Lab-1培养基的配制与灭菌.ppt

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实验一 培养基的配制与灭菌,一 教学要求,通过配制牛肉膏蛋白胨等培养基，掌握配制培养基的一般方法和步骤。,了解采用的灭菌方法和原理，掌握高压蒸汽灭菌技术。,二 实验原理,1、Media Types,Solid,Media,semi-solid,Media,liquid,Media,.,Enriched,Media,Selective,Media,Differential,Media,，,combination selective and differential media,2 Sterilization,destruction of all forms of microbial life,including endospores,.,Physical Methods,Moist heat,Autoclaving,Action-protein denaturation,.,Very effective method of sterilization;at about 15 psi,（Ib/in,2,）,of pressure(121C 250F),all vegetative cells and their endospores are killed in about 15 min,.,Dry heat,Direct flaming,example:Inoculation loop,Hot-air sterilization,Baking in oven,Very effective method of sterilization,but requires temperature of 170C 340 Ffor about 2 hr.,三 实验材料与器材,培养基：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1 mol/L NaOH、1 mol/L HCl、KNO,3,、K,2,HPO4,3H,2,O MgSO,4,7H,2,O FeSO,4,7H,2,O.,器材：玻璃器皿、天平、pH试纸、灭菌锅等,四 操作步骤,称量溶解调pH*（过滤*）分装*,加塞*包扎高压蒸汽灭菌,高压蒸汽灭菌灭菌操作步骤,首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。,放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。,加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。,开启电源加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用,1.05 kg/cm,2,，,121.3,，,20 min,灭菌。,灭菌所需时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至,0,时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到,0,时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。,将取出的灭菌培养基放入,37,温箱培养,24 h,，经检查若无杂菌生长，即可待用。,五 注意事项,培养基分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。,使用灭菌锅应严格按照操作程序进行。灭菌所需时间到后，要先切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，才能打开排气阀,。,六 思考题,在配制培养基的操作过程要注意哪些问题？,高压蒸汽灭菌时，为什么要先将灭菌锅锅内的冷空气完全排尽？,