外输泵抑制剂NMP通过调节群体感应系统和自溶抑制鲍曼不动杆菌生物被膜的机制研究(13级).pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑文本,第二级,第三级,第四级,第五级,2016/5/3 Tuesday,0,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑文本,第二级,第三级,第四级,第五级,2016/5/3 Tuesday,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2016/5/3 Tuesday,#,大学生创新训练项目,题目,：外输泵抑制剂NMP通过调节群体感应系统和自溶抑制鲍曼不动杆菌生物被膜的机制研究,指导老师：王学林 于录,团队成员：王超越 丁少明 金波,外输泵抑制剂NMP通过调节群体感应系统和自溶抑制鲍曼不动杆菌生物被膜的机制研究,鲍曼不动杆菌为不动杆菌属中最常见的一种革兰阴性杆菌，广泛存在于自然界的水及土壤、医院环境及人体皮肤、呼吸道、消化道和泌尿生殖道中，为条件致病菌,。鲍曼不动杆菌（Ab）是医院感染的重要病原菌。近年来的感染在增多，且其耐药性日益严重，已引起临床和微生物学者的严重关注。Ab主要引起呼吸道感染，也可引发败血症、泌尿系感染、继发性脑膜炎等。Ab在医院的环境中分布很广且可长期存活，对危重患者和CCU及ICU中的患者威胁很大，也将此类感染称做ICU获得性感染。国内耐碳青霉烯类的鲍曼不动杆菌发展很快，最近又出现“全耐药”的鲍曼不动杆菌（Pan drug resistant acinetobacter baumanii），在台湾以及内地均已出现，应引起高度警惕。,一,.,鲍曼不动杆菌（Ab）简介,随着研究和调查的深入，积累数据的增加，抗菌药物的耐药性问题已引起各国政府，相关国际组织如WHO和OIE的重视，问题已显得非常严重。当前，临床分离的鲍曼不动杆菌对常用抗菌药物产生的耐药现象在国内外已极其普遍，多重耐药菌正呈逐年增加之势，由鲍曼不动杆菌引起的感染普遍存在，且耐药水平越来越高，防治日益棘手16，致使鲍曼不动杆菌病的发病率仍然高居不下，成为当前鲍曼不动杆菌耐药性的最大特点。而由细菌生物被膜引起的感染性疾病在临床治疗上出现了巨大的困难17。至今未见针对细菌生物被膜的商品化抗菌药物，所以，发现针对鲍曼不动杆菌生物被膜的抑制剂迫在眉睫。,二,.,抑制鲍曼不动杆菌生物被膜的必要性,群体感应（,Quorum-Sensing,QS,）系统是指细菌能自发产生、释放一些特定的,信号分子,，并能感知其浓度变化，调节微生物的群体行为的调控系统,8,。它是细菌细胞根据密度变化进行基因表达调控的一种生理行为，鲍曼不动杆菌可以向周围环境释放一类可以自由进出菌体的小分子信号因子,高丝氨酸内,（,Homoserine Lactone,，,AHL,），促进生物被膜的形成,9,，,AHL,是,QS,系统最典型的一类信号分子，建立有效检测,AHL,的方法,对于研究鲍曼不动杆菌具有非常重要的意义,10,。,细菌自溶现象是细菌在自身水解酶类的作用下细胞的消解过程，并伴随胞内物质的释放，一般分为诱导自溶和自然自溶,11,。,细菌耐药性（,Resistance,）又称抗药性，系指细菌对于抗菌药物作用的耐受性，耐药性一旦产生，药物的化疗作用就明显下降,12,。目前，细菌耐药性越来越严重，缺少有效的、可以临床应用的耐药抑制剂。形成生物被膜（,Biofilm,）是细菌抵抗不利外界环境所形成的一种形式，细菌生物被膜是指细菌粘附于固体或有机腔道表面形成微菌落，并分泌细胞外多糖蛋白复合物将自身包裹其中而形成的膜状物,13,。细菌间的多糖蛋白复合物形成孔道维持细菌物质代谢。常见的形成细菌生物被膜的临床致病菌有金黄色葡萄球（,Staphylococcusaureus,）、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆（,AcinetobacterbaumanniiA.baumannii,）等,14,。细菌生物被膜介导（,Mediated,）的耐药性能导致药物对细菌的最低抑菌浓度（,MIC,）提高,10-100,倍,15,，外输泵介导的耐药性也是细菌固有的重要重要耐药机制，能显著提高细菌对几乎所有抗菌药物的耐药性，故急需阐明开发细菌生物被膜和外输泵抑制剂。基于鲍曼不动杆菌的致病性和严重耐药性，急需开发新型抗鲍曼不动杆菌药物。,已有报道表明：外输泵抑制剂能够细菌生物被膜，但是具体机制不清。我们的前期研究初步证明：外输泵抑制剂能够通过调节群体感应系统和自溶抑制鲍曼不动杆菌生物被膜，在本研究中，我们将通过分子生物学手段阐明这一机制。,四,.,细菌耐药性（,Resistance,）,1.,内容,（,1,）通过结晶紫染色分析,eDNA,考察,NMP,抗鲍曼不动杆菌生物被膜活性；,（,2,）使用荧光定量,PCR,分析,NMP,对鲍曼不动杆菌,RND,和,adeABC,表达的抑制能力；,（,3,）借助分析,NMP,对鲍曼不动杆菌群体感应系统,AHLS,信号分子的影响；,（,4,）利用明胶酶谱分析,NMP,对鲍曼不动杆菌自溶成分自溶素的影响；,2.,重点难点,本研究的重点是通过结晶紫染色分析,eDNA,考察,NMP,抗鲍曼不动杆菌生物被膜活性，并以此为基础进一步分析,NMP,的机制研究；研究难点是使用荧光定量,PCR,分析,NMP,对鲍曼不动杆菌,RND,和,adeABC,表达的过程中内参的设定。,五,.,实验研究内容及重点难点,1,、项目特色：,鲍曼不动杆菌是国际上感染重要致病菌之一，我们选择鲍曼不动杆菌为模型菌，使实验更具代表性和一般性；,2,、项目创新点：,（,1,）本研究不同于以往的研究局限于一个因素的研究，而是通过自溶和,QS,群体感应系统两个因素对细菌生物被膜进行研究，比以往的实验更具创新性；,（,2,）目前，国内外致力于群体感应系统和细菌生物被膜的形成机制的研究，未见将外输泵抑制剂、自溶、群体感应系统和细菌生物被膜联系起来，具有创新性。,六,.,项目特色及创新点,1,、优越的团队条件：,（,1,）组内成员：王超越 丁少明 金波,（,2,）团队条件：我们团队一直对科学实验有着浓厚的兴趣，积极探索、善于发现、勇于创新、吃苦耐劳、善于思考、具有较强的语言表达能力。在学习上，我们努力学习，积极向上，奋力拼搏,王超越同学在,2014,和,2015,年获得二等奖学金，同时在,2015,年被评为院优秀学生；丁少明和金波同学在,2014,年高教社杯全国大学生数学建模联赛中获得吉林省赛区一等奖。在生活上，我们细心负责，乐于沟通，真诚待人。,2,、充分的前期准备：,从大一到大三一直都喜欢做实验，积极进入实验室学习更多的知识，为此次的创新实验打下坚实的基础。作为学生，我们有较强的理论知识，我们希望将理论知识与实践相结合，多动手，多思考。在立题前，我们阅读大量的相关资料，确定了这个题目，与小组成员确定研究方法。,六，大创项目申请理由,谢谢大家！,