蛋白质工程的崛起：课件一(29张PPT).ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,蛋白质工程的崛起,蛋白质工程就是为了生产出符合人类生产和生活需要的蛋白质，甚至是自然界不存在的蛋白质。,基因工程在原则上只能生产自然界已存,在的蛋白质，这些天然蛋白质是生物在,长期进化过程中形成的，它们的结构和,功能符合特定物种生存的需要，却不一,定完全符合人类生产和生活的需要。,一、蛋白质工程崛起的缘由,二、蛋白质工程的概念,蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造或制造一种新的蛋白质，以满足人类对生产和生活的需求。,前提,：,原理,：,目的：,了解蛋白质的结构和功能,改造基因（基因修饰或基因合成）,定向改造或制造蛋白质,蛋白质的功能是,DNA,决定的，那么要制,造出新的蛋白质，就要改造,DNA,，所以蛋,白质工程的原理应该是中心法则的逆推。,三、蛋白质工程的基本原理,基因,DNA,氨基酸序列,多肽链,蛋白质,三维结构,预期功能,生物功能,mRNA,转录,翻译,折叠,DNA,合成,分子设计,讨论：,1,、怎样得出决定这一段肽链的脱氧核苷酸序列？,请把相应的碱基序列写出来。,某多肽链的一段氨基酸序列是：,-,丙氨酸,-,色氨酸,-,赖氨酸,-,甲硫氨酸,-,苯丙氨酸,-,丙氨酸：,GCU,、,GCC,、,GCA,、,GCG,色氨酸：,UGG,赖氨酸：,AAA,、,AAG,甲硫氨酸：,AUG,苯丙氨酸：,UUU,、,UUC,每种氨基酸都有对应的三联密码子,只要查一下遗传密码子表,就可以将上述氨基酸序列的编码序列查出来。但是由于上述氨基酸序列中有几个氨基酸是由多个三联密码子编码,因此其碱基排列组合起来就比较复杂,至少可以排列出,16,种。同学们可以根据学过的排列组合知识自己排列一下。首先应该根据三联密码子推出,mRNA,序列为,GCU,（或,C,或,A,或,G,）,UGGAAA,（或,G,）,AUGUUU,（或,C,），再根据碱基互补配对规律推出脱氧核苷酸序列：,CGA,（或,G,或,T,或,C,）,ACCTTT,（或,C,）,TACAAA,（或,G,）。,基因定点诱变技术的常用方法是,PCR,法。,突变点：,人工合成的引物上,手段：,PCR,技术（定点突变试剂盒）,目的：,获得定点突变的基因,2,、确定目的基因的碱基序列后，怎样才能合,成或改造目的基因（,DNA,）？,可以通过人工合成的方法获取或基因的定点诱变技术来改变。,基因会发生突变，突变可以自发，也可以诱发，这是每个稍有生物学知识的人都知道的常识。但在加拿大生物化学家,M,史密斯（,1932,2000,）发明定点突变法之前，突变株的产生必须经由自然界或用化学等方法诱使基因体突变。这类方法属于随机突变，突变株必须在生物性状上有所改变，才能确定有突变发生，但除非用分子生物方法或遗传方法找到此突变处，否则无法确定突变位置。也就是说，这种突变是盲目的。而史密斯发明的定点突变法却是有目的的，该法可经由设计好的寡核苷酸，在任何一个基因片段上进行随意或设计好的突变，也就是说，这种突变是预先设定好的，所以也有人将该法称为“反遗传法”。,有意思的是这一给生命科学研究及应用领域带来革命性突破的方法竟然是史密斯和其同事在喝咖啡时闲聊出来的。现在，几乎每个生物实验室都会用定点突变法来研究基因或蛋白质的功能。,蛋白质工程的主要步骤通常包括：,（,1,）从生物体中,分离纯化,目的,蛋白,；,（,2,）,测定,其氨基酸,序列,；,（,3,）借助核磁共振和,X,射线晶体衍射等手段，尽可能地,了解,蛋白质的二维重组和三维晶体,结构,;,（,4,）,设计,各种,处理条件,，,了解,蛋白质的,结构变化,，包括折叠与去折叠等,对其活性与功能的影响,；,（,5,）,设计,编码该蛋白的,基因改造方案,，如定点突变；,（,6,）,分离、纯化新蛋白,，,功能检测,后投入实际使用。,蛋白质工程的实质,对编码蛋白质的基因进行改造,（二）蛋白质改造工程举例,1,水蛭素改造,水蛭素是水蛭唾液腺分泌的凝血酶特异抑制剂，它有多种变异体，由,65,或,66,个氨基酸残基组成。水蛭素在临床上可作为抗栓药物用于治疗血栓疾病。为提高水蛭素活性，在综合各变异体结构特点的基础上提出改造水蛭素主要变异体,HV2,的设计方案，将,47,位的,Asn,（天冬酰胺）变成,Lys,（赖氨酸），使其与分子内第,4,或第,5,位,Thr,（苏氨酸）间形成氢键来帮助水蛭素,N,端肽段的正确取向，从而提高抗凝血效率，试管试验活性提高了,4,倍，在动物模型上检验抗血栓形成的效果，提高,20,倍。,2,生长激素改造,生长激素通过对它特异受体的作用促进细胞和机体的生长发育，然而它不仅可以结合生长激素受体，还可以结合许多种不同类型细胞的催乳激素受体，引发其他生理过程。在治疗过程中为减少副作用，需使人的重组生长激素只与生长激素受体结合，尽可能减少与其他激素受体的结合。经研究发现，二者受体结合区有一部分重叠，但并不完全相同，有可能通过改造加以区别。由于人的生长激素和催乳激素受体结合需要锌离子参与作用，而它与生长激素受体结合则无需锌离子参与，于是考虑取代充当锌离子配基的氨基酸侧链，如第,18,和第,21,位,His,（组氨酸）和第,17,位,Glu,（谷氨酸）。实验结果与预先设想一致，但要开发作为临床用药还有大量的工作要做。,3,胰岛素改造,天然胰岛素制剂在储存中易形成二聚体和六聚体，延缓胰岛素从注射部位进入血液，从而延缓了其降血糖作用，也增加了抗原性，这是胰岛素,B23-B28,氨基酸残基结构所致。利用蛋白质工程技术改变这些残基，则可降低其聚合作用，使胰岛素快速起作用。该速效胰岛素已通过临床实验。,4,治癌酶的改造,癌症的基因治疗分二个方面：药物作用于癌细胞，特异性地抑制或杀死癌细胞；药物保护正常细胞免受化学药物的侵害，可以提高化学治疗的剂量。疱疹病毒（,HSV,）胸腺嘧啶激酶（,TK,）可以催化胸腺嘧啶和其它结构类似物磷酸化而使这些碱基,3-OH,缺乏,从而阻断,DNA,的合成，杀死癌细胞。,HSVTK,催化能力可以通过基因突变来提高。从大量的随机突变中进行筛选出一种酶,在酶活性部位附近有,6,个氨基酸被替换，催化能力,20,倍以上。,蛋白质工程的发展很快，研究工作很多，以上仅介绍了几个例子。蛋白质工程除了用于改造天然蛋白质或设计制造新的蛋白质外，其本身还是研究蛋白质结构功能的一种强有力的工具，它在解决生物理论方面所起的作用，可以和任何重大的生物研究方法相提并论。,三、蛋白质工程的进展和前景,蛋白质工程汇集了当代分子生物学等学科的一些前沿领域的最新成就，它把核酸与蛋白质结合、蛋白质空间结构与生物功能结合起来研究。蛋白质工程将蛋白质与酶的研究推进到崭新的时代，为蛋白质和酶在工业、农业和医药方面的应用开拓了诱人的前景。蛋白质工程开创了按照人类意愿改造、创造符合人类需要的蛋白质的新时期。,1,、,蛋白质工程中直接需要进行操作的对象是（）,氨基酸结构,B,蛋白质空间结构,C,肽链结构,D,基因结构,练习：,2,、,下列关于蛋白质工程的说法错误的是（）,A,蛋白质工程能定向改造蛋白质分子的结构，使之更加符合人类的需要,B,蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作，定向改变分子的结构,C,蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子,D,蛋白质工程与基因工程密不可分，又被称为第二代基因工程,3,以下关于蛋白质工程的说法正确的是（）,A,、,蛋白质工程以基因工程为基础,B,、,蛋白质工程就是酶工程的延伸,C,、,蛋白质工程就是用蛋白酶对蛋白质进行改造,D,、,蛋白质工程只能生产天然的蛋白质,4,蛋白质工程的基本流程正确的是（）,蛋白质分子结构设计,DNA,合成预期蛋白质功能根据氨基酸序列推出脱氧核苷酸序列,A,B,C,D,5,蛋白质工程是在基因工程基础上，延伸出来的第二代基因工程，其结果产生的蛋白质是（）,A,氨基酸种类增多,B,氨基酸种类减少,C,仍为天然存在蛋白质,D,可合成天然不存在蛋白质,1,、你知道人类蛋白质组计划吗？它与蛋白质工程有什么关系？我国科学家承担了什么任务？,旁栏思考题,人类蛋白质组计划是继人类基因组计划之后，生命科学乃至自然领域一项重大的科学命题。,2001,年，国际人类蛋白质组组织宣告成立。,2003,年，该组织正式提出启动了两项重大国际合作行动：一项是由中国科学家牵头执行的“人类肝脏蛋白质组计划”；另一项是以美国科学家牵头的“人类血将蛋白质组计划”，由此拉开了人类蛋白质组计划的帷幕。,“人类肝脏蛋白质组计划”是国际上第一个人类组织器官的蛋白质组计划，由我国贺福初院士牵头，这是中国科学家第一次领衔重大国际科研协作计划，总部设在北京。它的科学目标是揭示并确认肝脏的蛋白质，为重大肝病预防、诊断、治疗和新药研发的突破提供重要的科学基础。,随后，相继启动了由德国、瑞士、英国、加拿大和日本等国牵头的各类蛋白质组计划。人类蛋白质组计划的深入研究将是对蛋白质工程的有力推动和理论支持。,2,、对天然蛋白质进行改造，你认为应该直接对蛋白质分子进行操作，还是通过对基因的操作来实现？,答：毫无疑问应该从对基因的操作来实现对天然蛋白质改造，主要原因如下,（,1,）、任何一种天然蛋白质都是由基因编码的，改造了基因即对蛋白质进行了改造，而且改造过的蛋白质可以遗传下去。如果对蛋白质直接改造。即使改造成功，被改造过的蛋白质分子还是无法遗传的。,（,2,）、对基因进行改造比对蛋白质直接进行改造要容易操作，难度要小得多。,异想天开,能不能根据人类需要的蛋白质的结构，设计相应的基因，导入合适的细菌中，让细菌生产人类所需要的蛋白质食品呢？,理论讲可以，但目前还没有真正成功的例子。一些报道利用细菌生产人类需要的蛋白质往往都是自然界已经存在的蛋白质，并非完全是人工设计出来而自然不存在的蛋白质。主要原因是蛋白质的高级结构非常复杂，人类对蛋白质的高级结构和在生物体内如何行使功能知之甚少，很难设计出一个崭新而又具有生命功能作用的蛋白质，而且一个崭新的蛋白质会带来什么危害也是人们所担心的。,再见,