实验三 植株磷素的测定.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验三 植株磷素的测定,(,钼蓝法,),实验原理,在酸性条件下,无机磷可与钼酸铵作用生成磷钼酸铵,并被氯化亚锡还原成蓝色的磷钼蓝，由蓝色的深浅即可测定磷的含量。,H,3,PO4+12(NH,4,)MoO,4,+21HCl (NH,4,),3,PO,4,12MoO,3,+21NH,4,Cl+12H,2,O,磷钼酸铵,(NH4)3PO4,12MoO3 (MoO,2,4MoO,3,),2,H,3,PO,4,4H,2,O,磷钼蓝,钼蓝的最大吸收波长为,660nm.,SnCl,2,实验仪器：分光光度计 研钵等,试剂,:50,g/ml,标准磷溶液,材料,:,菠菜、青菜、菜花,实验步骤,1,、,绘制标准曲线,1,）取标准磷溶液分别配成浓度为,0,、,6,、,8,、,10,、,15,、,20,、,25,、,30,g/ml,磷溶液各,10mL,；,2,）取上述不同浓度,标准磷溶液,1mL,于试管中，加入,7mL,水，再加入钼酸铵硫酸试剂,2mL,，摇匀后加入,SnCl,2,2,滴，混匀，静置,10-15min,；,3,）选择,660nm,波长，用光径,1cm,比色杯，以浓度,0,为参比溶液，测得各标准溶液的吸光度值；,4,）以磷浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。,2,、植物组织中磷含量的测定,1,）取材料,2g,于研钵中，加少许石英砂及,5mL,水研磨；,2,）将匀浆移至,25mL,容量瓶中，将研钵中残渣一并洗入，定容至刻度；,3,）取,10mL,该混合液的上清液于,6000r/min,条件下离心,15min,后，取提取液,1mL,两份于洁净的试管中,在上述同样条件下测其吸光度值；,4,）根据公式计算磷含量：,P(g/g,叶鲜重,)=C(V/W),式中：,C,为提取液的磷含量（,g/ml,）；,V,为提取液的体积（,mL,）；,W,为样品鲜重（,g,）。,注意事项,1,、使用钼蓝测磷法时，钼蓝铵,-,硫酸溶液加入体积要准确，否则会因酸度不合适而导致不显色。,2,、显色时间不宜过长，蓝色易褪去。,3,、实验中比色皿易着色，实验完毕，应及时用水清洗，再用,70%,乙醇浸泡。,实验四 叶绿体色素的提取、分离及叶绿素,a,、,b,含量的测定,