实验六-IMViC实验.ppt

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实验六,IMViC,与硫化氢试验,实验目的：,学习掌握,IMViC,与硫化氢试验原理,了解,IMViC,与硫化氢试验反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义与方法,IMViC,是吲哚（,indol,）、甲基红（,methyl red test,）、伏,-,普（,Voges-Prokauer test,）和柠檬酸盐（,citrate test,）四个实验的缩写，主要用于快速鉴别,大肠杆菌,和,产气肠杆菌,，多用于水细菌学检查。硫化氢试验也是检查肠道杆菌的生化试验。大肠杆菌虽非致病菌，但在饮用水中超过一定数量，则表示受粪便污染，产气肠杆菌也广泛存在于自然界中，因此检查水时要将两者分开。,实验原理：,色氨酸吲哚玫瑰吲哚,吲哚试剂,大肠杆菌,产气杆菌,葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇 甲基红 -,葡萄糖丙酮酸 甲基红 +,大肠杆菌,产气杆菌,b.Methyl Red(MR)Test,甲基红试验,甲基红试验是用于检测由葡萄糖产生有机酸如甲酸、乙酸、乳酸等，当,细菌分解糖产酸,，培养基中的,甲基红指示剂,由橘黄（,pH6.3,）变为红色（,pH4.2,），即甲基红反应。,c.Voges-Proskauer(V,P)Test,伏普试验是用以检测某些细菌利用葡萄糖产生,非酸性或中性末端产物的能力,，例如丙酮酸，丙酮酸缩合、脱羧生成,乙酰甲基甲醇,，在碱性条件下能被空气中的氧气氧化生成,二乙酰,，后者与蛋白胨中的胍基作用生成红色化合物。,葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇 二乙酰红色化合物,+,胍基化合物,葡萄糖丙酮酸,大肠杆菌,产气杆菌,I M Vi C,试验,VP test,Citrate utilization test,Indol test,Methyl test,I,M,Vi,C,大肠杆菌,+,+,产气肠杆菌,+,+,常用于肠道杆菌的鉴定,操作步骤,（,1,）接种与培养,用,接种针,将,大肠杆菌、普通变形杆菌,分别穿刺接种于,2,支醋酸铅培养基中，置于,37,培养,48 h,。（硫化氢试验）,用,接种环,将,大肠杆菌、产气肠杆菌,分别接种于,2,支蛋白胨水培养基（吲哚试验），,2,支葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红试验），,2,支葡萄糖蛋白胨水培养基（伏普试验），,37,培养,48h,。,思考题,1,讨论,IMViC,试验在医学检验上的意义。,2,解释在细菌培养中吲哚检测的化学原理，为什么在这个试验中用吲哚的存在作为色氨酸酶活性的指示剂，而不用丙酮酸？,3,为什么大肠杆菌是甲基红反应阳性，而产气肠杆菌为阴性？这个试验与伏普试验最初底物与最终产物有何异同处？为什么会出现不同？,4,说明在硫化氢试验中，醋酸铅的作用，可以用哪种化合物代替醋酸铅？,