核医学 放射自显影术(ARG).ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,放射自显影术（,ARG,）,一、发展史,1867,年,Nieple,de,st,victer,发展铀盐能使胶片感光，但引出错误的结论,1896,年,H.Becqueral,证实上述是辐射引起。,1898,年,Bq,.,和居里夫妇 发现,210,po,，,226,Ra,1924,年,Lacassagae,首次研究铀在生物体内分布,19391945,各种记录粒子径迹的专用乳胶,1946,年,Belanger,和,lebland,更好的液体乳胶，,ARG,分辨力大为提高。,1950,年,Pelc,揭膜乳胶,1956,年超微结构及电镜,ARG,ARG,的特点：,定位准确 敏感度高 可定量测量，还可做形态定量分析 不需复杂设备，应用广泛。,ARG,的一般过程：,引入示踪剂制备标本制备,ARG,曝光照像处理标本染色分析,二、感光材料,组成：银盐,+,明胶：,分类：,原子核乳胶：核乳胶，干板，揭膜,氚片,X,片,电影正片及幻灯片,各类材料的性质和应用,1,、乳胶及制品,a,、,液体核乳胶：粘稠、,10,以下呈胶冻状，,40,温溶，极限,50,，出厂本底,3,个银粒,/1000m,应用：核,4,所有带电粒子,核,2,a,粒子,HW,34,电镜,ARG,b,、,干板：宏观及光镜,ARG,c,、,揭膜乳胶：光镜定量,ARG,d,、,国外产品：,美,EastmanKodak NTE,英,Kodak,英,Ilford,L-4,比利时,Gevaert,Nuc-307,银粒,0.07-0.4 Exp,-6,M,按敏感度分为：,0,型：,a,粒子,2,型：,3,H,125,I,5,型：用于低电离作用的,粒子径迹,ARG,2,、电影正片,or,幻灯片：,粒径,1m,，,单面涂乳胶，厚,15m,，,外加保护层，除,3,H,以外的各种核素宏观,ARG,3,、,X,光片：粒径,2.5m,，,敏感性强，但分辨力低，宏观,ARG,，,低能核素不适应。,4,、氚片：进口,LKB,产品，国产也有了，粒径,1m,，,暗室安全光相当耐受，宏观,3,H ARG,5,、,彩色乳胶片干板：彩显,ARG,三、,ARG,原理,原理：造成核乳胶的点阵发生缺陷（形状不一、颗粒不完整、缺一个或一对离子等）也叫“敏化中心”。,当射线作用乳胶时，电离的电子向“敏化中心”移动，.较多时或形成静电膜，吸引,Ag+,移动。虽量少1/100亿，但有巨大催化作用，能使溴化银结晶还原成金属银粒。当显影时两者被显出的速度不同，很容易区分。,1,、潜影形成：,2,、潜影消退：,3,、显影及显影剂：,最常用的显影剂：,D-196,和,D-19,1,）,米吐尔,（硫酸甲基对氨基苯酸）,主份，强还原剂,2,）亚硫酸钠：保护剂，能中和还原剂的氧化物，延长显影效力，还可溶解部分银粒，减少其相互结合而导致粒变粗,3,）海德尔（以苯二酚）：强还原剂，但与米吐尔不同。但与米吐尔不同。它还原力低，影像出现缓慢，可使影像密度增加,4,）碳酸钠：促进剂，增加显影,5,）溴化钾：抑制剂，抑制未感光的银盐，防止溴折出而增加灰雾，从而增加显象的反差，使力象更清晰,影响显影的因素：,（,1,）显影时间,（,2,）显影温度,（,3,）显影液的搅动,（,4,）显影液的效力,4,、定影：,海波,（硫代硫酸钠）,溶去未形成潜影的银晶体,亚硫酸钠：保护剂，能与酸形成亚硫酸氢根离子，从而抑制海波被酸分解。,醋酸：停显剂：终止显影液继续使用。,钾矾：坚膜剂，防止乳胶在定影和水洗过程中因膨胀而造成脱落，防止操作中的擦伤,or,划痕。,5,、,水洗及干燥：,洗去杂质等，防止析出硫磺，它与空气中水份氧化为硫酸，影象变黄。,干燥：人工电吹风，,or,自然干燥，防空气灰法沾染,。,四、射线与乳胶的相互作用,1,、,粒子：质量大，高,LET,，,穿透力弱，但电离密度大，直线传播，粒子径迹粗短而致密，不需灵敏度高的乳胶,2,、,粒子：质量轻，射程较,粒子长些，穿行路径易改变，不一定是直线传播，径迹为不规则曲线，射程仅为乳胶表面的几个颗粒层。,3,、,射线：是一种电磁辐射，本身不带电，不会引起电离，但它能与核,or,核外电子碰撞损失能量而产生次级带电粒子；它穿透力强，在靶物质中损失的能量少，故很难留下清晰的径迹，但对低能,线可形成小点状径迹。它产生的次级带电离子常使乳胶本底增加。,4,、,EC,、,IT,：,在电子俘获和内转换的衰变中产生的,、,X,线不被乳胶记录，但俄歇电子和内转换电子与,粒子的性质相同，可使乳胶感光。,纯,衰变的核素：,3,H,、,14,C,、,45,Ca,、,35,S,、,32,P,r,：,131,I,EC,：,125,I,IT,：,99m,Tc,径迹,ARG,：,乳胶厚度超过射线粒子的射程，记录到的是粒子的全部径迹，物理学研究范畴。,银粒密度,ARG,：,薄的乳胶层，只要求留下径迹超始部分的银粒。,ARG,常用核素，能量及射程,P270,表,146,（参考书 夏宗勤主编实验核医学与核药学）,五、,ARG,的分辨力、效率、本底及示踪,1,、分辨力：定义，区别示踪物在组织中准确位置的能力。,区分两个邻近结构（放射源）,表示方法：半距离,HD,半半径,HR,它是反映影象散射情况的常用指标。,应注意：,HD,、,HR,指反映颗粒的散射情况，并不说明,ARG,所能分辨的最小距离或源的大小。,HD,、,HR,越小，分辨力越高,3,H,光镜,ARG HD,在,0.30.4m,电镜,ARG HD,在,80180nm,影响分辨力的因素：,a,、,银粒的大小,b,、,乳胶厚度,c,、,标本与乳胶间距,d,、,射线能量,e,、,曝光时间,f,、,显影时间,g,、,标本厚度,h,、,本底,2,、效率：,定义：曝光,t,内，示踪剂每,100,次衰变所造成的显影银颗粒数目,。,表示方法：百分比,/100m,2,影响效率的因素,a,、,LET f,、,曝光时间,b,、,标本厚度,g,、,源乳距,c,、,乳胶厚度,h,、,显影条件,d,、,银粒大小,i,、,曝光时间太长时,e,、,乳胶敏感度,3,、本底：没有放射性时的银颗粒,本底增高的因素：,a,、,红灯过亮,b,、,外环境辐射,c,、,显影时间过长,d,、,乳胶受到压力或张力的作用,e,、,标本中有还原物,f,、,乳胶保存过久,4,、示踪剂用量与曝光时间,一般原则：辐射强时，曝光时间可缩短，而射线弱时，曝光时间相应延长。,影响因素：,a,、,核素的性质,b,、,核素引入的途径,c,、,示踪剂剂型,d,、,核素在体内的分布和蓄积状况,e,、,标本制备时间长时，核素易丢失,f,、,感光材料的灵敏度,目前最常用的是：实验确定曝光法。,六、,ARG,的各种方法,1,、宏观,ARG,：,接触法：适于磨片，动物整体切片植物片,2,、光镜,ARG,：,用于非扩散性示踪剂（石蜡切片）,浸膜法：从乳胶中提出来,裱贴法：在温水中捞起标本和干板,揭膜乳胶法：在温水中捞起标本和揭膜,用于扩散性示踪剂（冰冻切片）：,融表法：冷沾取切片 绞链接触法：复杂,3,、电镜,ARG,：,亚细胞水平，分辨力极高，要求标本和乳胶层极薄，,Ilford,L4,或,HW4,乳胶常用，颗粒,140nm,，,示踪剂用量是光镜的,10,倍。,浸膜法：,金属环法：,4,、细胞涂片,ARG,：,a,、,血涂片,ARG,b,、,骨髓涂片,ARG,ARG,图像阅读分析,图像中银粒沉着处，反映标本中核素的存在部位，也表示标记物定位。,一、宏观,ARG,：,可直接看,or,放大镜，黑度表示放素所在部位，越黑说明放射性越强，含某物标记物越多，如要精确定位，必须与原标本重合在一起观察。,二、微观,ARG,：,a,、,银粒与组织结构的关系用微调来确定。,b,、,银粒与其它颗粒的区别，用改变焦点来观察它们的大小，颜色和外形。,c,、,区别标本内与标本外乳胶中的银粒,d,、,定量以银粒计数表示。,定量分析法：预先制作一套已知活度梯度的放射源标准系列片，与待测标本在同一张乳胶上曝，显，定。,图像用黑度计,or,光密度计读数，以标准梯度活度为纵坐标，光密度值为横坐标，绘一条标准曲线，即可定量。,还有如下定量法：,视测颗粒计数：颗粒数,/cm,显微光度计测定：,电视扫描装置,（三）亚微观,ARG,：,电镜,ARG,，,它图象中银粒呈扭曲的丝团状，故易辨认。,八、荧光增敏微观,ARG,适于显影不太清楚,or,放射性较弱的组织,AGR,。,特点：在乳胶中加入了闪烁剂。,九、双标记,ARG,当需要研究机体同时摄入的多种放素掺入细胞的区别时，必须用双标记。,依据：选用两种不同的辐射类型,不同能量,不同半衰期,不同分布定位,选用,、,辐射体，,粒子密度大，呈直线形径迹，,密度小，单个银颗粒。,能量不同：两次涂乳胶法得到,ARG,影像加以区别。,3,H,、,14,C,第一次乳胶，反映,3,H,、,14,C,之和,第二次乳胶，先涂一层火棉胶，只反映高能量,14,C,不同的,T,1/2,：,131,I,，,3,H,，,两者衰变速率相差极大，可先涂火棉胶做中间层，阻断,3H,射出，此时是,131,I,造成显影。放置,60,天左右，去掉上边两层,or,在标本背面涂乳胶每曝一次光。,普通照像,核乳胶,溴化银：明胶,47,：,53,80,：,20,15,：,85,15,：,85,颗粒,0.53*10,-6,M,0.10.4*10,-6,密度,6*10,9,/cm,3,10,13,颗粒结晶,/cm,3,两种感光材料的不同,