光激化学发光技术介绍.pptx

L Lightight I Initiatednitiated C Chemiluminescence hemiluminescence A Assayssay光激化学发光（光激化学发光（LiCA）光激化学发光（光激化学发光（LiCA）介绍）介绍以高分子微粒为基础以高分子微粒为基础以高分子微粒为基础以高分子微粒为基础 两种微粒近距离两种微粒近距离两种微粒近距离两种微粒近距离 离子氧能量传递离子氧能量传递离子氧能量传递离子氧能量传递主要特点：主要特点：主要特点：主要特点：高灵敏度高灵敏度高灵敏度高灵敏度 低本底低本底低本底低本底 稳定稳定稳定稳定 均相均相均相均相 免洗免洗免洗免洗广泛应用于生物分子间的相互作用广泛应用于生物分子间的相互作用广泛应用于生物分子间的相互作用广泛应用于生物分子间的相互作用微粒的组成微粒的组成感光微粒内含感光化合物感光微粒内含感光化合物感光微粒内含感光化合物感光微粒内含感光化合物发光微粒内含发光化合物和镧系元素发光微粒内含发光化合物和镧系元素发光微粒内含发光化合物和镧系元素发光微粒内含发光化合物和镧系元素微粒直径微粒直径微粒直径微粒直径188nm188nm，表面覆盖水凝胶，表面覆盖水凝胶，表面覆盖水凝胶，表面覆盖水凝胶共价连接共价连接共价连接共价连接增大的表面积增大的表面积增大的表面积增大的表面积成百上千个生物分子，捕获目标分子成百上千个生物分子，捕获目标分子成百上千个生物分子，捕获目标分子成百上千个生物分子，捕获目标分子LiCA发光原理发光原理核心原理是能量的近距离转移核心原理是能量的近距离转移核心原理是能量的近距离转移核心原理是能量的近距离转移转移的介质是高能态离子氧转移的介质是高能态离子氧转移的介质是高能态离子氧转移的介质是高能态离子氧红色激光红色激光红色激光红色激光680nm680nm照射，感光微粒释放离子氧（照射，感光微粒释放离子氧（照射，感光微粒释放离子氧（照射，感光微粒释放离子氧（4 4微秒），传播直微秒），传播直微秒），传播直微秒），传播直径径径径200nm200nm，发光微粒（，发光微粒（，发光微粒（，发光微粒（520520618nm618nm），高能级的光），高能级的光），高能级的光），高能级的光反应的基础有赖于两种微粒的相互接近反应的基础有赖于两种微粒的相互接近反应的基础有赖于两种微粒的相互接近反应的基础有赖于两种微粒的相互接近反应体系中，微粒的浓度很低，碰撞机率很低，本底信号微弱反应体系中，微粒的浓度很低，碰撞机率很低，本底信号微弱反应体系中，微粒的浓度很低，碰撞机率很低，本底信号微弱反应体系中，微粒的浓度很低，碰撞机率很低，本底信号微弱原理原理(1)发射光发射光520-620 nm发光微球发光微球1O2AB激发光激发光680 nm感光微球感光微球200nm200nm原理原理(2)激发光激发光680 nm感光微球感光微球A发光微球发光微球CO2-LiCA的技术特点（一）的技术特点（一）高灵敏度高灵敏度高灵敏度高灵敏度 信号产生逐级放大的结果信号产生逐级放大的结果信号产生逐级放大的结果信号产生逐级放大的结果 每个感光微粒释放出近每个感光微粒释放出近每个感光微粒释放出近每个感光微粒释放出近6 6万个离子氧万个离子氧万个离子氧万个离子氧 离子氧作用于二甲基噻吩，产生大量紫外光离子氧作用于二甲基噻吩，产生大量紫外光离子氧作用于二甲基噻吩，产生大量紫外光离子氧作用于二甲基噻吩，产生大量紫外光 紫外光激发镧系元素紫外光激发镧系元素紫外光激发镧系元素紫外光激发镧系元素 实际检测能力为实际检测能力为实际检测能力为实际检测能力为1010-15-15摩尔摩尔摩尔摩尔 理论检测能力为理论检测能力为理论检测能力为理论检测能力为1010-18-18摩尔摩尔摩尔摩尔LiCA的技术特点（二）的技术特点（二）低本底低本底低本底低本底 时间分辨模式采集光信号（延迟时间分辨模式采集光信号（延迟时间分辨模式采集光信号（延迟时间分辨模式采集光信号（延迟150 ms150 ms），天然荧光的寿命），天然荧光的寿命），天然荧光的寿命），天然荧光的寿命小于小于小于小于100 ns100 ns 采用采用采用采用680 nm680 nm红光激发，生物样品中的荧光物质不敏感红光激发，生物样品中的荧光物质不敏感红光激发，生物样品中的荧光物质不敏感红光激发，生物样品中的荧光物质不敏感 发射光的波长比激发光的波长短，能量更高，有别于荧光，发射光的波长比激发光的波长短，能量更高，有别于荧光，发射光的波长比激发光的波长短，能量更高，有别于荧光，发射光的波长比激发光的波长短，能量更高，有别于荧光，有效避免荧光物质干扰有效避免荧光物质干扰有效避免荧光物质干扰有效避免荧光物质干扰稳定稳定稳定稳定 均相环境使反应更充分均相环境使反应更充分均相环境使反应更充分均相环境使反应更充分 免洗操作杜绝随机误差和交叉污染免洗操作杜绝随机误差和交叉污染免洗操作杜绝随机误差和交叉污染免洗操作杜绝随机误差和交叉污染 感光和发光的有机分子受到微粒的保护，环境稳定和安全感光和发光的有机分子受到微粒的保护，环境稳定和安全感光和发光的有机分子受到微粒的保护，环境稳定和安全感光和发光的有机分子受到微粒的保护，环境稳定和安全 溶液中的氧浓度是一个常数溶液中的氧浓度是一个常数溶液中的氧浓度是一个常数溶液中的氧浓度是一个常数 不易受到不易受到不易受到不易受到pHpH值、离子强度和温度的影响值、离子强度和温度的影响值、离子强度和温度的影响值、离子强度和温度的影响LiCA的技术特点（三）的技术特点（三）临床免疫的各项检测临床免疫的各项检测临床免疫的各项检测临床免疫的各项检测生命科学的基础研究生命科学的基础研究生命科学的基础研究生命科学的基础研究新药的筛选新药的筛选新药的筛选新药的筛选标记简便标记简便标记简便标记简便检测过程简单检测过程简单检测过程简单检测过程简单广泛应用广泛应用基本包被模式基本包被模式GG-StreptavidinGG-Streptavidin（SASA）FG-AntibodyFG-Antibody（AbAb）基本反应模式基本反应模式biotin-antigenprimary Absecondary Ab(or protein A,G,LA)应用类型应用类型配体受体配体受体配体受体配体受体激酶激酶激酶激酶蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白免疫免疫免疫免疫蛋白酶蛋白酶蛋白酶蛋白酶蛋白蛋白蛋白蛋白DNADNA配体受体配体受体(1)TNFa-sTNFR1TNFa-sTNFR1BiotinBiotinanti-TNFR1 IgGanti-TNFR1 IgGFGFG-TNFa-TNFaProtein A-Protein A-sTNFR1sTNFR1配体受体配体受体(1)TNFa-sTNFR1TNFa-sTNFR1GG-SAGG-SABiotinBiotinanti-TNFR1 IgGanti-TNFR1 IgGFGFG-TNFa-TNFaProtein A-Protein A-sTNFR1sTNFR1配体受体配体受体(1)TNFa-sTNFR1TNFa-sTNFR1GG-SAGG-SABiotinBiotinanti-TNFR1 IgGanti-TNFR1 IgGFGFG-TNFa-TNFaProtein A-Protein A-sTNFR1sTNFR1配体受体配体受体(2)环磷酸腺苷环磷酸腺苷环磷酸腺苷环磷酸腺苷 cAMPcAMPBiotinBiotinFGFG-cAMP-cAMPanti-cAMP-anti-cAMP-配体受体配体受体(2)环磷酸腺苷环磷酸腺苷环磷酸腺苷环磷酸腺苷 cAMPcAMPGG-SAGG-SABiotinBiotinFGFG-cAMP-cAMPanti-cAMP-anti-cAMP-激酶激酶AktAktBiotinBiotinanti-Gsk3 IgGanti-Gsk3 IgGFGFG-Gsk3-Gsk3Protein A-Protein A-激酶激酶AktAktBiotinBiotinanti-Gsk3 IgGanti-Gsk3 IgGFGFG-Gsk3-Gsk3Protein A-Protein A-激酶激酶AktAktGG-SAGG-SABiotinBiotinanti-Gsk3 IgGanti-Gsk3 IgGFGFG-Gsk3-Gsk3Protein A-Protein A-AktAkt磷酸化磷酸化磷酸化磷酸化激酶激酶AktAktGG-SAGG-SABiotinBiotinanti-Gsk3 IgGanti-Gsk3 IgGFGFG-Gsk3-Gsk3Protein A-Protein A-AktAkt蛋白蛋白蛋白蛋白BiotinBiotinFGFG-p53-p53Anti-GST-Anti-GST-p53/HDM2p53/HDM2HDM2-HDM2-GSTGST蛋白蛋白蛋白蛋白GG-SAGG-SABiotinBiotinFGFG-p53-p53Anti-GST-Anti-GST-p53/HDM2p53/HDM2HDM2-HDM2-GSTGST免疫免疫(1)肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子 TNFaTNFaBiotinBiotinFGFG-anti-TNFa-anti-TNFaanti-TNFa-anti-TNFa-TNFaTNFa免疫免疫(1)肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子 TNFaTNFaGG-SAGG-SABiotinBiotinFGFG-anti-TNFa-anti-TNFaanti-TNFa-anti-TNFa-TNFaTNFa免疫免疫(2)BiotinBiotinanti-TNFaanti-TNFaFGFG-anti-TNFa-anti-TNFaProtein A-Protein A-TNFaTNFa肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子 TNFaTNFaGG-SAGG-SA免疫免疫(2)GG-SAGG-SABiotinBiotinanti-TNFaanti-TNFaFGFG-anti-TNFa-anti-TNFaProtein A-Protein A-TNFaTNFa肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子 TNFaTNFa蛋白酶蛋白酶(1)GG-SAGG-SABiotinBiotinFGFG-substrate-substrateanti-digoxigenin-anti-digoxigenin-组织蛋白酶组织蛋白酶组织蛋白酶组织蛋白酶 Cathepsin DCathepsin D-digoxigenin-digoxigenin Cathepsin D Cathepsin D 水解水解水解水解蛋白酶蛋白酶(2)ACEACEBiotinBiotinFGFG-angiotensin I-angiotensin Ianti-angiotensin II-anti-angiotensin II-ACEACE切割切割切割切割蛋白酶蛋白酶(2)ACEACEGG-SAGG-SABiotinBiotinFGFG-angiotensin I Iangiotensin I Ianti-angiotensin II-anti-angiotensin II-蛋白蛋白DNAERa-DNAERa-DNABiotinBiotinFGFG-ERa-ERaanti-digoxigenin-anti-digoxigenin-digoxigenin-digoxigeninDNADNA蛋白蛋白DNAERa-EREERa-EREGG-SAGG-SABiotinBiotinFGFG-ERa-ERaanti-digoxigenin-anti-digoxigenin-digoxigenin-digoxigeninDNADNA当前成功应用实例当前成功应用实例HBsAgHBsAgGG-SAGG-SABiotinBiotin-Anti-HBs-Anti-HBsAnti-HBs-FGAnti-HBs-FGHBsAgHBsAgAnti-HBsAnti-HBsGG-SAGG-SA Biotin-HBsAg Biotin-HBsAgFGFGHBsAg-HBsAg-Anti-HBsAnti-HBsHBeAgHBeAgGG-SAGG-SABiotinBiotinFGFG-Anti-HBe-Anti-HBeAnti-HBe-Anti-HBe-HBeAgHBeAgAnti-HBeAnti-HBeGG-SAGG-SABiotinBiotinFGFG-Anti-HBe-Anti-HBeAnti-HBe-Anti-HBe-中和中和中和中和HBeAgHBeAgSample Sample Anti-HBeAnti-HBeAnti-HBcAnti-HBcGG-SAGG-SABiotinBiotinFGFG-HBcAg-HBcAgAnti-HBc-Anti-HBc-Anti-HBcAnti-HBc检测平台检测平台LiCA SP双加样臂双加样臂双加样臂双加样臂气置换式微量进样泵气置换式微量进样泵气置换式微量进样泵气置换式微量进样泵液面自动检测功能液面自动检测功能液面自动检测功能液面自动检测功能标本、试剂装载标本、试剂装载标本、试剂装载标本、试剂装载 100100个标本个标本个标本个标本 1010个试剂位个试剂位个试剂位个试剂位LiCA HT一次装载一次装载一次装载一次装载300300个测试个测试个测试个测试自动高速进样：自动高速进样：自动高速进样：自动高速进样：0.50.5秒秒秒秒/孔孔孔孔自动温育、震荡和读数自动温育、震荡和读数自动温育、震荡和读数自动温育、震荡和读数300300个测试仅需个测试仅需个测试仅需个测试仅需5050分钟分钟分钟分钟谢谢 谢！谢！