实验四血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳概论.ppt

实验四实验四 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳n目的1、掌握电泳的基本原理2、掌握电泳的基本操作原理n醋酸纤维薄膜电泳(CAME)是以醋酸纤维薄膜(CAM)作支持物的一种区带电泳技术，将血清样品点样于醋纤膜上，在pH86的缓冲液中电泳时，血清蛋白质均带负电荷移向正极。由于血清中各蛋白组分等电点不同而致表面净电荷量不等，加之分子大小和形状各异，因而电泳迁移率不同，彼此得以分离。电泳后，CAM经染色和漂洗，可清晰呈现清蛋白、1、2、球蛋白5条区带。器材n 1醋酸纤维薄膜(8X2mm)2点样器 3染色皿，漂洗器，镊子 4电泳仪：直流电源整流器，水平电泳槽试剂1巴比妥缓冲液(pH8.6 I=0.06)：取巴比妥钠12.76g，巴比妥1.66g，加蒸馏水加热溶解后稀释至1升。2氨基黑10B染色液：取氨基黑10B05g，甲醇50ml，冰醋酸l0ml，加水至100ml。3漂洗液：95乙醇45ml、冰醋酸5ml、蒸馏水50mlTHANK YOUSUCCESS2024/4/20 周六5可编辑操作-准备l醋纤膜的准备：距离边缘1.5cm用铅笔作好标记，粗糙面用于点样，然后将薄膜放进缓冲液中，自然浸润，约20分钟。2电泳槽的准备：水平放置，将缓冲液注入电泳槽中，两边的缓冲液高度要一致，架上滤纸桥，盖上电泳槽盖。3点样：将充分浸透(指膜上没有白色斑痕)的薄膜取出，用滤纸吸去膜上过多的缓冲液，载玻片蘸取血清(约10-20p1)，垂直印在CAM粗糙面的加样线上，待样品全部渗入薄膜内后，移开点样器。操作-电泳4加样后，将薄膜条架于支架两端，点样面朝下，点样侧置于负极端。薄膜应平直无弯曲，加上槽盖平衡5分钟后通电电泳。5正确连接电泳槽与电泳仪对应的正负极，开启电源通电。电压10-15V/cm膜总宽。电泳4060分钟，泳动距离约达3.54.0cm时即可断电。6染色:电泳完毕后断电，用镊子取出薄膜条投入染液5-10分钟，染色过程中不时轻轻晃动染色皿，使染色充分。7.漂洗:从染液中取出薄膜条并尽量沥去染液，投入漂洗皿中反复漂洗，直至背景漂净为止。此时清晰可见5条色带，待干。实验报告将薄膜条粘贴于实验报告.完成实验报告.(本实验结束后,电泳槽内的缓冲液不要倒掉;染色液需要回收)本周值日:第四组THANK YOUSUCCESS2024/4/20 周六9可编辑