食用菌菌种标准使用指南.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,食用菌菌种标准使用指南,金科玉律,种子法,食用菌菌种管理办法,黑木耳菌种,GB 19169-2003,香菇菌种,GB 19170-2003,双孢蘑菇菌种,GB 19171-2003,平菇菌种,GB 19172-2003,杏鲍菇和白灵菇菌种,NY 862-2004,一、术语和定义,我国食用菌菌种繁育体系,菌种,culture,生长在适宜基质上具结实性的菌丝培养物，包括母种、原种和栽培种。,一、术语和定义,母种,stock culture,经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，也称一级种、试管种。,一、术语和定义,原种,mother spawn,由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。也称二级种。,一、术语和定义,栽培种,spawn,由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。栽培种只能用于栽培，,不可再次扩大繁殖菌种。,也称三级种。,一、术语和定义,拮抗现象,antagonism,具有不同遗传基因的菌落间互相抑制产生不生长区带或形成不同形式线形边缘的现象。,一、术语和定义,角变,sectoring,因菌丝体局部变异或感染病毒而导致菌丝变细、生长缓慢、菌丝体表面特征成角状异常的现象。,一、术语和定义,高温抑制线（高温圈）,high-temperatured line,食用菌菌种在培养过程中受高温和通气不足的不良影响，培养物出现的圈状发黄、发暗或菌丝变稀弱的现象。,一、术语和定义,生物学效率,biological efficiency,单位数量培养料的风干物质所培养产生出的子实体或菌丝体质量（鲜重），常用百分数表示。如风干料,100,千克产生了新鲜子实体,50,千克，即为生物学效率,50,。,种性,characters of variety,指食用菌的品种特性。一般包括生理特性、农艺性状和商品性状。,二、检测内容,容器,感官检验,微生物学检验,菌丝生长速度,母种,农艺性状和商品性状,二、检测内容,母种质量要求,容器：,使用玻璃试管和棉塞,试管,18mm180mm,或,20mm200mm,棉塞要使用梳棉，不应使用脱脂棉。,二、检测内容,母种质量要求,感官要求：,项目,要求,容器,完整，无损,棉塞或无棉塑料盖,干燥、洁净、松紧适度，能满足透气和滤菌要求,培养基灌入量,为试管总容积的四分之一至五分之一,培养基斜面长度,顶端距棉塞,40mm,50mm,接种量,（,3-5,）,mm,（,3-5,）,mm,菌种外观,菌丝生长量,长满斜面,菌丝体特征,洁白浓密、棉毛状,菌丝体表面,均匀、平整、无角变,菌丝分泌物,无,黑木耳 黄褐色色素,菌落边缘,整齐,杂菌菌落,无,斜面背面外观,培养基不干缩，颜色均匀、无暗斑、无色素,气味,有特有香味，无酸、臭、霉等异味,二、检测内容,项目,要求,备注,菌丝生长状态,粗壮、丰满、均匀,黑木耳菌丝粗细不均，常出现根状分枝,锁装联合,有,双孢蘑菇没锁状联合,杂菌,无,二、检测内容,母种质量要求：,菌丝生长速度：,在,PDA,上，在适温下，长满斜面,10d14d,。,香菇：,241 10d14d,平菇：,252 6d8d,黑木耳：,262 10d15d,双孢蘑菇：,241 15d20d,母种栽培性状：,供种单位，需经试验确证农艺性状和商品性等种性合格后，方可用于扩大繁殖或出售。,产量性状：平菇 生物学效率不低于,10,双孢蘑菇需进行,EST,同工酶类型鉴定，判定与对照相同,生物学效率不低于,3,.,二、检测内容,原种质量要求,容器：,使用,650ml-750ml,，耐,126,高温的无色或近无色的玻璃菌种瓶，,或,850ml,耐,126,高温白色半透明符合,GB9678,卫生规定的塑料菌种瓶；,或,15cm28cm,耐,126,高温符合,GB9688,卫生规定的聚丙烯塑料袋；,棉塞要使用梳棉，不应使用脱脂棉。,也可以使用能满足滤菌和透气要求的无棉塑料盖代替棉塞,二、检测内容,原种质量要求,感官要求：,项目,要求,容器,完整，无损,棉塞或无棉塑料盖,干燥、洁净、松紧适度，能满足透气和滤菌要求,培养基上表面距瓶（袋）口的距离,50mm,5mm,接种量,（,4,6,）瓶（袋），,12 mm,15mm,菌种外观,菌丝生长量,长满容器,菌丝体特征,洁白浓密、生长健旺,培养物表面菌丝体,生长均匀、无角变、无高温抑制线,培养基及菌丝体,紧贴瓶壁、无干缩,培养基表面分泌物,无，允许有少量深黄色至棕黄色水珠,杂菌菌落,无,拮抗现象,无,子实体原基,无,允许有少量胶质、琥珀色颗粒状耳芽,气味,有特有香味，无酸、臭、霉等异味,原基,primordium,尚未分化的原始子实体的组织团,。,项目,要求,备注,菌丝生长状态,粗壮、丰满、均匀,黑木耳菌丝粗细不均，常出现根状分枝,锁装联合,有,双孢蘑菇没锁状联合,杂菌,无,原种质量要求,和母种质量要求相同,微生物学要求：,二、检测内容,原种质量要求：,菌丝生长速度：,在适宜培养基上，在适温（,232,）下，长满容器,35d-50d,。,香菇（,232,）,35d-50d,。,平菇（,252,）,25d-30d,。,黑木耳（,262,）,40d-45d,。,双孢蘑菇（,241,）,45d,。,栽培性状（无），与母种不同,二、检测内容,栽培种质量要求：,容器：,可以使用原种规定使用的容器,；,或,17cm35cm,耐,126,高温符合,GB 9688,卫生规定的聚丙烯塑料袋；,二、检测内容,栽培种质量要求,感官要求：,项目,要求,容器,完整，无损,棉塞或无棉塑料盖,干燥、洁净、松紧适度，能满足透气和滤菌要求,培养基上表面距瓶（袋）口的距离,50mm,5mm,接种量,（,30,50,）瓶（袋）,菌种外观,菌丝生长量,长满容器,菌丝体特征,洁白浓密、生长健旺,培养物表面菌丝体,生长均匀、无角变、无高温抑制线,培养基及菌丝体,紧贴瓶壁、无干缩,培养基表面分泌物,无，允许有少量深黄色至棕黄色水珠,杂菌菌落,无,拮抗现象,无,子实体原基,无,允许有少量浅褐色至黑褐色菊花状或不规则胶质耳芽,气味,有特有香味，无酸、臭、霉等异味,二、检测内容,栽培种质量要求,和母种、原种质量要求相同,微生物学要求：,项目,要求,备注,菌丝生长状态,粗壮、丰满、均匀,黑木耳菌丝粗细不均，常出现根状分枝,锁装联合,有,双孢蘑菇没锁状联合,杂菌,无,二、检测内容,栽培种质量要求：,菌丝生长速度：,在适宜培养基上，在适温（,232,）下，长满容器,40d-50d,。,栽培性状（无），,与母种不同，和原种相同,三、抽样,质检部门的抽样应具有代表性；,母种按品种、培养条件、接种时间分批编号；,原种、栽培种按菌种来源、制种方法和接种时间分批编号。,按批随机抽取被检样品,母种、原种、栽培种抽样量,10,、,5,、,1,抽样数量不得少于,10,支,(,瓶、袋,),超过,100,支,(,瓶、袋,),的，可进行两级抽样,.,四、试验方法,感官检验,微生物学检验,菌丝生长速度,母种农艺性状和商品性状,留样,四、试验方法,感官检验,肉眼观察,必要时使用,5,放大镜,鼻嗅,母种感官检验方法（一）,1.,棉塞或无棉塑料盖检测方法,肉眼观察棉塞的材料、洁净度和干燥与否，手捏棉塞是否松紧适度，是否有弹性,手提棉塞外露部分，棉塞应不松动、不脱落。,2.,培养基灌入量,按常规做培养基斜面的方法目测判断培养基灌入量，应为试管总容积的四分之一至五分之一。,3.,斜面长度,用游标卡尺测量斜面的最上端量起至棉塞的最底部的距离（,mm,）。,母种感官检验（二）,4.,接种块大小（接种量）,在无菌条件下挑出接种块,用游标卡尺测量接种菌丝面的长和宽，用,mmmm,表示，保留整数位,。,5.,菌种外观检测,5.1,菌丝生长量,观察菌丝是否长满整个斜面。,5.2,菌丝体特征,肉眼观察菌丝体的颜色、密集程度，菌丝体是否舒展、旺健及其形态（棉毛状、细羊毛状等）。,母种感官检验（三）,5.3,菌丝体表面,肉眼观察菌丝体是否生长均匀、平整，有无角变现象。,5.4,菌丝分泌物,肉眼观察有无分泌物，如有则记录分泌物的颜色和数量。,5.5,菌落边缘,肉眼观察菌落边缘是否整齐。,5.6,杂菌菌落,用放大镜观察菌丝体颜色和外观形态，根据颜色和形态是否有差异判定是否有杂菌菌落。,母种感官检验（四）,5.7,虫（螨）体,用放大镜观察培养物上有无虫（螨）体。,6.,斜面背面外观,根据培养基是否与试管相脱离判断是否干缩；在充足的光线下，对着光源方向，观察颜色是否均匀，有无色素和暗斑。,7.,气味,在无菌条件下打开棉塞（或无棉塑料盖），闻试管内气味是否正常。,菌种退化在母种阶段的表现,1.,菌落形态不正常，如本来菌落平展的品种表现为菌落紧皱；丝状的气生菌丝变为雪花状；气生菌丝变多或变少甚至没有了；菌丝色泽变化，如多数种和品种在母种斜面上菌丝呈白色，退化了品种常呈现微黄色、浅褐色或其他色泽，或由鲜亮变暗淡；,2.,菌丝倒伏，生长势弱；,3.,长速变慢,过快或过慢都是不正常的；,4.,个体间长速和长相不均一；,5.,色素的出现。多数食用菌菌种在母种阶段不形成色素,如果出现色素,说明品种退化严重。,四、试验方法,微生物学检验,菌丝生长状态和锁状联合,用,1040,的光学显微镜对培养物的,水封片,进行观察，每一检样应观察不少于,50,个视野,。,细菌检验：取少量,疑有细菌污染,的培养物，按无菌操作接种于,(,营养肉汤培养液,)GB/T 4789.28,，,25-28,振荡培养,1d-2d,，观察培养液,是否混浊,。若混浊，则有细菌污染。,霉菌检验：取少量,疑有霉菌污染,的培养物，按无菌操作接种于,(PDA)GB/T 4789.28,，,25-28,培养,5d-7d,，菌落出现白色以外的杂色者，或有异味者为霉菌污染。必要时进行,水封片,进行观察。,菌丝生长状态,取干净载波片，滴,1,滴无菌水，用无菌操作方法挑取少量菌丝涂于水滴中，盖上盖玻片，置于,1040,显微镜下观察菌丝形态，是否粗壮、丰满、均匀，是否有,锁状联合,。,每一检样应检查不少于,50,个视野。,锁状联合,杂菌,细菌检验,根据不同菌种选择适用的方法,1.1,在无菌条件下，挑取少许疑有细菌污染的培养物接种至肉汤培养液中，于,2528,振荡培养,12,天，观察培养液是否浑浊，若浑浊则有细菌污染，澄清透明为未污染细菌。,1.2,在无菌条件下，挑取可疑或有代表性的样品，接种于肉汤培养基斜面或平板，于,2528,振荡培养,12,天，观察培养基斜面是否有细菌菌落长出，有细菌菌落长出者做显微镜检查，确认是细菌，则判定为细菌污染；否则为无细菌污染。,杂菌,霉菌检验,挑取少许可疑的霉菌污染的培养物或有代表性的样品接至,PDA,培养基中，于,2528,培养,4,天，出现其他色泽的菌落或其他形态的菌落或有异味的为霉菌污染物，必要时进行水封片镜检。,四、试验方法,菌丝生长速度,母种：,PDA 24 1,原种和栽培种：规定的培养基,（,24,1,）,计算长满天数。,母种生长速度检测方法,菌种不同,对母种生长速度的测定方法和要求亦不同：,选择,A.1,或,A.2,培养基配方，配制后按菌种生产标准要求分装于试管（,18180 mm,或,20200 mm,）,中，,121,灭菌,30min,，,取出摆成斜面或制备培养基平板（,90,mm,），,冷却，随机抽取,1020,支斜面或,3,个培养基平板置于,282,培养,24,小时，确认灭菌良好后使用。,将待检菌种接种于,PDA,培养基或,CPDA,培养基上，接种块,（,35,）,（,35,）,mm,，,置于斜面中央偏下或培养皿中央，恒温培养箱适宜条件下培养，计算长满斜面的天数。三个重复。,四、试验方法,母种农艺性状和商品性状,将被检母种制成原种。,规定的培养基；,菌棒,45,根,接种后，分三组进行管理,做好栽培记录,与该母种的出发菌株设为对照,黑木耳 含水量,62,2,双孢蘑菇 含水量,68,360kg,，分,3,组，每组,2m,2,双孢蘑菇 酯酶同工酶,母种长满所需时间,总产,原种长满所需时间,单产,菌棒长满所需时间,单菇质量,第一潮产量最高的时间,生物学效率,第二潮产量最高的时间,菇形、质地、色泽,产菇盛期持续的时间,菇盖直径、厚度、柄长、柄直径,四、试验方法,母种农艺性状和商品性状,判定：,以时间计的项目，不得推迟,5d,（含,5d,）,产量显著低于对照的；,子实体形态明显与对照不同或畸形的,四、试验方法,留样,各级菌种均要留样备查,留样数量：,3-5,支（瓶），于,4,6,时间：,香菇：母种、原种,7,个月；栽培种,5,个月,平菇：母种,5,个月、原种,4,个月；栽培种,2,个月,黑木耳：母种、原种,6,个月；栽培种,4,个月,双孢蘑菇：母种,5,个月、原种,4,个月；栽培种,2,个月,五、检验规则,判定规则按照质量要求进行。,全部合格的，为合格菌种；,任何一项不合格，则为不合格。,六、标签、包装、运输、贮存,标签,产品标签,5,要素：产品名称；品种名称；生产单位；接种日期；执行标准,包装标签,7,要素：产品名称；品种名称；厂名、厂址、联系电话；出厂日期；保质期、贮存条件；数量；执行标准,包装储运图示标志,5,要点（,GB/T 191,）,:,小心轻放标志；防水、防潮、防冻标志；防晒、防高温标志；防止倒置标志；防止重压标志。,六、标签、包装、运输、贮存,包装,母种：木盒或纸箱；缓冲的轻质材料填满,原种、栽培种：纸箱；缓冲的轻质材料填满；,8cm,胶带封口；产品合格证和使用说明书（种性、培养基配方及使用范围）,运输,不得与有毒品混装,气温高于,30,，须用,0-20,冷藏车运输,防震、防晒、防尘、防雨淋、防冻、防杂菌污染的措施,贮存,母种,4-6 3,个月,原种,0-10 40d,栽培种，必须尽快使用，,14d,内在温度不超过,25,、洁净、通风、干燥、避光的室内存放。在,1-6,贮存时,45d,参考：农业部微生物肥料和食用菌菌种质量监督检验测试中心 黄晨阳特此感谢！,Thanks for your attention!,Agaricus,bisporus,