呼吸道感染常见病原菌.ppt

单击此处编辑母版标题样式,2021/1/12,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,呼吸道感染常见病原菌,呼吸道感染常见病原菌呼吸道感染常见病原菌,社区获得性呼吸道感染常见病原菌,其他致病菌包括：卡它莫拉菌、GNB、衣原体等,Adapted from Woodhead M.J Antimicrob Chemother.1994:34(suppl A):85-92,2021/1/12,2,以色列CAP的病因调查(1991-92:346例),阳性,Thorax 1999;51:179,2021/1/12,3,以色列不同年龄组CAP的病因调查,第一位 第二位,1744岁肺炎支原体肺炎链球菌,4554岁肺炎链球菌肺炎支原体,55岁肺炎链球菌肺炎衣原体,2021/1/12,4,CAP病原学诊断,我国苛养菌分离现状,未建立标本送检指南；,送检标本与接种时间相隔太长；,不具备苛养菌分离的培养基；,无CO2培养环境；,不能辨别菌落；,无鉴别试剂,苛养菌分离率低，污染菌影响药敏结果，,迄今国内无可信的CAP病原学流行病学资料。,2021/1/12,5,标本采集,痰标本：采集应在抗菌治疗前，清 晨清水漱口三次，深咳痰。,无痰者用高渗盐水吸入导痰。,意识障碍者可经鼻或口腔吸痰，或经人工气道吸痰。,CAP病原学诊断,2021/1/12,6,CAP病原学诊断,标本采集,咽试子应用无菌湿棉签取，即时送检。,实验室应即时接种血琼脂和巧克力琼脂（含抗菌素），置5-10CO2气体环境。,2021/1/12,7,标本质量评价,直接涂片镜检：,鳞状上皮细胞25/低倍视野,鳞状上皮细胞：白细胞105cfu/ml（2+）,BALF：细菌104cfu/ml（1-2+）,PSB、PBALF：细菌103cfu/ml（1+）,肺炎衣原体抗体滴度升高4倍,LP直接荧光抗体阳性抗体滴度升高,2021/1/12,15,CAP病原学诊断,检测结果判定,2.有意义:合格痰标本培养细菌3+,细菌少量生长，但与镜检结果一致,（肺球、流感、卡他莫拉菌）,入院3天内多次培养到相同细菌,血清肺炎衣原体抗体升高1：32,LP抗体升高1：320（ELISA），,或间接荧光抗体1：512,2021/1/12,16,CAP病原学诊断,检测结果判定,3.无意义:痰培养到上呼吸道正常菌（草链、表,葡、非致病奈瑟菌、类白喉杆菌等）多种病原菌少量生长,不符上述“确定”和“有意义”条款,2021/1/12,17,苛养菌,苛养菌：对营养要求苛刻，在普通培养基上不生长或难以生长的一类细菌。,临床常见的有：,G+球菌：肺炎链球菌,G-球菌：卡他布兰汉菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌,G-杆菌：嗜血杆菌、鲍特菌,2021/1/12,18,2021/1/12,19,2021/1/12,20,2021/1/12,21,嗜血杆菌属,嗜血杆菌属（Haemophilus）细菌为一类无动力、无芽孢的革兰阴性短小杆菌常呈球杆状、丝状等多形态。,2021/1/12,22,分类,隶属巴斯德菌科，嗜血杆菌属。,本菌属包括16个菌种，其中9个与临床有关,2021/1/12,23,临床意义,嗜血杆菌存在于正常人上呼吸道。可引起上呼吸道、泌尿道感染及脑膜炎、菌血症等感染性疾病。,2021/1/12,24,临床意义,流感嗜血杆菌：,常引起咽炎、中耳炎、肺炎、鼻炎、脑膜炎、心包炎、骨髓炎等。,主要致病物质：,内毒素、荚膜、菌毛和酶类。,2021/1/12,25,临床意义,副流感嗜血杆菌：咽炎和心内膜炎。,溶血嗜血杆菌：儿童上呼吸道感染。,埃及嗜血杆菌：急性眼结膜炎。,副嗜沫嗜血杆菌：心内膜炎、肺炎、脑膜炎。,杜克嗜血杆菌：软下疳,2021/1/12,26,培养特性：,需氧或兼性厌氧,最适生长温度：35,PH 7.6-7.8,生长因子：X、V,5%-10%CO2,2021/1/12,27,嗜血杆菌对生长因子的需求,菌种 X因子 V因子 溶血性,流感嗜血杆菌 +-,副流感嗜血杆菌 -+-,埃及嗜血杆菌 +-,杜克嗜血杆菌 +-+/-,嗜沫嗜血杆菌 +-,溶血性嗜血杆菌 +,2021/1/12,28,微生物特性,流感嗜血杆菌根据其对吲哚、脲酶及鸟氨酸试验的反应不同可分为8个生物型；副流感嗜血杆菌亦可分为8个生物型,流感嗜血杆菌根据荚膜多糖抗原不同可分为a、b、c、d、e、f 6个血清型，其中b型致病性最强，f次之。,2021/1/12,29,微生物特性,流感嗜血杆菌含有不耐热的S抗原和耐热R抗原。,流感嗜血杆菌根据菌落特征可分为三种类型：粘液型（M）、光滑型（S）、粗糙型（R）。,2021/1/12,30,微生物检验,标本采集,根据感染部位不同采集标本，如鼻咽试,子，痰液，脑脊液，脓液等。避免干燥，,及时送检。,2021/1/12,31,检验程序,血液、脑脊液,脑脊液、鼻咽试子、痰、脓液,增菌培养,分离培养,巧克力琼脂,血液琼脂,直接涂片染色,革兰阴性小杆菌多形性,初报,挑选可疑菌落,鉴定,分型,菌落特征,菌体形态,卫星试验,X、V因子需求试验,报告,吲哚、尿素酶、鸟氨酸脱羧酶（生物分型）,荚膜肿胀试验（荚膜多糖抗原分型）,35,图 流感嗜血杆菌的检验程序,35 510%CO,2,2021/1/12,32,检验方法,（1）直接镜检：痰液、脓液、鼻咽分泌,物等标本可直接涂片，脑脊液离心取沉,淀物涂片，革兰染色镜检。如查见革兰,阴性短小杆菌，呈多形性，结合临床症,状，作初步诊断。,2021/1/12,33,（2）分离培养：,将血液、脑脊液增菌培养后，转种巧克力琼脂和血琼脂培养基，其他标本可直接划线接种于巧克力琼脂和血琼脂培养基，经35培养1824h，根据菌落特征、菌体形态、溶血情况、卫星试验、X和V因子需求试验定种，再作生化试验和荚膜肿胀试验分型。,2021/1/12,34,卫星试验：,挑取可疑菌落，密集划线接种于兔血琼脂平板和M.H琼脂平板上，再将金黄色葡萄球菌点种于培养基上，35，培养1824h，如见金黄色葡萄球菌周围菌落较大，而远处菌落较小，即卫星试验阳性。,2021/1/12,35,（3）鉴定要点：,本菌为革兰阴性短小杆菌，呈球杆状，逗点状，丝状等多形态性；,在巧克力琼脂平板上为灰白色，中等大小、湿润的菌落；,流感嗜血杆菌血平板卫星试验阳性，M-H琼脂平板卫星试验阴性；,以X、V和X+V因子纸片贴于接种细菌的M-H琼脂平板上，仅在X+V因子周围生长为流感嗜血杆菌。,2021/1/12,36,荚膜肿胀试验：,取一定浓度菌悬液，滴于载玻片上，再依次滴加af流感嗜血杆菌抗血清混匀，加少量美蓝液混和后覆盖片，室温10min后，用油镜观察，如查见菌体呈蓝色，周围绕有界限分明未染色的膨大空白圈为阳性。此法可直接检查标本中细菌，作早期诊断,2021/1/12,37,药敏试验：,选用专用培养基,HTM（Haemophilus Test Medium Base）,标准菌株：,ATCC 49247,ATCC 10211,2021/1/12,38,结果解释：,流感嗜血杆菌需常规检测-内酰胺酶，,阳性提示对青霉素、氨苄西林、阿莫西林,耐药。,2021/1/12,39,-内酰胺酶检测：,头孢硝噻吩（Nitrocefin）,2021/1/12,40,肺炎链球菌,菌落形态：灰色、圆形、扁平、0.5-1.0的菌落，周围有草绿色溶血环。,菌体形态：革兰阳性球菌，矛尖状、成双排列，宽端相对，尖端向外。无鞭毛、无芽胞，在机体内或含血清的培养基中可形成荚膜。,Optochin敏感试验：阳性,胆盐溶菌试验：阳性,2021/1/12,41,美国CAP的流行病学调查Community-acquired pneumonia incidence study(CAPIS),例数/10万人,Arch Intern Med 1997;157:1079,2021/1/12,42,美国CAP的流行病学调查Community-acquired pneumonia incidence study(CAPIS),Arch Intern Med 1997;157:1079,2021/1/12,43,肺炎链球菌是不明原因CAP的首要致病菌?,1993年1月-1994年3月西班牙，纳入109例急诊CAP,常规检查手段：,血培养两次,就诊当天及30天后取血查病毒及不典型致病菌抗体,痰涂片及痰培养,2021/1/12,44,肺炎链球菌是不明原因CAP的首要致病菌?,胸腔细针抽吸术：,细菌培养，抗原检测肺炎链球菌、流感嗜血杆菌,PCR检测肺炎链球菌、支原体、衣原体、军团菌、卡氏肺囊虫,2021/1/12,45,肺炎链球菌是不明原因CAP的首要致病菌?,常规检查手段：,54个病人确定病原菌（阳性率50）,胸腔细针抽吸术：,在54个已知病因者：22个得到证实,另55个未明病因者：36个得以明确，其中18例为肺炎链球菌,2021/1/12,46,19922001年青霉素、红霉素耐药的肺炎链球菌的发展趋势:Alexander 监测,国家青霉素 I+R红霉素 r,法国%R 92(n=169)7.725.4,%R 01(n=165)35.8*56.4*,德国%R 92(n=104)01,%R 01(n=147)2.47.7,意大利%R 92(n=70)24.91.4,%R 01(n=103)30.235.9*,英国%R 92(n=166)5.62.4,%R 01(n=87)20.7*11.5*,美国%R 92(n=125)5.66.4,%R 01(n=87)20.7*28.8*,2021/1/12,47,耐青霉素的肺炎链球菌（PRSP）,1ug苯唑西林纸片筛选耐青霉素的肺炎链球菌（PRSP）：,抑菌圈20mm为敏感，表示对其他相关的-内酰胺类抗生素敏感,抑菌圈19mm作MIC,2021/1/12,48,卡他布兰汉菌,分类：,莫拉菌属布兰汉亚属。该亚属包括,卡他布兰汉菌、猪布兰汉菌、羊布兰汉菌、,兔布兰汉菌。,2021/1/12,49,卡他布兰汉菌,菌落形态：灰白色、光滑、圆凸、不透明、不溶血的菌落（有特殊的手感）,菌体形态：革兰阴性双球菌、呈咖啡豆形、无芽胞、无荚膜、无鞭毛。,生化反应：氧化酶、触酶、DNA酶均阳性，不分解任何糖类，还原硝酸盐。,2021/1/12,50,院内感染和社区获得性呼吸道感染的区别：,标本来自不同病房；,病原菌种类不同；,耐药的情况不同。,2021/1/12,51,菌种保存,制备脱脂牛奶,将新鲜牛奶煮沸除去表面油脂，用脱脂棉过滤并3000r/min离心15min，除去上层油脂。,使用脱脂奶粉，可直接配成20乳液，高压灭菌，无菌分装。,2021/1/12,52,谢谢！,2021/1/12,53,谢谢！,