鉴定,皮肤超敏反应,快速诊断,血清学实验,核酸检测,真菌毒素检测,新生隐球菌脑脊液涂片,假菌丝,第四节 特异性预防与治疗,一、人工主动免疫,(,artificial active immunity),将疫苗,(,vaccine),或类毒素接种于人体，使机体主动产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施，主要用于预防。,疫苗,死疫苗,活疫苗,新型活疫苗,基因工程疫苗,重组载体疫苗,合成疫苗,亚单位疫苗,DNA,疫苗,转基因植物疫苗,治疗性疫苗,类毒素,外毒素,0.3%0.4%,甲醛,类毒素,用于人工主动免疫的生物制剂,二、人工被动免疫,(,artificial passitive immunity),注射含有特异性抗体的免疫血清、纯化免疫球蛋白或细胞因子等免疫制剂，使机体立即获得特异性免疫。,人工被动免疫作用作用发挥迅速，但这些免疫物质不是病人自己产生，故维持时间短。主要用于治疗或紧急预防。,抗毒素,抗菌血清,胎盘丙种球蛋白、血清丙种球蛋白,其他免疫制剂,用于人工被动免疫的生物制剂,两种人工免疫的比较,区别要点,人工主动免疫,人工被动免疫,免疫物质,抗原,抗体或细胞因子等,接种次数,1-3,次,1,次,免疫出现时间,慢（注射后,2-4,W,）,快（注射后立刻出现）,免疫维持时间,长（数月数年）,短（,2-3,W,）,用途,多用于预防,多用于治疗或应急预防,三、细菌感染的治疗,抗菌药物,人工合成化学药物,微生物合成的抗生素,（一）抗菌药物种类,按生物来源分,按化学结构和性质分,（二）主要作用机制,影响细胞壁合成,影响细胞膜功能,影响细菌蛋白合成,影响细菌核酸代谢,四、病毒感染的治疗,抗病毒化学制剂,核苷类药物抑制病毒基因复制,抑制病毒基因转录,非核苷类反转录酶抑制剂,蛋白酶抑制剂,其他药物（金刚烷胺）,干扰素及干扰素诱生剂治疗,干扰素,干扰素诱生剂,基因治疗,五、真菌的治疗,卫生、干燥、消毒（福尔马林）,避免直接或间接与患者接触,各种癣症（,局部感染治疗）,外用抗真药（易复发）,深部真菌病（,系统感染）,除去诱因，提高免疫力，,口服,抗真菌药物（副作用大）,