第十章抗原和抗体的制备与应用.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2016-10-17,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,第十章 抗原和抗体的制备与应用,抗原,是指能够刺激机体产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体内外结合，发生免疫效应（特异性反应）的物质。,抗原的基本特性：,诱导免疫应答的能力，即,免疫原性,。,与免疫应答的产物发生反应，即,抗原性（,免疫反应性,）,。,免疫原,具有免疫原性的物质,免疫原性的,化学基础,化学组成,分子量,化学结构,大分子蛋白、多糖等,10000,具有免疫原性；,4000,免疫原,10000,呈,弱免疫原性,；,4000,一般不具有免疫原性。,一般而言，分子结构和空间结构愈复杂的物质免疫原性愈强,人工抗原,人工抗原,：,用化学合成法或基因重组法制备含有已知化学结构决定簇的抗原，称之为人工抗原,。,人工结合抗原,：,将无免疫原性的简单化学基团与蛋白质载体偶联，或将无免疫原性的有机分子如二硝基苯（,DNP,）或三硝基苯（,TNP,）与蛋白质载体结合，形成载体,-,半抗原结合物，均属人工结合抗原。,人工合成抗原,：,用化学方法将活化氨基酸聚合，使之成为合成多肽,。,只由一种氨基酸形成的聚合体称为同聚多肽，如由左旋赖氨酸形成的共同聚多肽（,PLL,）。,基因工程抗原,：,将编码免疫原性氨基酸序列的基因克隆化并与适当载体（如细菌粒或病毒）,DNA,分子相结合，然后引入受体细胞中（如原核细胞的大肠杆菌或真核细胞酵母菌及哺乳类动物细胞）使之表达，即能获得免疫原性之融合蛋白，经纯化后可做为疫苗，此即基因工程疫苗,。,人工结合抗原,半抗原,：,能与对应抗体结合出现抗原,-,抗体反应、又不能单独激发人或动物体产生抗体的抗原。它,只有反应原性,，,不具免疫原性,，又称不完全抗原,。,一些比一般半抗原分子量小，但有特异结构的化学活性基团物质（如青霉素、磺胺剂等），称为简单半抗原。,载体蛋白,：,制作人工结合抗原时与半抗原进行偶联的具有免疫原性的生物大分子，主要为大分子的蛋白质。如：,牛血清白蛋白,(,BSA,),。,载体蛋白,半抗原,偶联桥,人工抗原合成常用的载体,载体表面应首先应,具有化学活性基团,。,载体应,具备一定的容量,，可以偶联足够的分子,。,载体应该是,惰性,的，不应干扰偶联分子的功能,。,载体应具有足够的,稳定性,，且应该是,廉价易得,的。,牛血清白蛋白,(,BSA,),、卵清蛋白,(,OVA,),、钥孔血蓝蛋白,(,KLH,),、人血清白蛋白,(,HSA,),及人工合成的多聚赖氨酸,(,PLL,),等,是常用的载体蛋白,。,载体的特点,一、抗体的一些基本概念,单克隆抗体,(Monoclonal Antibody,McAb),单个,B,淋巴细胞克隆所分泌的抗体,多克隆抗体,(Polyclonal Antibody),多个,B,淋巴细胞克隆所分泌的抗体,抗原（,antigen,，,Ag,）,表位，抗原结合位点，抗原决定簇（,epitope,）,Ag,1,2,3,4,单克隆抗体有交叉反应是由于不同的抗原上有,完全相同,的表位（,100%,的交叉反应）,或有,相似的,表位（不同程度的交叉反应）。,2,、多克隆抗体的特点,多抗是单抗的混合物，因此多抗的性质是一个群体综合的性质。,特异性一般比单抗差,因为由不同性质的抗体组成，只要其中含交叉反应的抗体，多抗就有交叉反应，所以多抗更容易有交叉反应。,比单抗更容易捕捉抗原。因为含有抗不同表位的抗体，多种抗 体都可与抗原结合。,抗体的纯化、标记比单抗难,因为含有各种不同类型、亚类的抗体，,提纯、标记的方法有所差别。同时,血,清中含有的杂蛋白比较多,.,二、抗体的制备,1,、,单克隆抗体的制备,无法采用生物化学的方法从多抗中分离,必须采用细胞杂交的方法来制备,能否筛选到理想的单克隆抗体有技术问,题也有机遇问题,制备单克隆抗体的基本原理：,致敏的,B,淋巴细胞 骨髓瘤细胞（,myeloma,）,（能够分泌特异性的抗体,，（,不能分泌特异性的抗体，,不能在体外长期生存 ）但能在体外长期生存）,阳性杂交瘤细胞,(,hybridoma),（既能分泌特异性抗体，,又能够在体外长期生存）,克隆化培养,（产生单克隆的阳性杂交瘤细胞）,生产单克隆抗体,1,2,2,2,2,1,2,单抗与多抗的区别,单抗 多抗,抗体组成 单一 复杂,抗体性质 个体的属性 群体综合的性质,纯化标记 容易，效果好 难度高一些,种属来源 绝大多数是小鼠 兔子、羊、豚鼠等,制备周期 长,(,最短,4,个月）短（,2,个月）,制备技术 复杂 简单,经费 多 少,