第11章紫外可见分光光度法.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,10,仪器分析法概述（,1,）,仪器分析法,采用较为特殊或复杂的,仪器设备,，通过测量物质的某些,物理,或,物理化学,性质,参数或变化,来确定其化学组成、成分含量或结构的分析方法,化学反应非必须条件,化学法,使用天平和玻璃器皿，基于化学反应平衡之上的试样分析方法。,仪器分析方法的分类,光学分析法,电化学分析法,色谱分析法,（分离分析方法）,热分析法,其它分析方法（质谱法、中子活化分析等）,联用技术,光学分析法,特性,仪器方法,说明,光发射,发射光谱法、荧光,/,磷光、化学发光,光由待测物产生,光吸收,分光光度,、声光光谱、核磁/电子自旋共振,光与待测物作用后发生变化,光散射,浊度法、拉曼光谱,光折射,折光分析、干涉法,光衍射,X-,射线和电子衍射光谱,光偏转,旋光分析、旋光性色散分析、园二色性光谱,电化学分析法,特性,仪器方法,说明,电位,电位分析,四种电学特性的测量,电荷,电解,/,库仑分析,电流,-,电位,极谱（伏安）分析,电阻,电导分析,仪器分析法的特点,灵敏度高，检测限低，适合微量、痕量、超痕量的成分的测定,（化学法适合常量分析）,选择性好,操作简便，分析速度快，易于实现自动化,相对误差较大,（较化学法准确性低，但在不断提高）,需要比较昂贵的专用仪器,10,仪器分析法概述（,2,）,化学分析,分离：,沉淀、萃取、蒸馏,定性：,直接或通过简单的化学反应,测量待测物,）,的颜色、沸熔点、气味、光学性质（拆射、反射、衍射等）以及在不同溶剂中的溶解特性,定量：,重量法、容量法,仪器分析,分离：,色谱技术和毛细管电泳,定性,或,定量,：,利用物质原子、分子、离子等的特性，如,光吸收和发射、,电导、,电位、质荷比、荧光,结构、形态、状态分析及表征,定量分析,化学分析,容量分析,重量分析,常量组分，准确度高,仪器分析,微量、痕量组分，准确度较化学法差，而且不同方法之间差别较大,仪器分析中的定量方法（,1,）,标准曲线法（最常用的定量方法）,具体做法：,采用相同的处理方式配制一系列已知浓度（,c,1,c,2,c,n,）标准溶液和待测试样（,c,x,），并保证,c,1,c,x,c,n,，在相同的条件下分别测定相应的信号,坐标纸（直接绘出曲线，并在曲线上查得相应数值）,最小二乘法（可获得曲线方程）,软件做图（,origin,）,（兼备上述两者）,例：,吸光度法测定酚（,A=,k,.,w,）,酚含量,w,0.005,0.010,0.020,0.030,0.040,0.050,吸光度,A,0.020,0.046,0.100,0.120,0.140,0.180,自学绘图软件,Origin,仪器分析中的定量方法（,2,）,标准加入法（试样基体比较复杂时采用）,c,x,0.0,0.2,0.0,10,20,30,-10,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2,c,S,仪器分析法,分类,光学分析法,电化学分析法,热分析法,其他分析方法如质谱法等,色谱分析法（分离分析方法）,联用技术,特点,分析方法繁多，原理及可解决的分析问题亦不同，因此必须熟悉各方法的基本原理、仪器结构及方法适用性与特点,总体来看，较化学法选择性好、灵敏度高、检出限低，适合微、痕、超痕量组分的测定，但准确性较差（与方法有关）,不同的信号形式,除定量外，亦有极强的定性及结构、形态和状态分析与表征能力；分离效率高，适于复杂样品的分离分析（色谱法）,仪器分析中的定量方法（,1,）,标准曲线法,（最常用的定量方法）,具体做法：,采用相同的,处理方式,配制一系列已知浓度（,c,1,c,2,c,n,）标准溶液和待测试样（,c,x,），并保证,c,1,c,x,c,n,，在相同的条件下分别测定相应的信号,S,1,、,S,2,S,n,（通常,3,、,5,、,7,个点）,数据处理：,作图软件给出图和具体方程式（根据方程求出试样含量）,几点说明：,通常应强制拟合曲线通过“零点”,是否可用单标求出,k,？,标准曲线法的缺点！,有时也不过零点,准确度要求不高时可以，但要求标准试样与待测液浓度相近,样品组成复杂时，基体影响较大,仪器分析中的定量方法（,2,）,标准曲线法,（试样基体复杂时使用）,具体做法：,将一系列已知量的待测物分别加入到几等份样品中，配制成浓度为（,c,x,+0,）、（,c,x,+c,1,）、（,c,x,+c,2,）、（,c,x,+c,3,）,，且具有,相同基体,组成的标准系列，然后在,相同条件,测得相应信号,S,0,、,S,1,、,S,2,。以浓度,c,与信号作图，再将直线外推至与浓度轴相交，即可求得试样中待测物质的浓度,c,x,。,不足：,麻烦，适合少量试样，要求,不高时，可采用单点加入法,10,仪器分析法概述（,3,）,分析仪器性能及表征,性能,表征,分析对象,精密度,标准偏差、相对标准偏差,误差,绝对误差、相对误差,灵敏度,校正灵敏度、分析灵敏度,检测限,空白+3倍空白标准偏差,线性范围,可以分析的浓度范围,选择性,选择性系数,其它原则：,分析速度；分析难度和方便性；对操作者的技能要求；仪器维护及实用性；分析测试费用,灵敏度（,1,）,待测组分浓度（或量）改变时所引起仪器信号的改变，反映了仪器或方法识别微小浓度或含量变化的能力，该值越大，仪器或方法的灵敏度越高。,International Union of Pure&Applied Chemists，,即,IUPAC,推荐使用,“校正灵敏度”,或者,“校正曲线斜率”,作为衡量灵敏度高低的标准。,仪器和方法的灵敏度描述,0,10,20,30,40,50,60,0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,S,c,S,2,=k,2,c+S,blank-2,S,1,=k,1,c+S,blank-1,k,1,，,k,2,分别为两条校正曲线的斜率，即灵敏度。,但未考虑测定重现性影响！,信号的组成,本底信号：,没有试样时，仪器所产生的信号,不可以消除,，但是可以通过仪器的改善或适当的数据处理而减小，影响检测限的主要因素之一,空白信号：,当试样中无待测组分时，仪器所产生的信号。,理论上,可以通过选择适当的空白试剂而进行校准,当样品组成复杂，该值难以消除时，标准曲线法定量便会产生较大误差,检出限（,Detection,limit，DL,）,在已知置信水平，可以检测到的待测物的最小质量或浓度。它和分析信号（,Singnal,）,空白信号的波动（噪音，,Noise）,有关，或者说与信噪比（,S/N）,有关。,s,b,测定次数，,n,S,如图：,只有当有用的信号大于噪音信号时，仪器才有可能识别有用信号。,检出限的计算（,1,）,测定空白样品（或浓度接近空白值）20-30次，求其平均值,S,b,及其标准偏差,s,b,，,则可分辨的最小信号,通过校正曲线的斜率,k，,将最小待测物信号,S,DL,转化为浓度值,C,DL,，,即,当置信度为95%时，,K=3,检出限的计算（,2,）,例,10-2,：以,0.0500 mg,L,-1,的,Co,标准液（浓度接近空白值），在石墨炉原子吸收分光光度计上，每次以,5.00,mL,与去离子水交替连续测定，共测,10,次，所得数据如下表，试计算该原子吸收分光光度计对,Co,的检出限。,测定次数,1,2,3,4,5,吸光度,A,0.165,0.170,0.166,0.165,0.168,测定次数,6,7,8,9,10,吸光度,A,0.167,0.168,0.166,0.170,0.167,解：,检出限体现了分析方法可能达到的最小检测浓度，但实际测定实际测定通常以,10,倍噪音偏差所对应的浓度作为测量时的最低浓度，称为定量低限,信噪比（,S/N,）,测定次数，,n,S,线性范围（,linear range,）,动态范围,C,DL,浓度，,c,响,应,信,号,S,第十一章 紫外-可见分光光度法,U,ltra,v,iolet and,Vis,ible,Spectrophotometry,光学分析法概述（,1,）,光学分析法,根据电磁辐射与物质,相互作用,后,产生,的辐射信号或,发生,的变化，或根据,物质发射,的电磁辐射来测定物质,性质、含量和结构,的一类分析方法，是现代分析化学的重要组成部分。,光学分析法概述（,2,）,电磁辐射,一种以极大的速度通过空间，不要任何物质作为传播媒介的能量（,光,）。,具有波动性和微粒性,光学分析法概述（,3,）,光学分析法分类,非光谱法：,物质与电磁辐射的作用不涉及内部能级的跃迁，但辐射的某些性质：折射、散射、偏振等性质发生改变，如,折射法，浊度法，旋光法,光谱法：,基于物质与电磁辐射作用时，由于,物质内部量子化的能级,之间发生跃迁产生的发射、吸收和散射现象而进行分析的方法,光学分析法概述（,4,）,光谱法的产生与分类,发射光谱法,吸收光谱法,荧光光谱法,作用物质可以为：,原子,和,分子,光学分析法概述（,5,）,光谱：,按照波长顺序排列的电磁辐射或把一种复合光按波长顺序展开而呈现的光学现象（,波长、强度,）,按,波长及测定,方法划分,按照,光谱外形,划分,按照,电磁辐射,的本质划分,按照,能量传递形式,划分,按波长及测定方法划分,表1 电磁波的波长范围,波谱区,射线,射线,紫外线,可见光,红外线,无线电波,波长,nm,*,*,n *,*,n *,非键轨道,成键轨道,成键轨道,反键轨道,反键轨道,(,nm),11-2-2,有机化和物的,UV-,Vis,光谱（,3,）,*,跃迁（饱和烃类）,饱和烃类,max,（nm,）,CH,4,125（,C-H）,CH,3,-CH,3,135（,C-C）,CH,3,-CH,2,-CH,3,135（,C-C）,CH,2,-CH,2,CH,2,190,远,UV,区（真空），难测定且无有用信息！,11-2-2,有机化和物的,UV-,Vis,光谱（,4,）,n,*,跃迁（含杂原子）,化合物,max,/nm,化合物,max,/nm,H,2,O,167,1480,CH,3,OCH,3,184,2520,CH,3,OH,183,150,CH,3,NH,2,215,600,CH,3,Cl,173,200,(,CH,3,),2,NH,220,100,CH,3,Br,204,200,(,CH,3,),3,N,227,900,CH,3,I,258,365,大多数在近紫外区无明显吸收，常作溶剂,11-2-2,有机化和物的,UV-,Vis,光谱（,5,）,*,跃迁（不饱和烃类，,K,带）,化合物,max,/nm,CH,2,CH,2,175,14000,CH,CH,173,6000,可通过共轭效应使,max,增大,11-2-2,有机化和物的,UV-,Vis,光谱（,6,）,n,*,跃迁,（含不饱和杂原子，,R,带）,化合物,max,/nm,备注,CH,3,COOH,204,41,在,EtOH,中,CH,3,CONH,2,214,60,在,H,2,O,中,CH,3,NNCH,3,339,5,在,EtOH,中,CH,3,NO,2,280,22,在异辛烷中,CH,3,COCH,3,186,280,1000(,n,*),16 (,n,*),饱和醛酮,280,300,苯吸收带（溶剂：异辛烷）,E,带（,I，E,1,）,E,带（,K，E,2,）,精细结构,B,带（,III）,I,带,II,带,III,带,E,带,K,带,B,带,E,1,带,E,2,带,B,带,180,204,255,6.0,x10,4,8.0,x10,3,2.0,x10,2,11-2-2,有机化和物的,UV-,Vis,光谱（,7,）,荷移光谱,（分子内氧化还原）,hv,D,A,D,A,-,D:e,给予体,A:e,接受体,谱带宽；吸收强度大,10,4,；定量,11-2-3,无机化和物的,UV-,Vis,光谱（,1,）,荷移光谱：,与有机物类似，电子从给体向与受体相联系的轨道上跃迁，发生在近紫外线区与可见光区之间,11-2-3,无机化和物的,UV-,Vis,光谱（,2,）,配位体场跃迁（,d,d,*,f,f*,）,过渡元素的,d,或,f,轨道为简并轨道（,Degeneration orbit），,当与配位体配合时，轨道简并解除，,d,或,f,轨道发生能级分裂，如果轨道未充满，则低能量轨道上的电子吸收外来能量时，将会跃迁到高能量的,d,或,f,轨道，从而产生吸收光谱，研究配合物结构及其键合理论。,无配场,八面体场,四面体场,平面四面形场,d,轨道电子云分布及在配场下的分裂示意图,11-2-4 UV-,Vis,中常用术语（,1,）,生色团,含,非键或,键,电子，能吸收外来辐射引发,n-,*,和,-,*,跃迁,的结构单元称为生色团（如：,-C=C-,、,-C=N,、,-C=O,等）,助色团,含有孤对电子，可使生色团吸收峰向长波方向移动并提高吸收强度的一些官能团，称之为助色团。,FCH,3,Cl,BrOHOCH,3,NH,2,NHCH,3,N(CH,3,),2,NHC,6,H,5,O,-,化合物,CH,3,Cl,CH,3,Br,CH,3,I,max,/nm,172,204,258,11-2-4 UV-,Vis,中常用术语（,2,）,末端吸收,11-2-5,影响,UV-,Vis,光谱的因素,共轭效应,空间效应,pH,的影响,溶剂极性,共轭效应（,1,）,稠环芳烃的,UV-,Vis,图谱,共轭效应（,2,）,共轭效应（,3,）,化合物,乙烯,丁二烯,己三烯,辛四烯,结构式,CH,2,=,CH,2,max,185,217,258,296,1.010,4,2.110,4,3.510,4,5.210,4,E,E,E,E,4,*,5,*,6,*,3,2,1,3,2,1,4,5,*,6,*,7,*,8,*,3,*,4,*,2,1,1,2,*,共轭效应（,4,）,E,n,*,n *,290 nm,*,210,nm,n,*,4,1,n *,321 nm,*,217,nm,2,*,3,脂肪醛的,*,n *,2-丁烯醛的,2,*,3,n *,3,空间效应（,1,）,A:H D:CH,2,CH,2,CH,3,B:CH,3,E:CH,2,CH,2,CH,2,CH,3,C:CH,2,CH,3,F:2,4,6-,三丁基,空间效应（,2,）,pH,的影响,苯胺,pK,b,=9.3,介质,K,B,水,230,280,酸,203,254,苯酚,pK,a,=9.95,介质,K,B,水,210.5,270,碱,235,287,A,200,250,300,230,280,中性,酸性,苯胺,UV,吸收光谱图,酸碱性导致物质结构发生变化,可见光区物质吸光与颜色的关系,互补,/nm,颜色,互补光,400-450,紫,黄绿,450-480,蓝,黄,480-490,绿蓝,橙,490-500,蓝绿,红,500-560,绿,红紫,560-580,黄绿,紫,580-610,黄,蓝,610-650,橙,绿蓝,650-760,红,蓝绿,溶剂的影响（,1,）,1.蒸气状态,2.环己烷中,3.水中,极性增大，吸收峰振动精细结构消失,溶剂的影响（,2,）,溶剂极性对,n,*和*跃迁能量的影响,溶剂极性增大,，,n *,吸收,蓝移,例：,丙酮,溶剂,己烷,氯仿,二氧六环,乙醇,水,max,(nm,),280,278,277,270,2652,水,乙醇,己烷,A,溶剂极性增大，,*,吸收,红移,例：,异亚丙基丙酮,溶剂,正己烷,氯仿,甲醇,水,n *,329,315,309,305,*,230,238,237,243,11-3,紫外-可见分光光度计（1）,基本部件,光源,单色器,吸收池,检测系统,稳压电源,光电管、光电倍增管,二极管阵列、,CCD,石英：紫外，可见,玻璃：可见,棱镜光栅,紫外：氘灯,可见：碘钨灯,紫外可见：氙灯,?,光源,氘灯：,160,375 nm,钨灯：,320-2500,nm,氙灯：,250-700 nm,氘灯示意图,单色器（,1,）,光栅法线,入射光,反射光,：,入射角,：,衍射角,d：,光栅常数,n：,光谱级数,：,闪耀角,单色器（,2,）,S=DW,D,：线色散率倒数,W,：狭缝宽度,S,：“单色光”的带宽,检测器,光电转换器：,将光辐射转化为可以测量的电信号的器件,单道检测器：,光电管或光电倍增管,多道检测器：,二极管阵列（线检测器）或,CCD,面检测器,光电倍增管（,PMT）,优点：,高灵敏度；响应快；适于弱光测定，甚至对单一光子均可响应,缺点：,对外加电压变化极为敏感，必须严格控制电压；热发射强，暗电流大；不适合在温度波动较大或高温下工作，不得置于强光（如日光）下，否则可永久损坏,PMT！,11-3,紫外-可见分光光度计（,2,）,扫描型,非扫描型,722型分光光度计,单光束,非扫描型,Varian Cary 1E,紫外可见分光光度计,可消除光源不稳定误差以及样品池的差异,11-3,紫外-可见分光光度计（,3,）,其它类型的,UV-,Vis,分光光度计,多通道仪器,（,Multichannel,Instruments）,光电二极管阵列,photodiode arrays（,PDAs,）,电荷耦合器件（,CCD）,纤维光度计,HP 8452A,多通道二极管阵列分光光度计,纤维光度计,吸光度的测量（1）,吸光度的测量（,2,）,单光束仪器：,选用光学性质相同、厚度相等的吸收池分别盛入参比溶液和待侧溶液，调整仪器使透过参比溶液的透光率为100%，以此光强作为入射光,I,0,，,然后进行测定。,双光束仪器：,参比池与样品池同时放入，直接测定。,（,baseline）,常用溶剂的光学透明区,CHCl,3,245,乙醚,210,苯,280,环己烷,210,己烷,210,CCl,4,265,正丁醇,210,庚烷,210,DMF,270,二氯甲烷,235,甲醇,215,丙酮,330,二氧六环,235,异辛烷,210,吡啶,303,乙醇,210,水,210，250,300,硝基甲烷,380,大于以上波长时使用,对溶剂的要求：,1.低极性 2.溶解被测物,3.稳定 4.在样品的吸收光谱区无明显吸收,11-3,紫外-可见分光光度计（,4,）,校正,当光度计使用一段时间后其波长和吸光度将出现漂移，因此需要对其进行校正。,波长标度校正：,光源法校正：,氘灯（486.00,nm；656.10 nm）,使用,镨-钕玻璃,（可见光区）和,钬玻璃,（紫外光区）进行校正,吸光度标度校正：,采用,K,2,Cr,2,O,4,标准液校正（在25,o,C,时，于不同波长处测定0.04000,g/L,的,KOH,溶液（0.05,mol/L）,的吸光度,A，,调整光度计使其,A,与标准值对应。,11-4,定量分析,11-4-1,定量依据,11-4-2,定量方法,11-4-3,显色反应,11-4-4,定量分析条件的选择,11-4-5,其他定量方法,11-4-1,定量依据（,1,）,Lambert-Beer,定律,A,：无量纲,：,Lmol,-1,cm,-1,l,：,cm,c,：,molL,-1,存在多个吸光物质时：,吸光度的加和性,与,L-B,定理相关的几个术语,术语、符号,定义,其它表示方法,辐射能,P、P,0,1,s,内照在1,cm,2,面积上的能量,光强,I、I,0,吸光度,A,log(P,0,/P),或,log(I,0,/I),光密度,D or O.D,消光度,E,透过率,T,P/P,0,或,logI/I,0,透射比、透光度,光程,l,待测物液层厚度,b、d,吸光系数,a,A/,bc（c,:g/L）,吸收系数,摩尔吸光系数,A/,bc（c,:mol/L）,摩尔吸收系数,比吸光系数,b=1cm and c=1%(w/w),比消光系数,吸光度,A、,透射比,T,与浓度,c,的关系,T,：（,0,1,）,A,：（,0,）,摩尔吸光系数,物理意义：,当吸光物质浓度为1,molL,-1,，,液池厚1,cm,时，,一定波长的光,通过溶液时的吸光度值。,是物质本性决定的，表示灵敏度,510,5,（,高）,：,Lmol,-1,cm,-1,l,：,cm,c,：,molL,-1,Lambert-Beer,定律的适用性,适用条件：,待测物为均一的稀溶液、气体等，无溶质、溶剂及悬浊物引起的散射,入射光为单色平行光,局限性：,样品吸光度,A,与光程,l,总是成正比。但当,l,一定时，,A,与,c,并不总是成正比，即偏离,L-B,定律！这种偏离由,样品性质,和,仪器,决定。,样品性质影响,待测物高浓度-吸收质点间隔变小,质点间相互作用,对特定辐射的吸收能力发生变化-,变化；,试液中各,组份的相互作用,，如缔合、离解、光化反应、异构化、配体数目改变等，会引起待测组份吸收曲线的变化,溶剂,的影响：对待测物生色团吸收峰强度及位置产生影响,胶体、乳状液或悬浮液对光的,散射,损失。,待测样品在测定波长下发,荧光或磷光,在高浓度的电解质溶液中，,折射指数,发生变化,亚甲蓝阳离子水溶液的吸收光谱,x10,4,/nm,a.,6.3610,-6,mol/L,b.,1.2710,-4,mol/L,c.,5.9710,-4,mol/L,亚甲蓝阳离子,单体,max,=,660 nm,二聚体,max,=,610 nm,仪器因素（稳定性和非单色光,）,假设,入射光由测量波长,x,和干扰,i,波长组成，据,Beer,定律，溶液对在,x,和,i,的光的吸光度分别为：,当,x,=,i,时，或者说当,x,=,i,时，有,A=,x,bc,符合,L-B,定律；,当,x,i,时，或者说当,x,i,时，则吸光度与浓度是非线性的。二者差别 越大，则偏离,L-B,越大；当,x,i,，,测得的吸光度比在“单色光”,x,处测得的低，产生负偏离；反之，当,x,60 nm,）,等。,提高灵敏度和选择性,例：,浅黄,无色,血红,显色剂种类,无机,（,SCN,-,；MoO,4,2-,；H,2,O,2,）,有机,OO,型：,磺基水杨酸,NN,型：,ON,型,：,PAR,S,型,:,双硫腙,OH,COOH,SO,3,H,N,N,N,N,N,O,H,OH,N,H,N,H,N,S,N,11-4-3,显色反应（,2,）,蛋白质总量的测定,直接测定：,max,=280 nm,（存在核酸等干扰，灵敏度低）,显色反应法：,双缩脲法、,Lowry,法、,考马氏亮蓝法,、溴甲酚绿和溴甲酚紫法等,磷酸介质中，与蛋白结合前后,max,从,465 nm,红移至,595 nm,11-4-1,定量分析条件的选择（,1,）,仪器测量条件,显色反应条件,参比溶液的选择,干扰及消除方法,提高灵敏度及选择性的方法,仪器测量条件（1）,100,80,60,40,20,0,T%,c,1,c,2,c,3,T,T,T,-,透光率读数误差,c,E,r,=,10,8,6,4,2,0,20,40,60,80,0.7,0.4,0.2,0.1,A,T%,E,r,0.2,2%,A=0.434,仪器测量条件（,2,）,当,T36.8，A0.434，,E,r,最小,在实际工作中，应控制,T,在10,%,70%,A,在0.15,1.0,选择合适波长,（,max,）,狭缝宽度（,？,）,显色反应条件（1）,显色剂用量,配位数与显色剂用量有关；在形成逐级配合物，其用量更要严格控制。通常是固定其它反应条件：,c,M,和,pH,等，改变,c,R,来获得最佳浓度范围,显色反应条件（,2,）,显色反应,pH,配位数和水解等与,pH,有关，通过实验确定,pH,1,pHpH,2,显色反应条件（,3,）,确定显色温度及显色时间,T,1,(,C),T,2,(,C),t,1,(,min),t,2,(,min),T(,C),t(,min,),如存在其它影响条件，也应采用相同得实验方法确定最适条件。,参比溶液的选择,溶剂参比：,试样组成简单、共存组份少（基体干扰少）、显色剂不吸收时，直接采用溶剂（多为蒸馏水）为参比；,试剂参比：,当显色剂或其它试剂在测定波长处有吸收时，采用试剂作参比（不加待测物）；,试样参比：,如试样基体在测定波长处有吸收，但不与显色剂反应时，可以试样作参比（不能加显色剂）。,平行操作溶液参比：,用不含被测组分的试样，在相同条件下与被测组分进行同样的处理，然后做为参比,。,例：,采用,邻二氮菲显色法测定水中微量铁的过程是：首先加入醋酸缓冲溶液保持,pH,在,4-5,之间，然后加入盐酸羟胺将水样中的三价铁还原为二价铁，再加入邻二氮菲显色，请问参比溶液应该如何选取,?,干扰及消除方法（1）,选择合适的测定波长,钍-偶氮砷,III,钴-亚硝基红,干扰及消除方法（,2,）,掩蔽法（测,Co,2+,）,调节,pH（,测定,Fe,3+,）,Co,2+,Fe,3+,Co,2+,FeF,6,3-,Co(SCN),2,(,蓝),（,1,）,NaF,SCN,-,Co,2+,Fe,2+,Sn,4+,（2）,Sn,2+,SCN,-,Co(SCN),2,(,蓝),Fe,3+,Cu,2+,FeSSal,（,紫红）,Cu,2+,pH 2.5,Ssal,干扰及消除方法（,3,）,利用生成络合物稳定性的不同（,Co,2+,的测定）,Co,2+,Zn,2+,Ni,2+,Fe,2+,CoR,ZnR,NiR,FeR,CoR,Zn,2+,Ni,2+,Fe,2+,钴试剂,R,H,+,分离,（,CO,2+,、Ni,2+,离子交换树脂）,双波长或导数光谱法,提高灵敏度及选择性的方法,合成新的高灵敏度有机显色剂,采用分离富集和测定相结合,采用三元（多元）配合物显色体系,分子截面积增大；电子跃迁几率增大,主要类型：,三元离子缔合物、三元混配配合物、三元胶束（增溶）配合物,11-4-5,其他定量分析方法,示差光度法,光度滴定法,多组分的测定,双波长分光光度法,导数分光光度法,示差分光光度法（,1,）,当试样中组份的浓度,（,c,x,）,过大时，则,A,值很大，会产生读数误差。此时若以一浓度,（,c,s,）,略小于试样组份浓度作参比，则有：,示差法标尺扩展原理：,普通法：,c,s,的,T=10%；c,x,的,T=5%,示差法：,c,s,做参比，调,T=100%,c,x,的,T=50%；,标尺扩展10倍,高含量组分测定,示差分光光度法（,2,）,准确度提高的原因：,使读数落入测量误差最小区域（可稀释解决）,相对误差,dc/(,c+c,s,),很小，从而结果可靠,注意事项：,光源强度足够强,可以使用于低浓度或中浓度组分,示差分光光度法例题,例：,某有色溶液以试剂空白作参比时，选用,1.0 cm,吸收池，测得,T=8.0%,。已知,=1.1,10,4,，若用示差法测定上述溶液，应选择多大浓度的溶液作参比才能读数误差最小？,解：,光度滴定法（,1,）,适用于：,1.可以滴定反应不完全体系,2.可以测定溶解度小的弱酸碱,3.被测物本身有颜色或者被测溶液底色较深,V,1,V,2,V(NaOH,)/ml,间硝基酚,对硝基酚,NaOH,滴定,对硝基酚,pK,a,=7.15,间硝基酚,pK,a,=8.39,pK,a,=1.24,典型的光度滴定曲线,V,sp,V,sp,V,sp,V,sp,被测体系必须有吸光度变化,吸光度必须进行体积校正,多组分测定,a.,在,1,处测组分,x，,在,2,处测组分,y,b.,在,1,处测组分,x,c.,x、y,组分不能直接测定,1,处：,2,处：,由,x，y,标液在,1,，,2,处分别测得,导数光谱法（,1,）,A,A/,原始谱图,一阶导数图,导数谱峰变窄，分辨能力提高（重叠谱可获得分离）,背景若变化平缓（如浑浊、悬浮造成的散射背景），导数谱为,0,导数光谱法（,2,）,dA/d,-c,的关系,特征性变强,灵敏度增大,紫外导数光谱检测法,肝中茚满二酮类抗凝血杀鼠剂的固相萃取,方法：,肝匀浆用乙腈浸提，浸提液用6的,HClO,4,稀释，然后用,GDX100,大孔树脂萃取，用,CH,2,Cl,2,5,mL,洗脱杀鼠剂，40,C,挥干，剩余物用0.1,molL,-1,NaOH,4,mL,溶解后，紫外导数光谱测定。,a.,空白肝普通光谱,b.2.5 mg/L,敌鼠溶液的普通光谱,c.,空白肝二阶导数光谱,d.2.5 mg/L,敌鼠溶液的二阶导数光谱,A,0.0,c,d,a,b,D,340,/,nm,-0.2,本章作业,p213,思考题,1,、,5,p214,思考题,8,、,11,p214-215,习题：,1,、,3,、,6,（用,origin,绘图，打印后贴在作业本上）、,8,