检验技术操作程序.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,检验技术操作程序,zrf,支原体培养操作程序,操作程序,实验原理,10%,20%,的非淋菌性尿道炎由解脲支原体引起。解脲支原体含有多种酶，尿素酶活性是其特有的性质。,培养与鉴定是确定支原体最可靠的方法。在含指示剂系统的肉汤培养基中进行培养可显示支原体的代谢活性。人型支原体经一系列的反应可使精氨酸代谢产生氨，,pH,值升高，指示剂由黄色变为粉红色。解脲支原体产生尿素酶，后者可将尿素分解成氨，也可以使指示剂由黄色变为粉红色。若有生殖支原体生长，则分解葡萄糖，产生丙酮酸和乳酸，,pH,值下降，液体颜色由红变黄，且无明显混浊。,该方法简便、有效、价格低廉且有特异性。目前已广泛用于支原体感染的临床检测,采取标本,男性需用无菌细小棉拭缓慢插入尿道,2-4cm,处，轻轻捻转取柱状上皮细胞标本。女性需用阴道窥器扩张后先用棉拭拭去宫颈口的分泌物，再用另一棉拭插入宫颈,1-2cm,处捻转,10-30,秒，取柱状上皮细胞,实验操作,然后放入培养基中，充分振洗后将棉拭子弃去，旋紧瓶盖，置,37,孵箱中培养,24-48,小时。男性除用尿道拭子外，可取前列腺液、精液或中段尿；女性除用宫颈拭子外，可采用羊水、但不推荐尿液。加样量均为,0.2ml,，培养方法同上。,结果判断,解脲、人型支原体培养,24,小时后观察，培养基变红为阳性，若培养至,72,小时，培养基仍未变红，可判为阴性。生殖道支原体培养,4,7,天观察，培养基由红色变成黄色阳性，反之为阴性。,注意事项,1,、接种标本时，三种培养基不能混合使用（即不能用接种了解脲支原体的棉拭子去接种人型支原体或生殖道支原体，反之亦然）。,2,、支原体生长时，培养基一般无明显混浊，如有小颗粒沉淀或粘于管壁，亦属正常。,3,、如为,Mh-Uu,培养基，,24,小时变红者可能为,Uu,支原体感染，,48,小时以后变红者可能为,Mh,支原体感染。,4,、阳性结果的支原体标本可保存在冰箱中。,支原体药敏试验,药敏抗生素全部采用临床常规治疗用抗生素，药敏分别为：,四环素（,TET,）螺旋霉素（,ACE,）红 霉 素（,ERY,）罗红霉素（,ROX,）强力霉素（,DOX,）可乐必妥（,CRA,）泰利必妥（,OFL,）美满霉素（,MIN,）交沙霉素（,JOS,）阿奇霉素（,AZI,）克拉霉素（,CLA,）司帕沙星（,SPA,）,标本采集,男性需用无菌细小棉拭缓慢插入尿道,2-4cm,处，轻轻捻转取柱状上皮细胞标本；女性需用阴道窥器扩张后，先用棉拭拭去宫颈口的分泌物，再用另一棉拭插入宫颈,1-2cm,处捻转,10-30,秒，取柱状上皮细胞。男性除以上方法取标本外，还可取前列腺液、精液或中段尿沉渣（中段尿,10ml2000T/min,离心,10,分钟）做标本；女性除以上方法取标本外，可取半水做标本，但不推荐用尿液做标本；加样量均为,0.2ml,试验操作,1,、接种前先使培养基在室温中预温,并在管上作好标记。,2,、拧开培养基瓶盖，用无菌吸嘴吸取,100ul,左右培养液加入药敏反应板高浓度（,H,）的,1,号孔（即空白对照孔），再将标本棉拭在瓶壁和培养基接触面上涂挤，丢弃棉签（也可直接将,50ul,阳性培养液加入培养基中）,盖上瓶盖,摇匀。,3,、其余各孔内均加入,100ul,左右接种过标本的培养液,然后每孔均加入,1,滴液体石蜡油覆盖液面,以免培养液蒸发,最后盖上药敏反应板板盖。,4,、将药敏反应板置,37,培养箱中培养,24-48,小时,观察结果。,结果判断,第一排（高浓度）第一孔为空白对照孔，不变红为阴性（,），则试验成立。第二排第二孔为支原体培养孔，变红为阳性（,+,），说明有支原体生长。第二排药敏板条（低浓度）第一孔为解脲支原体孔，变红为解脲支原体阳性，且浓度,104,。第二排药敏板条第二孔为人型支原体孔，变红为人型支原体阳性，且浓度,104,，两孔均变红为混合感染，浓度均,104,。第一排药敏反应板,3-14,孔为高浓度药敏孔。第二排药敏反应板,3-14,孔为低浓度药敏孔。,高低浓度药敏孔均不变色（浅色）表示对相应的抗生素敏感；低浓度药敏孔变红而高浓度药敏孔不变红（浅红），表示对相应抗生素中度敏感；高低浓度药敏孔为变红，表示对相应的抗生素耐药。,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14,空白 混合孔,HL,UU TET ERY DOX OFL JOS CLA MH ACE ROX CRA MIN AZI SPA,注意事项,1,、用阳性培养液接种需早期在颜色稍转红时接种为佳，因支原体在碱性环境下易死亡。,2,、若混合孔变红，尿素孔、人型孔均不变色，说明标本中支原体浓度,104,，属正常范围，可报阴性。,3,、解脲支原体,24,小时报结果，人型支原体,48,小时报结果。,沙眼衣原体,C-C,板操作程序,操作程序,实验原理,本试验是将衣原体单克隆抗体的带色乳胶复合物吸附于滤纸上，将滤纸夹在两块塑料板中间，若加入的标本为阳性，测标本中的抗原与结合有乳胶的单抗结合，复合物因毛细作用向前扩散移动至结果窗，可被该处含有的未标记的鼠抗衣原体单抗所捕捉，在结果窗,B,中出现一条红线，标本即为阳性。过剩的未结合的带色乳胶标记鼠抗衣原体单抗可移动到质控,C,，与该处的兔抗鼠抗体结合，出现一条红线，如在结果窗,B,中无红线出现，同时质控窗,C,应出现一条红线，表示检测结果阴性，检测试剂有效,采取标本,宫颈标本,：,1,、在取样前，用棉球除去宫颈外区的粘脓液，如标本中含有大量血液或脓液，会出现假阳性结果。,2,、将拭子插入宫颈管内，直到大部分拭子看不见，旋转拭子,15-30,秒钟，取出拭子时不要碰到阴道壁。,尿道标本,：,1,、将男性拭子插入尿道舟状窝处（,2-4cm,），旋转,3-5,秒钟后取出。,2,、取样最好在未排晨尿前，或者至少取样前,2,小时内未排尿。,实验操作,（,1,）加,18,滴（,0.9ml,）提取液（,0.1%,叠氮钠）于过滤试管中；（,2,）将标本拭子浸入过滤试管中，反复在试管中旋转拭子,10,秒钟，以确保提取液与标本充分混合；（,3,）把装有拭子的过滤试管静放在试管架上室温下孵育,10-15,分钟；（,4,）在,10-15,分钟孵育过程中，分,2-3,次反复旋转拭子使提取液与标本充分混合；（,5,）孵育,10-15,分钟结束后，盖上过滤吸头。,将检测卡从密封袋中取出，放置于水平的台面上。如从冰箱中取出，使其恢复至室温再检测；滴,4,滴（,150ul,）液体于检测卡的样品槽,(A),中；,10-15,分钟即读出结果。,结果判断（,1,）阴性结果：在对照区（,C,）有一条红线，检测区（,B,）无红线出现。（,2,）阳性结果：对照区（,C,）检测区（,B,）均有红线出现。（,3,）无效结果：对照区（,C,）无红线出现，应更换新的检测卡重新试孔。,阴 性 结 果 阳 性 结 果,A,B C A B C,注意事项,1,、此法仅适用于体外诊断，检测来源于宫颈管内及男性尿道内的衣原体抗原。,2,、如标本中含有大量血液或者脓液，会出现假阳性结果。,3,、本检测结果如有阴性，而临床症状持续存在，可以进行其他方法来进一步明确诊断。,梅毒操作程序,梅毒快速血浆反应素诊断（,RPR,）,操作程序,实验原理,梅毒患者血清中存在着能与,VDRL,抗原发生凝集反应的反应素，此试剂利用这一原理，将,VDRL,抗原吸附于活性炭颗粒表面，当待测血清中存在反应素时，即与其发生凝集反应，出现肉眼可见的黑色凝块。阳性者，将血清稀释作定量试验。,采取标本,无菌采取静脉血,2ml,实验操作,1,、分别吸取,50,微升梅毒阳性对照和阴性对照均匀铺加在纸卡的两个圆圈中。,2,、将待检血清,50,微升用生理盐水作倍比稀释（原血清、,1:2,、,1:4,、,1:8,、,1:16,、,1:32,），均匀铺加在纸卡的另外的圆中。,3,、用盒中的专用针头、滴管吸取,RPR,试剂，分别垂直滴加,1,滴于上述血清中。,4,、用,RPR,旋转仪或多功能振荡仪水平转动纸卡,8,分钟，,100,转,/,分钟，然后,3,分钟内在光线充足处判断结果。,结果判断,1,、阴性反应（,）：可见均匀的抗原颗粒而无凝集物。,2,、弱阳性反应（,+,+,）：可见较小的黑色凝集物。,3,、阳性反应（,+,+,）：可见中等或较大的黑色凝块，溶液清亮。,注意事项,1,、,RPR,试剂在使用前应充分摇匀。,2,、血清中加入试剂后充分振荡使其混匀。,3,、定性试验呈弱阳性或阳性者必须做定量试验才能了解患者血清中的抗体滴度，然后对每个稀释度的血清再进行测定并判断结果。,4,、定性试验呈弱阳性或阳性反应者，需结合临床进行综合分析判断，同时再做特异性密螺旋体试验加以确诊。因为此试验是梅毒非特异性反应素试验，麻风等患者可出现生物学假阳性反应。,5,、试剂盒中的专用滴管、针头只能用来吸取,RPR,试剂，不能用来吸取血清或作他用。,梅毒螺旋体抗体诊断凝集试验 （,TPPA,）,操作程序,实验原理,TPPA,是将梅毒的精制菌体成分包被在人工载体明胶粒子上。这种致敏粒子和样品中的梅毒螺旋体抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反应，由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体，并且可用来测定抗体效价,谢谢！,