DNA粗提取.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,5.1 DNA,的粗提取与鉴定,实验原理,1,、研磨液中的变性剂可使细胞破裂，释放,DNA,。,2,、,DNA,不溶于酒精溶液，但细胞中某些物质则溶于酒精。利用这一原理，可进一步提取含杂质较少的,DNA,。,3,、沸水浴条件下，,DNA,遇二苯胺被染成蓝色。因此，二苯胺可以作为鉴定,DNA,的试剂。,目的要求,1,、初步掌握,DNA,的粗提取和鉴定,2,、观察提取的,DNA,物质,用具与材料,1,、用具,体积分数为,95,的预冷酒精、蒸馏水、研磨液、二苯胺试剂；搅拌机、烧杯（,100,mL,、,50,mL,）、纱布、试管（,20,mL,）、玻璃棒、滴管、量筒（,10mL,）、镊子、漏斗、纱布、滤纸、三角架、酒精灯、石棉网、试管夹、天平、冰箱等。,2,、材料,新鲜菜花,实验过程,（一）课前准备,将新鲜的菜花和体积分数为,95%,的酒精溶液放入冰箱冷冻,24h,以上，准备各种试剂和实验用具,全班学生分组，每组,7-8,人为宜,.,（二）,DNA,的粗提取,1.,取材,称取,30 g,菜花，去梗取花，切碎。,2.,研磨,向碎菜花中倒入,10,mL,研磨液,(,课前配制好的,),，拌匀，倒入搅拌机充分研磨,5 min,。,3.,过滤,将菜花研磨液过滤到离心管中。离心,2min,，再取上清液倒入烧杯中。,4.,沉淀,将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为,95,的预冷酒精溶液，并用玻璃棒缓缓、轻轻地搅拌溶液,(,玻璃棒不要直插到烧杯底部,),，沉淀,3min,后，可见白色的,DNA,絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转，将絮状物缠绕在玻璃棒上。,（三）,DNA,的鉴定,1,、,取,2,支,20mL,的试管，分别编为,1,号、,2,号，,分别加入,2mol/L,NaCl,溶液,5ml,2,、,将丝状物用玻璃棒挑起溶于,2,号试管中（用玻璃棒搅拌，使其充分溶解）,3,、各加入,二苯胺,试剂,4ml,4,、混匀后，置于沸水浴中加热,5min,5,、待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化,观察现象：,2,号试管,溶液变为,蓝色,DNA,的鉴定,使细胞核内的,DNA,释放不完全，提取的,DNA,量变少，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等,为了纯化提取的,DNA,需要将滤液作进一步处理，加冷却酒精溶液。,讨论：滤液中可能含有哪些成分？,答：可能含有核蛋白、多糖和,RNA,等杂质,想一想：如果研磨不充分，会对实验结果产生 怎样的影响？,观察你提取的,DNA,颜色，如果不是白色丝状物，说明,DNA,中的杂质较多；,二苯胺鉴定出现蓝色，说明实验基本成功，,如果不呈现蓝色，可能所提取的,DNA,含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新制备,成果评价,1,、是否提取出了,DNA,本实验提取的,DNA,粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。,2,、分析,DNA,中的杂质,练 习,1,、请解释提取,DNA,的实验操作中主要步骤的目的。,答：提取,DNA,的第一步是材料的选取，其目的是一定要选取,DNA,含量较高的生物材料，否则会由于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困难；第二步是,DNA,的释放和溶解，这一步是实验成功与否的关键，要尽可能使细胞内的,DNA,全部溶解；第三步是,DNA,的纯化，即根据,DNA,的溶解特性、对酶及高温的耐受性的不同等特性，最大限度地将,DNA,与杂质分开；最后一步是对,DNA,进行鉴定，这是对整个实验的结果的检测。,2,、你认为从细胞中提取某种特定的蛋白质与提取,DNA,一样容易吗？,答：提取蛋白质比提取,DNA,的难度大。这是因为，与,DNA,相比，蛋白质对温度、盐浓度、,pH,等条件要敏感得多，很容易失活；并且蛋白质的空间结构多种多样，理化性质各不相同，使得蛋白质的提取没有一种统一的方法，只能根据特定蛋白质的特性摸索提取的条件，设计特定的方法。,谢 谢,