CIP作业指导书无菌线无菌验证检验作业指导书.ppt

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性,2、全程洗流程：水冲-碱循环-水冲-酸循环-水冲,3、碱洗流程：水冲-碱循环-水冲,4、杀菌水洗流程：水冲-杀菌剂循环-水冲,5、酸洗流程：水冲-酸循环-水冲-杀菌剂循环-水冲,6、水线加强洗流程：水冲-碱循环-水冲-酸循环-水冲-杀菌剂循环-水冲,7、热充加强洗流程：水冲-碱循环-水冲-碱循环-水冲-酸循环-水冲,8、设备大修：淡季保养、平时重大维修（管路焊接、灌装阀拆检等）,CIP作业标准-无菌线CIP作业标准-PET热充/TP/CAN,CIP作业标准-矿物质水线CIP作业标准-调配,No,作业项目,作业内容说明,文件及表单,各线各阶段清洗方式,CIP方式,连续性生产,停产后再生产,每个周期,每间隔4个周期或换,产,14天,3-14天,3天,设备大修后,PET热充/CAN,碱洗,全程洗,全程洗,碱洗,水洗,热充加强洗,TP,全程洗,全程洗,全程洗,碱洗,水洗,热充加强洗,矿物质水线,酸洗,水线加强洗,（每月）,水线加强洗,酸洗,杀菌水洗,水线加强洗,调配,碱洗,全程洗,全程洗,碱洗,水洗,热充加强洗,无菌线,各线各工段清洗工艺、标准不一，详见CIP作业标准-无菌线,第三页，共83页。,3,UHT介质端清洗,说明：使用可移动式单机CIP系统来清洗UHT充填冷却段及充填回流冷却段的热交换管，去除热交管内管外侧附着物；,清洗频率：3-6 月/次,CIP作业标准-UHT介质端,4,CIP效果判定,CIP合格的条件:最终水洗的进、出水要求,感观相同;,矿物质水线电导率差4.5s/cm；其余线电导率差15s/cm。（每CIP都需确认）,3、CIP后拆检UHT管路、部分充填头用棉签涂抹，无黑色异物（此项目每月确认一次）,无,5,过滤器清洗说明,清洗频率：调配桶终端过滤器每4h一次；生产线三级过滤器每CIP一次,清洗方式：手工清洗（调配区域的过滤器用5ppm-10ppm的二氧化氯溶液浸泡10min-20min，用RO水冲洗至无异味，晾干备用）,无,No,作业项目,作业内容说明,文件及表单,6,水处理活性炭消毒说明,消毒方式：排净活性炭过滤器内的水，用蒸汽给活性炭升温，待罐体升到90时维持2h，然后自然冷却到常温再使用；如果无蒸汽供应可以选择过氧乙酸杀菌，用500-1000 ppm的过氧乙酸溶液对活性炭浸泡1-3 h，注意必须正冲至无过氧乙酸残留,消毒频率：1-3个月每次,无,7,异常,处理,最终冲洗水水质不满足上述要求时，用RO水一直冲洗至合格为止,CIP检测浓度不符合标准则调整浓度至要求范围并重新计时,温度不满足要求时调整温度至要求范围再开始重新计时,管路拆检若发现有污垢需重新进行CIP，及时汇报品保中心并联系药剂厂商协助解决,无,第四页，共83页。,2.本卷须知：,2.1 2003年两条老无菌线只生产高酸调味茶，周期为48h；新上无菌线各品项生产周期按照上面标准执行，其余无菌线各品项周期以各阶段生产周期延长实验所确认的时间为准。,2.2 CIP时间为清洗有效时间，不包括各种调整温度、浓度及系统设备等待的辅助时间。,2.3 CIP清洗流速要求：80mm以下的管径，流速必须为1.5m/s以上；80mm以上的管径，流速必须为2.5m/s以上；或按照流量要求：CIP流量为生产流量的1.2-1.5倍。,2.4生产中调配桶、萃取桶应定期用RO水进展冲洗，高酸产品至少每4桶冲洗一次，低酸产品每桶都需冲洗。,2.5 CIP中心酸碱桶出口应配备过滤网，孔径80目，耐腐蚀，每2周检查过滤网状况。,本制度中，凡涉及与国家政策法规相抵触的，均以相关政策法规为准。,文件及表单 文件编号,3.1?CIP作业标准-无菌线?W-SC-5040-0044-01,3.2?CIP作业标准-PET热充/TP/CAN?W-SC-5040-0044-02,3.3?CIP作业标准-矿物质水线?W-SC-5040-0044-03,3.4?CIP作业标准-调配?W-SC-5040-0044-04,3.5?CIP作业标准-UHT介质端?W-SC-5040-0044-05,3.6?CIP作业标准-药剂检测?W-SC-5040-0044-06,第五页，共83页。,CIP作业标准-无菌线,第六页，共83页。,No,线别,区域,执行方式,正常生产周期结束后,未到周期，生产中失去无菌,设备保养维修后,1,06SIG,无菌线,UHT,CIP 3,CIP 4,CIP 6,无菌桶,CIP 3,CIP 4,CIP 6,充填系统,CIP 3,CIP 4,CIP 6,2,07krones,无菌线,UHT和无菌桶,CIP 3,CIP 4,CIP 6,充填、无菌水及洗瓶系统,CIP 5,（隔两个周期做一次CIP 13）,CIP 4,CIP 6,3,07KHS,无菌线,UHT,CIP 8,CIP 4,CIP 6,无菌桶,CIP 3,CIP 4,CIP 6,充填系统,CIP 3,CIP 4,CIP 6,无菌水系统,CIP 9（1月/次）,/,/,4,07procomac,无菌线,UHT,CIP 10,CIP 4,CIP 6,无菌桶,CIP 12,CIP 12,CIP 6,充填系统,CIP 11,CIP 11,CIP 6,无菌水系统,CIP 9（1月/次）,/,/,5,03SIG,无菌线,UHT,CIP 14,CIP 4,CIP 6,无菌桶,CIP 14,CIP 4,CIP 6,充填系统,CIP 14,CIP 4,CIP 6,6,10sidel,无菌线,UHT,CIP 3,CIP 4,CIP 6,无菌罐,CIP 3,CIP 4,CIP 6,充填,CIP 5,（隔两个周期做一次CIP 3）,CIP 4,CIP 6,过氧乙酸系统,CIP 5（1月/次）,/,CIP 14,无菌水系统,CIP 9（1月/次）,/,CIP 14,第七页，共83页。,No,CIP种类,流程,水,碱,水,碱,水,酸,水,1,CIP 3,浓度（%）,/,1.8-2.2,/,/,/,1.2-1.8,/,温度（）,常温,70-80,常温,/,/,50-60,常温,时间（s）,600,1800,600,/,/,1200,600,2,CIP 4,浓度（%）,/,1.8-2.2,/,/,/,/,/,温度（）,常温,70-80,常温,/,/,/,/,时间（s）,600,1200,600,/,/,/,/,3,CIP 5,浓度（%）,/,1.8-2.2,/,/,/,/,/,温度（）,常温,70-80,常温,/,/,/,/,时间（s）,600,1800,600,/,/,/,/,4,CIP 6,浓度（%）,/,1.8-2.2,/,1.8-2.2,/,1.2-1.8,/,温度（）,常温,70-80,常温,70-80,常温,50-60,常温,时间（s）,600,2400,600,3000,600,2400,600,2次,5,CIP 8,浓度（%）,/,1.8-2.2,/,/,/,1.2-1.8,/,温度（）,常温,70-80,常温,/,/,50-60,常温,时间（s）,600,3600,600,/,/,1200,900,6,CIP 9,浓度（%）,/,/,/,/,/,1.2-1.8,/,温度（）,/,/,/,/,常温,50-60,常温,时间（s）,/,/,/,/,600,1800,900,7,CIP 10,浓度（%）,/,1.8-2.2,/,/,/,1.2-1.8,/,温度（）,60,70-80,60,/,/,50-60,60,时间（s）,600,1800,600,/,/,1200,600,第八页，共83页。,No,CIP种类,流程,水,碱,水,碱,水,酸,水,8,CIP 11,浓度（%）,/,1.8-2.2,/,/,/,1.2-1.8,/,温度（）,60,70-80,60,/,/,50-60,60,时间（s）,600,1200,600,/,/,900,600,9,CIP 12,浓度（%）,/,1.8-2.2,/,/,/,1.2-1.8,/,温度（）,常温,70-80,常温,/,/,50-60,常温,时间（s）,600,1200,900,/,/,900,900,10,CIP 13,浓度（%）,/,1.8-2.2,/,/,/,1.2-1.8,/,温度（）,常温,70-80,常温,/,/,50-60,常温,时间（s）,600,1800,（洗瓶,1200）,600,/,/,1200,（洗瓶,600）,600,11,CIP 14,浓度（%）,/,1.8-2.2,/,/,/,1.2-1.8,/,温度（）,60,70-80,60,/,/,50-60,40,时间（s）,600,1800,600,/,/,1800,600,2次,第九页，共83页。,CIP作业标准-PET热充/TP/CAN,第十页，共83页。,适用,线别,清洗,方式,品牌,作业标准,PET,热充、,TP、,CAN,碱洗,泰华施,艺康,流程,水洗,碱洗,水洗,浓度（%）,质量百分比,RO水,力洁辉,SU560,RO水,1.0-1.8,0.1-0.4,温度（）,常温,70-80,常温,时间（s）,600,2100,900,流程,水洗,碱洗,水洗,浓度（%）,质量百分比,RO水,AC-110,普氯清,RO水,1.5-2.5,0.1-0.5,温度（）,常温,70-80,常温,时间（s）,600,2100,1200,第十一页，共83页。,PET,热充、,TP、,CAN,全程,泰华施,艺康,适用,线别,清洗,方式,品牌,作业标准,流程,水洗,碱洗,水洗,酸洗,水洗,浓度（%）,质量百分比,RO水,力洁辉（1.0-1.8）,RO水,派垢,（0.8-1.0）,RO水,SU560（0.1-0.4）,温度（）,常温,70-80,常温,50-60,常温,时间（s）,600,2100,600,1800,900,流程,水洗,碱洗,水洗,酸洗,水洗,浓度（%）,质量百分比,RO水,AC-110（1.5-2.5）,RO水,AC-310,（1.0-1.5）,RO水,普氯清（0.1-0.5）,温度（）,常温,70-80,常温,50-60,常温,时间（s）,600,2100,600,1800,900,第十二页，共83页。,适用,线别,清洗,方式,品牌,作业标准,PET,热充、,TP、,CAN,水洗,泰华施,艺康,流程,水洗,碱洗,水洗,碱洗,水洗,酸洗,水洗,浓度（%）,质量百分比,RO水,力洁辉（1.0-1.8）,RO水,力洁辉（1.0-1.8）,RO水,派垢,（0.8-1.0）,RO水,SU560（0.1-0.4）,SU560（0.1-0.4）,温度（）,常温,70-80,常温,70-80,常温,50-60,常温,时间（s）,600,1200,600,1800,600,1800,900,流程,水洗,碱洗,水洗,碱洗,水洗,酸洗,水洗,浓度（%）,质量百分比,RO水,AC-110（1.5-2.5）,RO水,AC-110（1.5-2.5）,RO水,AC-310,（1.0-1.5）,RO水,普氯清（0.1-0.5）,普氯清（0.1-0.5）,温度（）,常温,70-80,常温,70-80,常温,50-60,常温,时间（s）,600,1200,600,1800,600,1800,900,第十三页，共83页。,CIP作业标准-矿物质水,第十四页，共83页。,适用,线别,清洗,方式,品牌,作业标准,矿物质水线,杀菌水洗,艺康,泰华施,流程,水冲洗,杀菌,水冲洗,浓度(ppm),RO水,臭氧水（0.6-1.0）,RO水,温度（）,常温,时间（s）,100-300,600循环,300,流程,水冲洗,杀菌,水冲洗,浓度(ppm),RO水,臭氧水（0.6-1.0）,RO水,温度（）,常温,时间（s）,100-300,600循环,300,第十五页，共83页。,适用,线别,清洗,方式,品牌,作业标准,矿物质水线,酸洗,艺康,泰华施,流程,水冲洗,酸洗,水冲洗,杀菌,水冲洗,浓度(%),RO水,皓丽（1.0-1.5）,RO水,OA消毒液（0.13-0.20）,RO水,温度（）,常温,时间（s）,200,1800循环,300,600循环,300,流程,水冲洗,酸洗,水冲洗,杀菌,水冲洗,浓度(%),RO水,派垢（0.8-1.0）,RO水,泰华净（0.20-0.30）,RO水,温度（）,常温,时间（s）,200,1800循环,300,600循环,300,第十六页，共83页。,适用,线别,清洗,方式,品牌,作业标准,矿物质水线,加,强,洗,艺康,泰华施,流程,水冲洗,碱洗,水冲洗,酸洗,水冲洗,杀菌,水冲洗,浓度(%),RO水,美普,RO水,皓丽,RO水,OA消毒液,RO水,1.0-1.5,1.0-1.5,0.13-0.20,温度（）,常温,时间（s）,200,1800,300,1800,300,600,300,流程,水冲洗,碱洗,水冲洗,酸洗,水冲洗,杀菌,水冲洗,浓度(%),RO水,力洁辉,RO水,派垢,RO水,泰华净,RO水,0.8-1.0,0.8-1.0,0.20-0.30,温度（）,常温,时间（s）,200,1800,300,1800,300,600,300,第十七页，共83页。,CIP作业标准-调配,第十八页，共83页。,适用,线别,清洗,方式,品牌,作业标准,调配,碱洗,泰华施,艺康,区域,流程,水洗,碱洗,水洗,浓度(%),RO水,力洁辉,RO水,1.0-1.5,温度(),70-80,溶糖桶,时间(s),480,600,720,萃取桶,果汁还原桶,调配桶,900,高速搅拌桶,600,区域,流程,水洗,碱洗,水洗,浓度(%),RO水,AC-110,RO水,1.0-1.5,温度(),70-80,溶糖桶,时间(s),480,600,720,萃取桶,果汁还原桶,调配桶,900,高速搅拌桶,600,第十九页，共83页。,适用,线别,清洗,方式,品牌,作业标准,调配,全程,泰华施,艺康,区域,流程,水洗,碱洗,水洗,酸洗,水洗,浓度(%),RO水,力洁辉,RO水,派垢,RO水,1.0-1.5,0.6-1.0,温度(),70-80,50-60,溶糖桶,时间(s),480,600,480,600,720,萃取桶,果汁还原桶,调配桶,900,高速搅拌桶,600,区域,流程,水洗,碱洗,水洗,酸洗,水洗,浓度(%),RO水,AC-110,RO水,AC-310,RO水,1.0-1.5,0.5-1.0,温度(),70-80,50-60,溶糖桶,时间(s),480,600,480,600,720,萃取桶,果汁还原桶,调配桶,900,高速搅拌桶,600,第二十页，共83页。,适用,线别,清洗,方式,品牌,作业标准,调配,加强洗,泰华施,艺康,区域,流程,水洗,碱洗,水洗,碱洗,水洗,酸洗,水洗,浓度(%),RO水,力洁辉,RO水,力洁辉,RO水,派垢,RO水,1.0-1.5,1.0-1.5,0.6-1.0,温度(),70-80,50-60,溶糖桶,时间(s),480,600,480,600,480,600,720,萃取桶,果汁还原桶,调配桶,900,高速搅拌桶,600,区域,流程,水洗,碱洗,水洗,碱洗,水洗,酸洗,水洗,浓度(%),RO水,AC-110,RO水,AC-110,RO水,AC-310,RO水,1.0-1.5,1.0-1.5,0.5-1.0,温度(),70-80,50-60,溶糖桶,时间(s),480,600,480,600,480,600,720,萃取桶,果汁还原桶,调配桶,900,高速搅拌桶,600,第二十一页，共83页。,CIP作业标准-UHT介质端,第二十二页，共83页。,适用线别,作业标准,PET热充线,流程,水洗,除垢剂,水洗,除垢剂,水洗,时间,3-5 min,60-90 min,3-5 min,90-180 min,10-30 min,浓度,10%-20%,10%-20%,温度,常温,60,常温,60,常温,说明：,以上清洗时间和浓度具体值视结垢程度来定。,因各工厂配备清洗小车无换热系统，除垢剂温度可以选择常温；假设为提高清洗效果工厂可以 选择通过UHT内管加热来给介质端加热，但温度不要高于60。,除垢剂选择必须对不锈钢无腐蚀性。,第二十三页，共83页。,CIP作业标准-药剂检测,第二十四页，共83页。,药剂名称,检测方法,Principal,（普氯清）,试剂：酚酞指示剂、0.1mol/L(N)HCl标准溶液、1N硫代硫酸钠,步骤：1、取50mL使用液,2、加入2mL 1N硫代硫酸钠,3、加5滴酚酞指示剂（最好用pH计判断终点，pH=8.3为终点）,4、用0.1mol/L(N)HCl标准溶液滴定至红色变为无色，记录所耗HCl溶液毫升体积数V,计算方法：使用液浓度%（wt/v）=0.761,N,V%（N为HCl的标定浓度）,MIP,（美普）,试剂：酚酞指示剂、0.5mol/L(N)HCl标准溶液,步骤：1、取50mL使用液,2、加3-5滴酚酞指示剂（最好用pH计判断终点，pH=8.3为终点）,3、用0.5mol/L(N)HCl标准溶液滴定至粉红色变为无色，记录所耗HCl溶液毫升体积数V,计算方法：使用液浓度%（wt/v）=0.2516,N,V%（N为HCl的标定浓度）,Horolith FL,（皓丽）,试剂：酚酞指示剂、1.0mol/L(N)NaOH标准溶液,步骤：1、取50mL使用液,2、加3-5滴酚酞指示剂（最好用pH计判断终点，pH=8.3为终点）,3、用1.0mol/L(N)NaOH标准溶液滴定,每加一滴摇匀，溶液由无色变为粉红色即为终点，记录所 耗NaOH溶液毫升体积数V,计算方法：使用液浓度%（wt/v）=0.2244,N,V%（N为NaOH的标定浓度）,第二十五页，共83页。,AC-110,试剂：酚酞指示剂、0.5mol/L(N)HCl标准溶液,步骤：1、取10mL使用液,2、加3-5滴酚酞指示剂（最好用pH计判断终点，pH=8.3为终点）,3、用0.5mol/L(N)HCl标准溶液滴定至粉红色变为无色，记录所耗HCl溶液毫升体积数V,计算方法：使用液浓度%（wt/v）=0.855,N,V%（N为HCl的标定浓度）,AC-310,试剂：酚酞指示剂、1.0mol/L(N)NaOH标准溶液,步骤：1、取10mL使用液,2、加3-5滴酚酞指示剂（最好用pH计判断终点，pH=8.3为终点）,3、用1.0mol/L(N)NaOH标准溶液滴定,每加一滴摇匀，溶液由无色变为红色，记录所耗NaOH 溶液毫升体积数V,计算方法：使用液浓度%（wt/v）=1.196,N,V%（N为NaOH的标定浓度）,OA150,试剂：6mol/L硫酸、0.1N高锰酸钾溶液、2.5mol/L碘化钾溶液、0.01mol/L的硫代硫酸钠溶液、酚酞指示剂,步骤：1、移取20mL使用液至250mL锥形瓶,2、加80mLRO水，5mL 6mol/L硫酸,3、用0.1 N高锰酸钾溶液滴定至溶液刚好呈粉红色，注意不能滴过头,4、立即加入10mL2.5mol/L碘化钾，溶液为棕黄色，快速用0.01mol/L的硫代硫酸钠溶液滴定，待溶液颜色滴定至微黄时，加入1-2 mL淀粉指示剂，继续快速滴定，直至溶液为无色,计算公式：过氧乙酸/ppm=硫代硫酸钠的毫升数,硫代硫酸钠的当量浓度,38,50,药剂名称,检测方法,第二十六页，共83页。,无菌线无菌验证作业指导书,第二十七页，共83页。,S,0,设备检查,S,1,烟雾测试和尘埃粒子测试,S,2,染色试验,No,作业步骤,作业说明,文件及 表单,核决,权限,1,产品UHT及无菌水UHT、无菌罐和一体机的SIP/生产程序的验证，包括实际温度（温度试纸）、时间的检测，以及最低温度的预警程序，到达下限系统是否能够自动报警并停机,空瓶杀菌机喷嘴喷射压力、洗瓶机无菌水喷射压力自动检测效果及压力预警程序,各蒸汽障的温度预警程序，低于最低值系统是否失去无菌，即是否需要重新建立无菌系统,杀菌剂的浓度、温度、流量预警程序，低于下限系统是否自动停机,检查所有关键控制点参数,检查CIP/COP/SIP/SOP运行程序、浓度检测、效果评估,无菌线无菌验证验收标准,制造处主管、,品管处主管,2,安装高效过滤器后，用尘埃粒子计数器对每一块过滤器及过滤器和设备的连接处进行检漏,在生产模式下，用烟雾发生器在压力最高区域发散烟雾，观察烟雾流动方向；正压罩各区压力控制按照供应商提供说明书上压力设定值的下限,无菌线无菌验证验收标准,品管处主管,3,溶液的配制：52g可溶性淀粉，2g胭脂红(日落黄)色素，2L蒸馏水，混合煮沸后冷却备用。,2、用喷壶将配制好的溶液喷洒在正压罩、洗瓶、充填、封盖区域的任意位置。,3、喷洒后静置30min左右（具体时间以溶液已粘附在设备面为准）。,4、COP/SOP后观察设备表面是否有染色剂残留,无菌线无菌验证验收标准,品管处主管,第二十八页，共83页。,S,4,正压罩环境预测试,4,系统在正常的CIP/SIP后，用无菌水取样器对无菌水总取样口以及各使用点终端取样口取样，并进行微生物分析，各点无菌水取样量至少为1L，取样后对样品进行微生物分析（微生物检测采用膜过滤法）,系统在正常的CIP/SIP后，用无菌空气取样器对各点无菌空气/氮气取样，时间至少为30min，取样后样品移至微生物操作台，将膜片直接取出，放入事前准备好的培养皿进行培养。,无菌线无菌验证验收标准,品管处主管,5,经过正常的COP/CIP/SOP/SIP后，对空间进行落菌、浮游菌的采集、涂抹、尘埃粒子的检测。,1.落菌：在灌装/封盖/洗瓶区域共放置10个培养皿，1h后用操作手套取样,2.浮游菌：每个区域1个点，抽气量1000L；,3.涂抹：用操作手套在灌装/封盖/洗瓶区域共涂抹10个点，每个棉签涂抹面积10cm2 （如涂抹充填头、洗瓶头或杀菌喷嘴每个棉签5个喷嘴或充填/洗瓶头）,4.尘埃粒子：每个区域1个点,无菌线无菌验证验收标准,品管处主管,S,3,辅助系统测试,No,作业步骤,作业说明,文件及 表单,核决,权限,第二十九页，共83页。,S,5,贴片试验,6,准备钢片50片，钢片粗糙度的选择尽量接近设备表面的粗糙度，钢片尺寸3cm,5cm,将枯草芽孢杆菌（,Bacillus Atrophaeus,ATCC9372）接种于钢片上，尽量接种在钢片中间位置：10,5,和10,6,各接种25片,钢片正常风干后，准备进行测试，先进行低浓度试验后，再进行高浓度试验。,基于无菌室/洁净室的尺寸,在洗瓶、充填、封盖区域确定20个对于系统灭菌重要的位置,即那些可能导致瓶盖、铝片、瓶子和产品污染的位置（可参考染色试验的结果）,和在清洁和杀菌时绝对有必要灭菌的位置,例如:冲洗阀、灌注阀、下盖槽和机星轮等装置的表面.,在一张灌装无菌区的图纸上将上述位置标出并标号.并将钢片编号和图纸,对应，然后进行钢片的悬挂。,悬挂钢片前，在25片钢片中随机抽取5片钢片进行阳性对照，其方法为：将钢片取回后，分别放入5个已灭菌好的装有100mL无菌水的盒子里进行充分振荡，并进行梯度稀释，至少稀释5个梯度，取浓度最低的两个梯度的样品，各取1mL进行倒平板，每个梯度每个样品做3个平行样，进行培养计数，减掉最大值、最小值然后计算出钢片的平均初始带菌量。,无菌线无菌验证验收标准,品保中心、生产技术部,No,作业步骤,作业说明,文件及表单,核决,权限,第三十页，共83页。,S,5,贴片试验,6,7.钢片悬挂好后，根据供应商所提供说明书清洗灭菌条件的下限对空间设备进行一次COP/SOP,8.把所有钢片依次放入已编号已灭菌且装有无菌水的盒子里，到实验室充分振荡后进行膜过滤，培养48h后记录每片钢片残留的菌量。,9.10,6,的实验同10,5,一样,验证判定：用阳性对照检测的含菌量与杀菌后钢片残留的菌量进行对照，从而判定系统的杀菌能力（衰减计数法）,LOG(Rave)=LOG(Rc/Nsample)LOG(Sc/Ntest),Rc:阳性对照样带菌总数,Nsample:阳性对照样数量,Sc :测试样残留带菌总数,LOG(Rave)：平均杀菌能力,Ntest:测试样数量,LOG(Rmin)LOG(Rc/Nsample)LOG(Sc),Sc:测试样的残留带菌数最大样品的菌落数,LOG(Rmin)：最低杀菌能力,No,作业步骤,作业说明,文件及表单,核决,权限,第三十一页，共83页。,S,6,瓶内、外挑战测试,7,瓶内挑战测试：,准备在该线生产的空瓶260只以上,用枯草芽孢杆菌（,Bacillus Atrophaeus,ATCC9372）接种空瓶：10,5,和10,6,各130瓶以上，接种位置按照不同瓶型来定，尽量接种在瓶内凹陷不易杀菌的地方，在无菌线生产的所有瓶型都需做此验证,空瓶正常风干后，准备进行测试，先做低浓度后，再做高浓度，系统必须先做好COP/CIP/SOP/SIP，且无菌罐中准备好无菌水,测试前10,5,和10,6,的空瓶各随机抽取10个空瓶，到实验室进行阳性对照，其方法：到实验室将空瓶灌装100mL无菌水并充分振荡清洗，然后进行梯度稀释，至少稀释5个梯度（后面具体操作可参考钢片的做法），得出空瓶的初始带菌量,将120个10,5,空瓶手动放入输送带进行杀菌（根据供应商所提供说明书用清洗灭菌条件的下限）、洗瓶、充填（充填无菌水100mL左右）、封盖，10,6,的空瓶重复以上步骤。,将灌装好的产品在实验室充分振荡后，依次进行膜过滤，培养48h后得出空瓶杀菌后残留菌量,无菌线无菌验证验收标准,品保中心、生产技术部,No,作业步骤,作业说明,文件及表单,核决,权限,第三十二页，共83页。,7,瓶外挑战测试：,准备在该线生产的空瓶130只以上,将枯草芽孢杆菌（,Bacillus Atrophaeus,ATCC9372）接种到空瓶中：10,4,和10,5,各65瓶以上，接种位置按照不同瓶型来定，尽量接种在瓶外凹陷不易杀菌的地方，接种后请用记号笔作好标致，在无菌线生产的所有瓶型都需做此验证,空瓶正常风干后，手动挂到输送带准备测试，测试前系统需已做COP/CIP/SOP/SIP,测试前随机抽取10,4,空瓶5个，到实验室进行阳性对照，其方法：到实验室将空瓶接种处剪开，放入已灭菌好的100mL无菌水的盒子中充分振荡清洗，然后进行梯度稀释，至少稀释4个梯度（后面具体操作可参考钢片的做法），得出空瓶外部初始带菌量,将60个10,4,空瓶经过正常的杀菌程序后（根据供应商所提供说明书用清洗灭菌条件的下限），充填出口放置一次性无菌取样袋。取出空瓶后，到实验室将接种标志点剪出，放入已灭菌好含有无菌水的盒子中充分振荡，清洗后膜过滤，或用已灭菌的棉签来涂抹接种标志点，将棉签放入放入已灭菌含有无菌水的盒子中充分振荡，清洗后膜过滤，从而得出瓶外杀菌后菌残留量，10,5,的空瓶重复以上步骤,瓶内外的验证判定方法和贴片试验的判定方法相同,No,作业步骤,作业说明,文件及表单,核决,权限,第三十三页，共83页。,8,盖内挑战测试,准备在该线生产的瓶盖130只以上(每种盖型都需测试，这里的盖型不依产品别分，仅指28mm、38mm、1881瓶口的盖子以及后续开发的特殊结构的盖型),用枯草芽孢杆菌（,Bacillus Atrophaeus,ATCC9372）接种瓶盖：10,5,和10,6,各65个以上,瓶盖正常风干后，准备进行测试，先做10,5,后再做10,6,，系统必须先做好COP/CIP/SOP/SIP，无菌罐中存有无菌水,测试前10,5,和10,6,的瓶盖各随机抽取5个瓶盖，到实验室进行阳性对照，其方法：到实验室将瓶盖分别放入装有100mL的无菌水中，进行充分振荡清洗，然后进行梯度稀释，至少稀释5个梯度（后面具体操作可参考钢片的做法），得出盖内初始带菌量,将60个10,5,瓶盖手动放入盖整列机，进行杀菌（根据供应商所提供说明书用清洗灭菌条件的下限）、冲洗、吹干、封盖，10,6,的瓶盖重复以上步骤，建议接种盖子和未接种盖子用两种颜色盖子作区分。,将封盖后的产品（100mL无菌水）在实验室充分振荡后，进行膜过滤，旋开的瓶盖（指盖螺纹处接种的盖子）也放入滤杯中清洗，培养48h后得出瓶盖杀菌后残留菌量,10,6,的瓶盖重复以上步骤,无菌线无菌验证验收标准,品保中心、生产技术部,No,作业步骤,作业说明,文件及表单,核决,权限,S,7,盖内、外挑战测试,第三十四页，共83页。,8,盖外挑战测试,准备在该线生产的盖子70只以上,用枯草芽孢杆菌（,Bacillus Atrophaeus,ATCC9372）接种瓶盖：10,4,和10,5,各35个以上，接种位置：盖外部不易杀菌点，接种后请用记号笔作好标致,瓶盖正常风干后，手工放入盖准备测试（接种盖和未接种盖颜色需做区分），测试前系统需已做COP/CIP/SOP/SIP,测试前随机抽取10,4,瓶盖5个，到实验室进行阳性对照，其方法：到实验室将盖子直接放入已灭菌好的100mL无菌水的盒子中充分振荡清洗，然后进行梯度稀释，至少稀释4个梯度（后面具体操作可参考钢片的做法），得出盖外初始带菌量,将30个10,4,瓶盖手动放入盖整列机，瓶盖经过正常的杀菌程序（根据供应商所提供说明书用清洗灭菌条件的下限）杀菌、清洗后，在充填出口处用一次性无菌取样袋取样，然后到实验室将瓶盖旋开，直接放入已灭菌好含有无菌水的盒子中，充分振荡清洗后膜过滤（注意不要碰到接种位置），或用已灭菌的棉签来涂抹接种标志点，将棉签放入放入已灭菌好含有无菌水的盒子中，充分振荡清洗后膜过滤；或用一次性无菌取样袋，直接在封盖前的下盖轨道处单个取样，然后到实验室将盖取出，直接放入已灭菌好含有无菌水的盒子中，充分振荡清洗后膜过滤，也可以将无菌水直接倒入无菌取样袋中，进行清洗后进行膜过滤，从而得出盖外杀菌后菌残留量,10,5,的瓶盖重复以上步骤,盖内外的验证判定方法和S5贴片试验的判定方法相同,No,作业步骤,作业说明,文件及表单,核决,权限,第三十五页，共83页。,S,8,LG培养基预测试,S,9,产品测试,S,10,LG培养基测试,9,参考LG培养基配制标准调配LG培养基，根据需要调配相应的吨数，经过UHT 138*32s杀菌后存放于无菌灌中,系统在正常的COP/CIP/SOP/SIP后准备进行培养基灌装（以标准生产条件、最高生产速度）开机灌装5000瓶（半瓶）、第24h再灌装5000瓶（半瓶）、第48h再灌装5000瓶（半瓶）；合计15000瓶；期间系统维持待机状态，每4h左右进行一次短SOP,产品需放入30-35的环境中进行保温，保温的第7天和第14天进行打检，14天后打检产品无问题可放行,无菌线无菌验证验收标准,LG培养基配制标准,品管处主管,10,生产线经过正常的COP/CIP/SOP/SIP后准备生产，产品（高酸）正常生产，分3批灌装，每批10万瓶，每个批次间需重新CIP/SIP,第一批次产品需全检，第二批次和第三批次产品抽检即可，抽检比例10%,成品微检、成品保温、常温取样30min/次；生产中无菌水、无菌空气/氮气需取样；生产结束涂抹、落菌、浮游菌检测（具体方法同S1、S3）,需对产品进行双氧水残留测试,产品需放入30-35的环境中进行保温，保温的第7天和第14天进行打检，14天后打检产品无问题可放行,无菌线无菌验证验收标准,品保中心,生产技术部,11,参考LG培养基配制标准调配LG培养基，根据需要调配相应的吨数，经过UHT 138*32s杀菌后存放于无菌灌中,系统在正常的COP/CIP/SOP/SIP后准备进行培养基灌装，开机灌装5000瓶；第24h灌装5000瓶；第48h灌装8000瓶；第72h灌装10000瓶，依次打开洗瓶、充填、封盖这三个区域的窗户1min，每次只能打开某区域的一扇窗户，然后进行短SOP后进行LG培养基灌装，灌装2000瓶，总计3万瓶，以上产品全部为半瓶灌装，待机时每隔4h左右进行一次短SOP,培养基灌装后放入30-35的环境中保温，3天后将全部产品倒置，7天后进行全检，若没问题14天再进行全检,无菌线无菌验证验收标准,LG培养基配制标准,品保中心,生产技术部,No,作业步骤,作业说明,文件及表单,核决,权限,第三十六页，共83页。,2.本卷须知：,步骤及内容,状态,新装生产线,生产线的迁移,新瓶型,新盖型,年度保养/大修,S0设备检查,S1烟雾测试和尘埃粒子测试,S2染色试验,S3辅助系统测试,S4正压罩环境预测试,S5贴片试验,S6瓶内、外挑战测试,S7盖内、外挑战测试,S8 LG培养基预测试,S9 产品测试,S10 LG培养基测试,第三十七页，共83页。,2.2 各步骤判定标准详见?无菌线无菌验证验收标准?,2.3 目前新线验证合同按六步走，其中test1指：S0、S1、S2；test2指：S3、S4;test3指：S5、S6、S7；test4指：S8；test5指：S9；test6指：S10;此作业指导书重点强调各步骤的作业方法，假设一些细节局部验证合同有差异那么以验证合同为准，如一些线别无中间SOP、无破坏性实验等那么不予考虑；03SIG无菌线不适合此作业指导书,2.4 钢片、空瓶、盖的挑战测试中所接种菌量105、106都是指风干后钢片、瓶、盖上的带菌量，所以接种时需注意考虑到风干的损失一般接种至风枯槁草芽孢菌量损失一个梯度左右。,2.5 在钢片、瓶、盖的挑战测试中所有样品的膜过滤菌落计数只计枯草芽孢杆菌，其他杂菌一律不做考虑，请操作中尽量小心，防止太多的杂菌带入。,2.6 贴片试验、瓶、盖的挑战试验中涉及到枯草芽孢杆菌接种，请注意：接种不要直接在实验室，尽量选择单独的屋子垃圾场、污水处理处等选一间防止污染，接种的屋子里尽量保持枯燥可以在屋子里放一些石灰；在现场风轨、盖槽等以及实验室做完试验后请立即消毒，防止污染；计数后含有枯草芽孢的平皿需121*30min灭菌后再作处理。,2.7 钢片试验、瓶、盖的挑战测试以及微生物培养基验证的所有运行参数需做详细记录，包括瓶、盖杀菌剂的浓度杀菌时间、中间SOP间隔时间、浓度等，假设培养基测试通过此参数即作为日后量产的一个参考标准。,文件及表单 文件编号,3.1?无菌线无菌验证验收标准?W-SC-5040-0032-01,3.2?LG培养基配置标准?W-SC-5040-0032-02,第三十八页，共83页。,无菌线无菌验证验收标准,第三十九页，共83页。,No,步骤,目 的,标 准,1,S,0,前提条件,对设备一些关键参数及报警联动装置进行确认，为后续验证做好