大肠菌群计数课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,大肠菌群计数,（,GB/T4789.3-20,10,）,大肠菌群计数,卫生学概念，包括埃希氏菌属，克雷伯氏菌属、肠杆菌属和柠檬酸杆菌属等的细菌,检验比较简单，所以被广泛用做水源的卫生指标和食品加工卫生状况的通用指标,大肠菌群,定义：,一群在,36,条件下培养,2448,小时能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。,第一法,MPN,法,第二法 平板计数法,第三法,Petrifilm,测试片法,大肠菌群计数,大肠菌群计数：,第一法,与原,4789.3,的不同,l,操作步骤不同,原方法,初发酵,EMB,分离培,染色，复发酵,报 告,现方法,LST,初发酵,BGLB,验证,报 告,EMB,分离培养,大肠菌群计数：,第一法,与原,4789.3,的不同,l,初发酵培养基不同,原方法：,乳糖胆盐肉汤,现方法：,月桂基硫酸盐胰蛋白胨（,LST,）肉汤,LST,肉汤 是国际上通用的培养基。与乳糖胆盐肉汤的作用和意义相同，但具有更多的优越性，,LST,中的选择性抑菌剂是月桂基硫酸盐，相对于胆盐稳定性更好些。还有就是,LST,更容易观察。,大肠菌群计数：,第一法,大肠菌群计数：,第一法,大肠菌群计数：,第一法,与原,4789.3,的不同,l,结果报告单位不同,原方法：,MPN/100g(mL),现方法：,MPN/,g(mL,),大肠菌群计数：,第一法,与原,4789.3,的不同,l,给出的,MPN,表不同,l,标准名称不同,大肠菌群计数：,第一法,大肠菌群计数：,第一法,6,操作步骤,6.1,样品的稀释,6.1.1,固体和半固体食品：以无菌操作取,25g,）,样品,放入装有,225,mL,生理盐水的无菌均质杯内,于,8000 r/min,均质,1min,2min,制成,1:10,样品匀液，或放入,225,mL,生理盐水的无菌均质袋中，用均质器拍打,1min,2min,，,制成,1:10,的样品匀液。,6.1.2,液体食品：以无菌吸管吸取样品,25mL,放入装有,225mL,生理盐水的无菌玻璃瓶,(,瓶内预置适当数量的玻璃珠,),中,以,30cm,幅度、于,7s,内振摇,25,次,(,或以机械振荡器振摇,),制成,1:10,的样品匀液。,6.1.3,样品匀液的,pH,值应在,6.5,7.5,之间，必要时分别用,1 mol/L,NaOH,或,1 mol/L,HCl,予以调节。,大肠菌群计数：,第一法,6,操作步骤,6.1,样品的稀释,6.1.4,用,1mL,无菌吸管或移液器吸取,1:10,样品匀液,1mL,，沿管壁缓缓注入装有,9mL,生理盐水的无菌试管中（注意吸管尖端不要触及液面），振摇试管或换用,1,支,1mL,无菌吸管反复吹打,3,5,次，或采用振荡器使其混合均匀，制成,1:100,的样品匀液。,6.1.5,根据对样品污染情况的估计,按上述操作，依次制成系列十倍系列样品匀液。每递增稀释,1,次，换用,1,支,1mL,无菌吸管。从制备样品匀液至样品接种完毕,全过程不得超过,15min,。,大肠菌群计数：,第一法,6,操作步骤,6.2,初发酵实验,对每个样品，选择适宜的三个连续稀释度的样品匀液，液体样品可以包括未经稀释的原液，每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（,LST,）肉汤，每管接种,1mL,（如接种量需要超过,1mL,，则用双料,LST,肉汤）。,361,培养,24h2h,，检查倒管内是否有气泡产生或轻摇试管时是否有密集连续的细小气泡从管底逸出，如未产气则继续培养至,48h2h,。记录在,24h,和,48h,内产气的,LST,肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性；对产气者，则进行复发酵试验。,用直径为,3mm,的接种环从所有,48h2h,内发酵产气的,LST,肉汤管中分别取培养物,1,环，移种于煌绿乳糖胆盐,(BGLB),肉汤管中，置,361,温箱内，培养,48h2h,，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。,大肠菌群计数：,第一法,6,操作步骤,6.3,复发酵实验,大肠菌群计数：,第一法,大肠菌群计数：,第一法,根据大肠菌群阳性管数,查,MPN,检索表，报告每,g(,mL,),样品中大肠菌群的,MPN,值。,经过和标准起草人沟通，此方法标准的单位可以乘以,100,，最终报出,MPN/100g(100mL),。,大肠菌群计数：,第一法,6,操作步骤,6.4,结果报告,1g(mL),检样中最大可能数,（,MPN,）,表,-,420,1100,3,3,3,94,8.7,27,2,1,2,4,100,180,1100,2,3,3,42,4.5,20,1,1,2,2,000,90,460,1,3,3,42,3.7,15,0,1,2,1,000,42,240,0,3,3,42,4.5,20,2,0,2,1,000,90,290,3,2,3,42,3.6,14,1,0,2,430,40,210,2,2,3,38,1.4,9.2,0,0,2,420,37,150,1,2,3,42,4.5,16,0,3,1,420,18,93,0,2,3,42,4.5,15,1,2,1,420,40,160,3,1,3,42,3.6,11,0,2,1,420,37,120,2,1,3,38,3.6,11,1,1,1,200,17,75,1,1,3,20,1.3,7.4,0,1,1,180,9,43,0,1,3,38,3.6,11,2,0,1,180,17,64,2,0,3,18,1.3,7.2,1,0,1,110,8.7,38,1,0,3,18,0.17,3.6,0,0,1,94,4.6,23,0,0,3,38,3.6,9.4,0,3,0,94,8.7,36,1,3,2,18,1.2,6.2,0,2,0,94,8.7,29,0,3,2,18,1.2,6.1,1,1,0,94,8.7,35,2,2,2,11,0.15,3.0,0,1,0,94,8.7,28,1,2,2,9.6,0.15,3.0,1,0,0,42,4.5,21,0,2,2,9.5,-,3.0,0,0,0,高,低,0.001,0.01,0.10,高,低,0.001,0.01,0.10,95%,置信区间,MPN,阳性管数,95%,置信区间,MPN,阳性管数,现国标的,MPN,表与原国标的,MPN,表的不同点：,1,，现表里的数字是有小数点的，而原标准对小数点进行了四舍五入的处理。,2,，现标准的,MPN,表比原标准的,MPN,表要简化一些。原标准,MPN,表有,64,个组合，而现标准,MPN,表只有,40,个组合。,3,，报告单位不同。现报告单位为,MPN/,g(mL,),，而原报告单位是,MPN/100g(100mL),。,第二法 平板计数法,平板计数法以经最后证实为大肠菌群阳性的试管百分比乘以计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每,g(mL,),样品中大肠菌群数。但由于相应的产品标准单位现仍以,MPN/100g(100mL),的单位报出结果，故此方法还不具有实际应用价值。,第三法,Petrifilm,测试片法,Petrifilm,测试片法按照稀释度的检出方法，最低检出结果只能报出,1000 MPN/100g(100mL),故此方法还不具有实际应用价值。,谢 谢,