造血干细胞定向分化扩增和移植课件.ppt

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。,追溯干细胞的发现史,1868,年，德国生物学家,Ernst Haeckel,第一次利用,“,干细胞,”,一词来描述,受精卵,（,fertilized egg or zygote,）。,1981,年起，研究人员长期致力于小鼠胚胎干细胞研究工作。,1998,年，研究人员首次分离出,小鼠胚胎干细胞,(embryonic stem cell),。,2006年,，日本首次诱导小鼠胚胎成纤维细胞成为多能干细胞，并命名为,iPS,（,induced pluripotent stem cell,）,。,2007,年,11,月，美国和日本同时宣布将人体皮肤细胞诱导成了,iPS,。,干细胞,(stem cell,SC),研究,成为继人类基因组大规模测序之后最具活力、最有影响和最有应用前景的,生命学科,研究领域。,1999,年,2000,年连续两年被美国,Science,杂志评为本年度十大科学成就之一。,2001,年被列入当今六大热门科技研究领域之一。,2008,年,Cell Stem Cell,创刊仅,2,年,影响因子（,impact factor,，,IF),从,0,冲至,16.826,23.563,（,2009,年）,25.943,（,2010,年）。,胚胎干细胞,(embryonic stem cell,，,EC),成体干细胞,(somatic stem cell),：,干细胞分类,造血干细胞,神经干细胞,肌肉干细胞,胚胎干细胞,神经干细胞,光学显微镜下的神经（左）和肌肉（右）干细胞,按,发育,状态,unipotent,（单能）,:somatic SC,干细胞分类,按,分化,潜能,Totipoent(,全能,):ES,pluripotent,（多能）,:somatic SC,Where we find somatic SC?,muscles,skin,surface of the eye,brain,breast,intestines(gut),bone marrow,testicles,There are,other tissues and organs,containing somatic SC except for above mentioned.,Somatic stem cells:,Haematopoietic stem cells(HSCs),诱导性多功能干细胞,(,induced pluripotent stem cell，iPS,),2006,年日本首次通过逆转录病毒将,4,个转录因子即,Oct3/4,、,Sox2,、,c-Myc,及,Klf4,导入小鼠胚胎成纤维细胞（,mouse embryonic fibroblast,，,MEF,）获得一种多能干细胞，并命名为,iPS,。,2007,年,11,月，美国和日本同时宣布将,人体皮肤细胞,(skin cell),改造成了,iPS,。,adult cell,genetic reprogramming,=add certain genes to the cell,induced iPS behaves like an,ES,iPS:,no need for embryos!,干细胞的端粒酶（,telomerase,）,普通细胞受到端粒,(telomere),的限制，在经历一定次数的分裂后就会死亡。细胞的,DNA,复制机器无法达到,DNA,链的最顶端，因此随着每次细胞分裂端粒会逐渐缩短。,而干细胞中包含一种,端粒酶,，能够构建端粒备份，使细胞获得永生。,干细胞的应用,“,制造或再生,”,器官,，为细胞治疗、组织替代治疗、器官移植等提供新的技术途径。,与基因工程技术相结合，利用基因,定点缺失,与,突变,等进行更加有效的,基因治疗,，,为疾病、创伤、衰老和遗传等因素所致的组织器官损伤或功能障碍的治疗提供了新的思路。,解决人类面临的大多数,医学难题,，如心血管疾病、自身免疫性疾病、糖尿病、骨质疏松、恶性肿瘤、老年性痴呆、帕金森病、严重烧伤、脊髓损伤和遗传性缺陷等疾病的治疗。,Stem Cells:,Flexible friends,.Nature 2012,Mar 1,483:S22,S26.DOI:doi:10.1038/483S22a,我国建成世界最大人胚胎干细胞库,我国建成世界最大人胚胎干细胞库,中南大学生殖与干细胞工程研究所所长卢光琇带领科研团队，建成了目前世界上最大的具有不同组织，相容性抗原的人胚胎干细胞库。,建立的人胚胎干细胞系已达,300,多株，使保存的早期微量细胞的复苏效率超过了,95%,，达到国际领先水平。,并建立了世界上首个基因完全纯合的人类孤雌干细胞系。,我国建成世界最大人胚胎干细胞库,替换那些因病,“,下岗,”,的细胞,修复那些,“,过劳死,”,的组织,起到,“,全能修理工,”,的作用,目前,除,造血干细胞移植,被作为成熟技术应用于临床治疗外，其他干细胞移植技术尚处在临床研究阶段。,干细胞移植,造血干细胞作为干细胞研究与应用的突破口,造血细胞是,细胞增殖分化,的最佳模型。,造血干祖细胞及各系血细胞的,表面标志,较为清楚，可进行定量分析，且可分选。,造血干细胞增殖及向各系分化的重要,诱导因子、受体、信号转导、微环境,（,niche,）等因素较为清楚。,造血细胞发挥功能可相对,游离,，不需,“,生物支架,”,、神经、血管、外科移植等复杂的,“,下游,”,工艺，便于直接应用于临床。,The Nobel Prize,1990,E.Donnall Thomas,first succsessful HSCT in treatment of acute leukemia,Thomas ED,Lochte HL,Lu WC,Ferrebee JW.Intravenous infusion of bone marrow in patients receiving radiation and chemotherapy.,N.Engl.J.Med,.,1957,;257:491.,什么是造血干细胞移植？,(,Heamatopoietic Stem Cell Transplantation,，,HSCT),经大剂量放化疗或其他免疫抑制预处理，清除受体体内的肿瘤细胞和异常克隆细胞，阻断发病机制，然后把自体或异体造血干细胞移植给受体，使受体重建正常造血和免疫功能，从而达到治疗目的的一种治疗手段。,一、按,细胞,来源,造血干细胞移植的分类,骨髓干细胞移植,（,BMT,）,外周血造血干细胞移植,(PBHSCT),脐带血干细胞移植（,UCBSCT),胎肝移植,(FLCT),自体（,autologous,）,异体造血干细胞移植,异种（,xenogeneie,）,二、按,供体与宿主,的关系,同基因（,syngeneic,）,:,同卵双生,异基因,(allogeneic,）,:,有血缘,（,related,）,无血缘,（,un-related,),清髓性造血干细胞移植,非清髓性造血干细胞移植,三、,按,供受体间,HLA,相关性,(Human Leukocyte Antigen),HLA,全相合,HLA,不全相合,HLA,不相合,四、,CD34,细胞移植,五、按,预处理强度和目的,1,骨髓移植,（,bone marrow transplantation,，,BMT,）,通过多点骨髓腔穿刺，抽吸含,HSC,的骨髓血混合液，是,经典,的移植方法，效果可靠。但采髓需在,全麻或硬膜外麻醉,下进行，通常需采集骨髓混合液,600-1000ml,，具体数值随患者体重来定,但,GVHD,(graft versus host disease),发生。,包括,自体,BMT,（,autologous BMT,，,ABMT,）,同基因,BMT,（,syngeneic BMT,，,syn-BMT,）,异基因,BMT,（,allogeneic BMT,，,allo-BMT,）,2,外周血干细胞移植,(peripheral blood stem cell transplantation,PBSCT),使用药物和细胞因子,动员,促使,HSC,从骨髓释放到外周血，然后通过,血细胞分离机,从循环血中收集,HSC,。与,BMT,相比，具有,采集方便,、供者,不需麻醉,、移植后造血细胞,恢复快,，而,GVHD,发生率和严重程度并无明显增加等优点。,包括 自体,PBSCT,（,autologous APBSCT,）,异体,PBSCT(allogeneic PBSCT,allo-PBSCT),3,脐带血干细胞移植,(,Umbilical cord blood,stem cell transplantation,，,UCBSCT),胎儿脐带血和胎盘中含有大量造血干细胞，且,免疫原性,不成熟，在同胞兄妹中,HLA,配型不完全相合,者也能植活，不过无关供者脐血干细胞移植仍需要作,HLA,配型。与,BMT,及,PBSCT,相比，脐带血干细胞具有异体,排斥反应小，免疫原性低，,再生能力和速度是前者的,10,到,20,倍,，,受病毒,感染的风险低等,特点。,胎儿的脐带结构示意图,脐带血干细胞体外集落图,什么是造血干细胞？,Heamatopoietic Stem Cell,，,HSC,红,色为,CD34,表型的造血干细胞，,绿,色为,CD31,表型的内皮细胞，,蓝,色为,DAPI,。,胎盘绒毛膜显微镜图像,祖,/,定向干,C,幼稚,C(,早中晚,),原始,C,成熟,C,自我复制、多向分化,血细胞发生,演变规律,分化,:,强 弱 无,胞体,:,大 小,胞核,:,大 小，染色质稀 密，核仁有 无,胞质,:,少 多，嗜碱性由强 弱 无，特殊产物无 少 多,HSC,haematopoietic stem,cell;,CLP,common,lymphoid,progenitor;,CMP,common,myeloid,progenitor.,Schematic view of adult haematopoiesis,存在于造血组织中的一类原始的造血细胞,自我更新,(,self renew,ing),多向分化,(multipotent differentiation),各种血细胞与免疫细胞的起源细胞。,能重建造血，同时重建免疫。,造血干细胞（,HSC,）,第一节 造血干,/,祖细胞的生物学特性,外周血造血干,/,祖细胞物理特性,正常外周血中,HSC,含量极,少,，约为骨髓的,1%,比中等大小圆型淋巴样单核细胞略,小,。,在人类尚无检测真正造血干细胞的方法，一般,LTC-IC,或,CFU-BI,可代表干细胞的数量。,CFU-GEMM,代表多能造血祖细胞。,外周血造血,/,祖细胞约占单个核细胞的,0.01-0.1%,。,CFU,:colony forming unit,集落形成单位,LTC-IC,:long-term culture initiating cell,长期培养起始细胞,CFU-BI,:colony-forming unit-blast,原始集落形成单位,CFU-GEMM,：,CFU-granulocyte/erythroid/macrophage/megakaryocyte,粒,/,红,/,巨噬,/,巨核集落形成单位,CD34,+,(,最广泛的,HSC,的表面标志,),AC133,（细胞表面糖蛋白）,c-kit(CD117,）,+,（,SCFR,造血干细胞因子受体）,Flt3(CD135,）,+,KDR,+,（,Vascular endothelial growth factor reecptor 2,，,VEGFR2),CD38,CD33,-,Thy-1,-,（,CD90,low,）（胸腺细胞表面抗原标志）,CD71,HLA,-,DR,（与细胞增殖有关）,MCD45RA,low,Lin,(,已分化为特定细胞的标记,),Rh123,low,HO33342,low,外周血造血干,/,祖细胞,表型特性,方法：利用各种抗,CD,抗原的单克隆抗体区分。,外周血造血干,/,祖细胞功能特性,以体外半固体培养中集落形成能力来测定,HSC,LTCIC,HPP-CFC,CFU-M,BFU-E,CFU-Meg,淋巴祖细胞,CFU-GM,CFU-G,CFU-MIX,CFU,:colony forming unit,集落形成单位,LTC-IC,:long-term culture initiating cell,长期培养起始细胞,HPP-CFC,:high proliferation potential colony foming cell,高增殖力集落形成单位,CFU-MIX,:,混合集落形成细胞,CFU-GM,:,粒单细胞集落形成细胞,CFU-G,:,粒细胞集落形成细胞,CFU-M,:,巨噬细胞集落形成细胞,CFU-E,:,红细胞爆式集落形成细胞,CFU-Meg,:,巨核细胞系集落形成细胞,早期祖细胞,多向或双向,定向,集落形成的关键是培养体系（细胞因子和血清等）,CFU-GM,和总,CFC,常用作评估外周血移植物质量的指标,骨髓象分析,遗传学、免疫学及分子生物学分析,配型,采集,HSC,预处理：,TBI,(total body irradiation,）,回到层流病房,HSC,输注,造血干细胞移殖流程,第二节 造血干细胞的动员、采集、处理,造血功能恢复,动员,采集,冻存,预处理,回输,一,.,外周血造血干,/,祖细胞动员,动员的机制,“,造血动员式,”,化疗,化疗动员的具体方案,造血因子的使用,化疗与造血因子联合,动员剂将造血干细胞动员到外周血。,化疗药物,:,反馈性,造血增生。,造血细胞因子,:,刺激造血细胞增殖及向髓外,转移,。,动员前,:PB CD34,+,0.1-0.2%,，,动员后：,1-2%,（一）动员的,机制,具体方案,大剂量单一化疗药物,：,CTX(cytoxan,环磷酰胺,)-,4g-7g/m,2,VP16(etoposide,，依托泊苷,)-2g/m,2,Melphalan,（马法兰）,-140mg/(m,2,d1-2),联合化疗,CTX 4g/m,2,VP16 600mg/m,2,（二）,“,造血动员式,”,化疗,（,三）造血因子的使用,GM-CSF,：,Granulocyte-macrophage colony stimulating factor,粒,巨噬细胞集落刺激因子,G-CSF,：,Granulocyte colony-stimulating factor,粒,巨噬细胞集落刺激因子,SCF,：,stem cell factor,干细胞因子,IL-3,：,interlukin-3,白介素,-3,IL-11,：,interlukin-11,白介素,-11,IL-8,：,interlukin-8,白介素,-8,IL-1,：,interlukin-8,白介素,-1,MIP-1,：,Macrophage Inflammatory Proteins,巨噬细胞炎症蛋白,1,PIXY321,：,重组人,GM-CSF/IL-3,融合蛋白,（,四）化疗与造血因子联合,化疗及,G-CSF,的联合动员,化疗及,GM-CSF,的联合动员,化疗及其他细胞因子的联合动员,IL-3 PIXY321 SCF,二 外周血造血干,/,祖细胞采集,（一）,供者准备,患者用化疗,药物,及,造血细胞因子,联合动员,在白细胞数从最低点回升达到,1X10,9,/L,时开始采集，有时延误到,4X10,9,/L,。,常规使用,ACD-A,（,acid citrate dexotrose solution A,酸性枸橼酸盐葡萄糖溶液）抗凝。,血细胞分离机,：全自动、全封闭、连续和不连续、间歇的血细胞分离机。如,CS3000plus,每天一次，每次,10L,全血，可连续,2-3,次,(,二,),采集冷冻保存：,分离外周血单个核细胞,1,采集的细胞数,评价移植物,是否足够,有核细胞总数：,2-6 X 10,8,/kg,CFU,检测,CD34,+,细胞数：,1-3 X 10,6,/kg,ACD-A,：大量使用时致,ACD,中毒引起低钙,少量。,容量不足：通过打断采集程序即不断减少流速来完成。,血小板减少症（,thrombocytopenia,）：由于血小板（,platelet,）粘附于设备表面引起的，通过回输富含血小板的血浆,(platelet rich plasma,PRP),或输血小板来纠正。,2,采集并发症,3,处理,细胞浓度：,5 X10,7,/ml pH7 4,保存,CFU,最好。,4,进一步处理,富集,CD34,+,去除肿瘤细胞，去除,T,细胞,5,冷冻保存,常温液态下储存几天，通常冷冻。,加入细胞保护剂,DMSO,。,6,长期储存,在,-196,液氮中至少,5,年。,在,-80,机械冰箱储存的时间最长为,2.5,年。,应装置,24,小时警备系统。,避免交叉感染的因素,如袋子之间用双腔袋、冷存时液态蒸发等。,四 解冻与回输,副反应：,DMSO,诱导组胺释放。,措施：患者要经过水化和用抗组胺药抗休克。,目的：减少血管塌陷和低血压。,第三节,CD34,+,细胞的分选,一,CD34,+,细胞的分选的必要性,在体外纯化和,富集,CD34,+,细胞。,在,APBSCT,中，,净化,残留肿瘤细胞而减少复发。,在,allo-PBSCT,中,去,除,T,细胞,减轻,GVHD,发生。,对难治性自身免疫性疾病，可纯化,除去异常,免疫细胞。,可,提高,干细胞体外,扩增,及,基因转导,的效率。,二 造血干细胞移植物中肿瘤细胞的污染,基因标记实验证实了一些肿瘤病人，自体移植后绝大数患者检出基因标记的肿瘤细胞。,用药物体外净化比未净化的移植复发率低。,残留肿瘤细胞再输入是肿瘤复发的重要因素。,因此，从自体移植物中清除污染的肿瘤细胞是十分必要的。,低倍镜下肿瘤细胞,免疫净化（,immunologic purging,）,定义：在体外用免疫学的方法消除移植物中残留的肿瘤细胞的措施。,免疫,正净化,（,immunologic positive purging,）：将正常造血干细胞从移植物中纯化出来。,免疫,负净化,(immunologic negative purging),：将肿瘤细胞从自体移植物中清除。,免疫,双净化,（,immunologic double purging,）将免疫正、负净化法结合起来。,CD34,+,细胞正净化的优点,避免细胞毒性药物和免疫毒素对正常,HSC,的损伤；,无需抗肿瘤抗体净化的多环节体外处理，减少污染机会；,不会因肿瘤细胞对细胞毒性药物和免疫毒素的敏感性不同而影响净化效应；,如联合其它净化方法，可进一步提高净化效应,;,可减少冷冻保护剂,DMSO,的使用量，减少其副作用。,三,CD34,+,细胞的分选的原理及方法,原理：,CD34,+,细胞包含在单个核细胞组分中，在分选,CD34+,细胞前，常用一些非免疫学（如物理或功能）方法去除移植物中的红细胞和成熟粒细胞等成分。,密度梯度离心法,：它可获得富含单个核细胞的白细胞层，从而初步富集了,CD34,+,细胞。,临床上采用,血细胞分离机,：,按一定程序分离出经造血生长因子动员的外周血单个核细胞，这样大大减少了移植物体积，为进一步用免疫学分选,CD34,+,细胞做好准备。,p,m,，,S,0,，颗粒顺着离心方向沉降,p,=,m,，,S,=0,，颗粒达到某一位置后达到平衡,p,m,，,S,0,，颗粒逆着离心方向上浮,离心后形成不同大小不同形状、具有一定沉降系数差异的颗粒在密度梯度溶液中形成若干条界面清楚的不连续区带。,密度梯度离心,Ficoll,密速梯度离心法分离外周血单个核细胞（,PMBC,）,原理,：利用密度梯度介质,-,聚蔗糖,-,泛影葡胺（淋巴细胞分离液），相对密度,1.0770.001,。红细胞、粒细胞密度大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重，离心后漂浮于分层液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中。,Systemix,公司：高速荧光激活细胞分选系统（,high speed fluoresence-activated cell sorting system,），它先用一系列方法去除细胞各系标志阳性的定向祖细胞，然后用流式细胞仪高速分选。,流式细胞仪分离法（,Flow Cytometry,FCM,）,-,根据细胞表面抗原标志,CD34,+,CD34,+,将预分选的造血细胞与生物素化（,biotinylated,）的抗,CD34,的单克隆抗体一起孵育，然后洗去未结合的抗体，将样本通过抗生物素蛋白包被的聚丙烯酸胺柱的亲和素柱，,CD34,+,细胞滞留在柱内的聚丙烯酸胺球表面上，通过轻轻的机械摇动，冲洗出,CD34,+,细胞。,Cellpro,公司：,Ceprate,临床型,CD34+,细胞分选机,免疫吸附法（,Immunity Absorption,，,IA,）,根据生物素抗亲和素柱分选系统,Anti-CD34,+,biotinylated Ab,Wash unbound Abs,Anti-biotiny affinity column,Gentle shaking,原理：已包被一抗的磁珠与细胞表面相应分子特异性结合，或已包被二抗的磁珠与预先已与细胞表面分子特异结合的一抗结合。磁珠携带与之结合的细胞吸附于分离柱,/,试管上，实现阳性细胞分离或阴性细胞的分离。,免疫磁珠分离法,（,magnetic activated cell sorting,MACS,）,四,CliniMACS,临床细胞分选系统,五 自体外周血,CD34,+,细胞移植的临床应用,具有移植后造血和免疫功能恢复快等的特点。,有净化污染肿瘤细胞效应高的优点。,在治疗不表达,CD34,抗原的恶性肿瘤临床上广泛应用。,包括：非何杰金氏淋巴瘤,（,NHL,）,多发性骨髓瘤,乳腺癌,神经母细胞瘤,其它疾病,如自身免疫性疾病,HSCT,已成为治疗及治愈如下疾病的最佳选择,恶性血液病,急性髓细胞性白血病,急性淋巴细胞白血病,慢性粒细胞性白血病,毛细胞性白血病,恶性组织细胞病,重型再生障碍性贫血,重型海洋性贫血,骨髓纤维化,恶性肿瘤,骨髓增生异常综合症 多发性骨髓瘤,非霍奇金淋巴瘤,霍奇金淋巴瘤,恶性疾病,非恶性疾病,造血系统疾病,遗传性疾病,先天性免疫缺陷病,先天性造血异常症,先天性骨骼异常症,粘多糖储蓄症,粘蛋白脂质代谢病,系统性红斑狼疮,多发性硬化症,糖尿病,放射病,AIDS,病,自身免疫性疾病,干细胞治疗,型,糖尿病,采用自体干细胞移植,T,淋巴系统抑制的方法，可以重建免疫系统和胰腺功能,根据国外,5,年长期随访跟踪结果显示，接受移植后的,I,型糖尿病病人有,90,以上停用或减少了胰岛素注射。,六 异基因外周血,CD34,+,细胞移植的临床应用,HLA,相合,的同胞间，减少或减轻,GVHD,；,HLA,不全相合,（,1-3,个位点不合），不仅减轻,GVHD,，且可增加移植细胞量，减少移植物排斥反应；,从,同一家族供体,中输注,CD34+,细胞，增强骨髓增生低下受体的造血功能；,适用于,HLA,相合无关,供受体间的移植；,用于将供体,CD34,+,细胞和,T,淋巴细胞分离后,分别先后,移植和输注；,适用于分选,CD34,+,细胞后,体外扩增,后的移植和输注；,用于体外产生和扩增,抗原特异性免疫效应细胞,(antigen specific effector cell),和,抗原递呈细胞（,antigen presenting cell,APC,），以进行细胞治疗。,中国,HSCT,概况,CSBMT(,Chinese Society of BMT,),中国不同城市的,HSC,T,数量,中国不同单位的,HSC,T,数量,中国,HSCT,适应症（,2009,）,MM,Other leukemia,Autoimmune disease,Solid tumor,AA,AML,：,acute myelogenous leukemia,急性髓性白血病,ALL,：,acute lymphoblastic leukemia,急性淋巴细胞白血病,MM,：,Multiple Myeloma,，多发性骨髓瘤,AA,：,Aplastic Anemia,再生障碍性贫血,CML,：,Chronic myelogenous leukemia,慢性粒细胞白血病,MDS,：,Myelodysplastic Syndrome,骨髓增生异常综合征,中国,HSCT,类型（,2009,）,Identical,sibling,Haplo,Unrelated,Auto,syngeneic,Identical sibling:,相同同胞,Haplo:,单倍型,GIAC Principle,G,:,G-CSF mobilization,I,:,Immuno-suppression intensified and prolonged,A,:,ATG(,anti,thymocyte,globulin,),C,:,Combined BM&PB,专家呼吁,HSCT,纳入医保范围,美国、新加坡、新西兰等很多国家以及我国的香港、台湾、北京、上海均将,HSCT,纳入了医保范围。,我国每年新增白血病患者,45,万人，加上历年累计的患者，全国有近百万名白血病患者需要接受,HSCT,。,七,CD34,+,细胞移植的前景,可应用多次强化后的,支持,治疗；,减少,外周血白细胞,分离,次数；,造血重建,的速度比未经培养扩增的,CD34,+,细胞移植,快,；,将有限的,脐血,CD34,+,扩增到成人临床所需移植的,足够,剂量。,CD34,+,细胞的体外扩增,将,CD34,+,细胞诱发成树突状细胞的免疫治疗,将人类肿瘤抗原通过逆转录病毒转染给,CD34,+,细胞，然后在体外培养体系中加人细胞生长因子，将其分化诱导成,DC,，这种转染的肿瘤抗原的,DC,较未转染肿瘤抗原的,DC,在体外具有更强的刺激,CD4,+,T,淋巴细胞功能。,Haemopoietic,Stem Cell,Common Myeloid Progenitor,Circulating,Myeloid DC,CD34+,Stem Cell,CD34,+,DC,Ex vivo,GM-CSF+,Flt-3+TNF,Tumor antigen,transduction,CD34,+,细胞与基因治疗,CD34,+,细胞是最理想的基因治疗靶细胞。,可采自患者本人，体外易于处理，能进行有效的培养和扩增。,能自我更新以便转导的治疗基因，在患者细胞内,终身存在,。,尊重生命,拯救生命,延长生命,HSCT,思考题,什么是造血干细胞（,HSC,）？简述其主要特征及其表面标志。,什么是造血干细胞移植（,HSCT,）？简述其分类。,什么是外周血干细胞移植（,PBHSCT,）及其特点？,简述在,HSCT,中，,CD34+,细胞的分选的必要性及其方法。,