试验七人类巴氏小体的观察.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,试验七人类巴氏小体的观察,试验七人类巴氏小体的观察试验七人类巴氏小体的观察一、实验目的：,学习和掌握人体Barr小体的制片技术；观察Barr小体；了解Barr小体数目与人类性别畸形的关系；了解异固缩现象。,二、实验原理：,巴氏小体是由于女性两个X染色体中的一个失活形成的。,Lyon的剂量补偿学说认为：女性虽然有两个X染色体，但所表达的绝大部分遗传物质，与只有1个X染色体的男性是一样多的。,一、实验目的：,学习和掌握人体,Barr,小体的制片技术；观察,Barr,小体；了解,Barr,小体数目与人类性别畸形的关系；了解异固缩现象。,二、实验原理：,巴氏小体是由于女性两个,X,染色体中的一个失活形成的。,Lyon,的剂量补偿学说认为：女性虽然有两个,X,染色体，但所表达的绝大部分遗传物质，与只有,1,个,X,染色体的男性是一样多的。,1949,年，,Barr,等在雌猫的神经元细胞中发现一种浓缩小体，称,Barr,小体。而雄猫无。,1955,年，,Barr,在女性的口腔细胞中发现,Barr,小体。,1959,年，人们把性染色体异常造成的畸形与巴氏小体的研究联系起来。,1971,年，,Barr,小体被称为,X,染色质。,食道癌病人巴氏小体出现率低于,10%,；,正常人细胞出现率为,20-45%,女性的,X,染色体中只有,1,个保持活性，而另一个晚复制，没有活性。该失活的,X,染色体在形态上呈异染色质状态，即,DNA,螺旋压的很紧，染色深而致密。,XY,XX,X,染色质的失活只是部分失活，仍然有部分基因具有转录活性，目前已知的大约有十几个基因有活性。,Barr,小体的数目,=n-1(n,为,X,染色体数目,),性染色体类型,巴氏小体数目,正常男性,XY,0,正常女性,XX,1,Turners syndrome,XO,0,Klinefelters syndrome,XXY,1,超雌综合症,XXX,2,雌性染色体类型,雄性染色体类型,果蝇,XX,X,Y,线虫,XX,XO,雌性染色体类型,雄性染色体类型,果蝇,XX,XY,线虫,XX,XO,在果蝇中，雌性中的两条,X,染色体都有活性，而在雄性,XY,或,XO,中唯一的一条,X,染色体,超活性,;,线虫的剂量补偿机制是在,XX,个体为雌雄同体，,两条,X,染色的连锁基因的转录活性同时减弱,，使之处于低活性状态，即每条,X,染色体基因的表达水平是单条,X,染色体（雄性中）的表达水平的一半，以便实现与雄性（,XO,）个体的，只具一条,X,染色体上连锁基因活性的剂量补偿。,巴氏小体鉴别特征,一般出现在细胞分裂周期的,间期,；,直径为,1m,左右；,一般位于核膜内侧边缘；,形状多样，多为半圆形，三角形等形状；,材料不同，观察结果可能有不同，且必须和核仁区别开来（核仁往往离核膜较远或接近核中央部位）。,3.,观察,在女性间期细胞核内侧靠近核膜处有约,1,微米大小的反光极强的颗粒状亮点，即为巴氏小体。材料不同，观察结果可能有不同，且必须和核仁区别开来（核仁往往离核膜较远或接近核中央部位）。,三、实验材料：,男、女性口腔颊部粘膜上皮细胞、头发根部的毛囊细胞,粘膜上皮细胞个体较大，容易观察，但易污染细菌等杂质；,头发毛囊细胞个体稍小，观察稍困难，优点是不受细菌污染。,四、实验器具及用品：,实验器具：显微镜、载玻片、盖玻片、无菌牙签等。,实验药品和试剂：,1,、,1N,或,5N,盐酸，或浓盐酸和,95,乙醇,1,：,1,的混合液。,2,、改良,苯酚品红,染色液。,五、实验步骤：,（一）口腔粘膜细胞,Barr,氏小体显示方法：,1,、,取材与固定,：实验前用可食用水漱口，然后以无菌牙签刮取口腔颊部粘膜,(,第一次的刮取物弃去,),，将刮取物均匀涂于载玻片上，放在,空气中干燥,5-10min,。滴加,1N,盐酸水解,3-5min,。,水洗,3,次,。,2,、,染色与观察,：用改良苯酚品红染液染色,1-2,分钟,，倾斜载玻片，倒掉染液。用吸水纸轻轻擦拭干载玻片上的染液。加盖玻片后放于显微镜下观察。,也可以考虑用,Giemsa,染色：用,Gimsa,染液染色,8-10,分钟，勿干燥，用水冲洗后，晾干，镜检。,五、实验步骤：,（二）发根毛囊细胞,Barr,氏小体显示方法：,1,、,取材,：取带有发根的头发，围绕发根部的,1,圈长,2-3mm,的白色物体，即是毛囊细胞团，将其放置于载片上。在毛囊细胞处滴加一滴,浓盐酸和,95,乙醇,1,：,1,的混合液。约,10min,以后，可使毛囊细胞得到充分软化。以,清水冲洗,2-3,遍，将酸解液冲洗干净。拿起上述发根的梢部，将其上毛囊细胞轻轻蹭于另一干净载片上即可达到转移的目的。,2,、,染色,：可滴加,1,滴染液于待测细胞上，注意染液不可过多，以免细胞流失。约,2-3min,后，加盖玻片即可进行观察。,六、注意事项：,1.,在制备口腔粘膜细胞时，一定刮取细胞膜、核膜完整的、细胞核未解体的口腔粘膜细胞。,2.,取清洁的毛囊；一根发根的毛囊细胞可以转移到,1-2,张载片上，以达到充分利用实验材料的目的。,酸洗后，要将盐酸清洗干净。,染色时间不要太长，否则核质着色深，,X,染色质不易,区分,。,5.,低倍镜下检出典型的可数细胞，其标准是：,-,细胞周围无细菌污染；,-,细胞轮廓清楚、核膜清晰；,-,核无缺损；核染色清晰适度；核质呈网状或细颗粒状。,6.,今天需要使用油镜，用后请搽拭干净。,七、实验结果和作业：,1.,分别观察,50,个男、女性可数的细胞，计算各自的,带有,Barr,小体的细胞所占的百分比。,2.,在观察中画出,1,个典型细胞，标明,Barr,小体的部位。,八、思考题：,1,男性没有巴氏小体的理论基础。,2,男变女的变性手术后，该女性有无巴氏小体？,3,性别畸形的染色体模式可能有几种？,2026/10/18,17,女性细胞,1,2026/10/18,18,女性细胞,2,2026/10/18,19,女性细胞,3,谢谢观赏！,2020/11/5,20,