实验四-细胞显微操作技术.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,一、目的要求,练习针刺细胞（未受精卵、去核卵、早期胚胎细胞或体外培养细胞）；,学习微吸管制备；,了解显微移植技术（细胞核、外源基因）,二、原理,采用显微操作系统（倒置显微镜,/,体视显微镜,+,显微操作器）将供体物（基因、细胞核或细胞其他成分）直接注入宿主细胞（去核卵母细胞、胚胎细胞或体外培养的细胞）中，研究供体物的功能或者获得转基因动物的技术。,实验四 细胞显微操作技术,利用显微操作系统将外源目的基因（,DNA,或,RNA,）直接注入到受体细胞或受精卵的核中，使外源基因整合到受体细胞的基因组内，培养,/,筛选，获得转基因动物,/,性状分析；,显微注射是目前转基因效率较好的一种转基因方法，可直接用不含有原核载体,DNA,片段的外源基因进行转移；外源基因的长度不受限制,可达,100 kb,；实验周期相对比较短。它的不足之处是：需要昂贵精密的设备；显微注射操作复杂；导入外源基因整合位点和拷贝数无法控制；常导致插入位点附近宿主,DNA,片段缺失、重组等突变，可造成动物严重的生理缺陷。,外源基因导入,（基因沉默、过表达、转基因动物）,三,、实验材料,斑马鱼,Danio sp.,胚胎,2-cell,4-cell,8-cell,主要仪器和用具,倒置显微镜；显微操作仪；拉针仪,主要试剂,酚红,/,曙红,四、显微注射操作过程,注射针制备,注射针内装液,使用无菌的微量加样器从微注射针的后部加入待注射样品；,注射针安装和定位,（,1,）将装液后的针头游离端安在连接器上，然后旋紧连接器以固定针头，再将其固定到微操作仪的托针管上；,（,2,）把载有待注射样本的培养皿放在显微镜载物台上，用低倍物镜对准细胞调焦；,（,3,）显微镜下使用微操作仪移动注射针，直到,针头的阴影在视野的中心上方,；,（,4,）使用工作用放大倍数，,调准焦距，找到细胞和针尖,。,显微注射,（,1,）使针尖对准细胞的待注射部位（,细胞与针尖在同一焦面上,），旋转推进旋钮，针刺入细胞内（卵膜、细胞膜、核膜）；,（,2,）旋转加样旋钮，将样本加入，并离开细胞。,注射,作 业,简述细胞显微注射过程以及注意事项,显微拍照注射前后的胚胎,请于,9,月,14,日下午,5,点前提交报告,