气相及液相.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,*,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,气相液相色谱原理及应用,主讲人：陈 波,2009.8.4,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,目 录,色谱学基本概念,一,气相色谱结构及应用,二,液相色谱结构及应用,三,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,色谱学基本概念,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,色谱法的分类,按操作形式分为：纸色谱法,(PC),薄层色谱法,(TLC),柱色谱法,按两相的物理状态分为：,气相色谱法,(GC),液相色谱法,(LC),化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,色谱的工作原理,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,色谱法分析对象,气相色谱,：,（占目前已知化合物的,20-25%,）,分子量小,可挥发,低沸点（一般不超过,500,摄氏度,）,热稳定性好,液相色谱：,原则上其余化合物,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,色谱的基本概念,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,基本概念和原理,拖尾因子：,用以衡量色谱峰的对称性。,T=A/B,指,10%,峰高处的前峰宽,A,与后峰宽,B,的比值。,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,基本概念和原理,峰宽,-,峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点 间的距离。,半峰宽,-,峰高一半处的峰宽。,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,基本概念和原理,噪音,(noise),基线信号的波动。,通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。,噪音,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,基本概念和原理,死时间：,t,0,保留时间：,t,R,调整保留时间：,t,S,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,基本概念和原理,中国药典,规定,R1.5,时，两峰完全分离,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,色谱分析的意义,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,因为保留时间是唯一的定性数据，因此在色谱分析过程中，标准样品是必需的。,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,定量分析,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,气相色谱结构及应用,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,气相色谱构成,气路系统,进样系统,检测系统,温控系统,数据处理系统,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,气路系统,气源：,载气、检测器需要的辅助气,气流控制装置：,压力表、流量计、电磁阀、电子流量计,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,气源来源,钢瓶,气体发生器,优点,气体质量有保障,输送气体压力稳定,一次性投入成本低,使用方便（不用频繁更换）,安全性高,缺点,需要经常更换（麻烦）,氢气钢瓶放在室内存在危险,气体质量差,一次性投入成本高,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,载气,可用做载气气体：,N,2,、,H,2,、,He,等，保证载气纯度在,99.999%,以上。,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,气路控制系统,手动调节：,通过多重压力表对气流进行控制。,自动调节：,通过电子流量计或电磁阀进行自动控制。,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,电子流量控制优点,流量控制准确，重现性好,可实现气体的多模式操作,使仪器体积更小,使仪器自动化程度更高,仪器更省气,操作更安全,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,最小检测线和最小定量限,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,温控系统,进样口,根据样品的性质确定，太高容易造成样品的,分解，太低会使样品气化不完全,柱温箱,等温程序,升温程序,检测器,检测器的温度总是比柱的温度高。,通常比柱箱的程序升温的最终温度高,20-30,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,柱温与分离的关系,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,研究了一种同时测定水中两种多环芳烃（萘、蒽）和三种酞酸酯（邻苯二甲酸二甲酯,(DMP),、邻苯二甲酸二辛酯,(DOP),、邻苯二甲酸二,(2-,乙基己基,),酯,(DEHP),）的固相微萃取,-,气相色谱（,SPME-GC,）方法。,固相微萃取技术,（,solid phase micro-extraction,，,SPME,）技术是种集萃取、浓缩、进样于一体的样品前处理新方法。目前，,SPME,除了在食品、药物和毒理学等研究领域得到广泛应用,.,样品前处理,：取,40,mL,水样于样品瓶并加入小磁子，插入萃取针,(,纤维浸入并处于中心位置,),，水浴控温,45,，磁力搅拌,60 min,，萃取结束退出纤维拔出萃取针，在气相色谱进样口解析,5 min,。,气相色谱应用实例 一,SPME-GC,法同步分析水中多环芳烃和酞酸酯,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,SPME-GC,法同步分析水中多环芳烃和酞酸酯,A:,经固相微萃取后,5,种物质标准样品色谱图；,B:,经固相微萃取后自来水样品色谱图,A,B,气相色谱条件：,GC-2010,气相色谱仪，配,FID,检测器；,HP-5,石英毛细管柱,(30 m 0.25 mm 0.25,m,),柱温起始,70,，保持,8 min,，以,30/min,升至,170,，保持,4 min,，以,30/min,升至,280,，保持,8 min,；气化温度,280,；检测器温度,300,。载气：,N2,，柱流量：,1.0,mL,/min,；,H2,：,47,mL,/min,；空气：,400,mL,/min,；不分流进样。,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,气相色谱应用实例二,SPME-GC-FTD,法测定人尿液中毒鼠强含量,毒鼠强结构式,样品前处理,：样品离心后，直接取,5,mL,于样品瓶中，插入萃取针，水浴控温,50,，磁力搅拌,12min,，萃取结束退出纤维拔出萃取针，在气相色谱进样口解析,3 min,。,最低检测限,：,0.02ng/mL,，,比文献报道的最低检测限低一个数量级,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,SPME-GC-FTD,法测定人尿液中毒鼠强含量,气相色谱条件：柱温起始,150,，以,10/min,升至,200,，然后以,20/min,升至,280,，保持,2 min,；气化温度,245,；检测器温度,310,。载气：,N2,，线速度：,2.0,mL,/min,；,H2,：,2.0,mL,/min,；空气：,150,mL,/min,；不分流进样。,GC-2010,气相色谱仪，配,FTD,检测器；,VO-17,石英毛细管柱,(30 m 0.53 mm 0.5m),固相萃取后阳性尿液样品色谱图,固相萃取后标准品色谱图,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,气相色谱应用实例三,气相色谱法测定脂肪酶活力,原理：,传统滴定法操作繁琐，样品消耗量大，重现 性差。,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,样品处理,：底物乳化液,100,L,pH,7.5,的,Tris-HCl,缓冲液,200,L,，酶液,200,L,。在,32,水浴反应,5 min,后，加入乙腈,800,L,终止反应,振荡,10 s,，离心,10 min,（,10 000 rmin-1,），取上清液进样分析。,仪器条件：,HP5890,气相色谱仪带,FID,检测,Supecl,-NUKOLTM FFAP,毛细管柱；（,30 m 0.53mm 0.5,m,),，柱温,100,，保持,5 min,，以,20 min-1,的速率升温至,180,后，保持,6 min,。分流。进样口温度,250,，检测器温度,250,，载气（氮气）流速,10,mL,/min,，氢气流速,30,mL,/min,，空气流速,300mL/min,，尾吹,30,mL,/min,。进样量,1,L,。,气相色谱法测定脂肪酶活力,A:,正丁酸样品色谱图,B:,样品色谱图,1,：正丁酸,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,气相色谱应用实例四,样品前处理：精密称取五味子药材（粉碎）,0.200 g,置于,50,mL,容量瓶中，加入甲醇定容并称重，超声（,125W,，,40Hz,）提取,40 min,，放冷，再称重，用甲醇补足减失的重量后作为供试品溶液以备用。,仪器条件：,HP-5890,气相色谱仪，,FID,检测器，,HP-3365,化学工作站。,HP-5MS,石英毛细管柱,(30 m 0.25 mm,i.d,.,，,0.25m,液膜厚度,),；程序升温，起始温度为,210,，保持,1min,，以,2/min,升温至,230,，保持,30 min,；进样量,1,L,，分流比：,10,：,1,，载气：氮气，,1ml/min,；进样口和检测器温度为,280,。,气相色谱法同时测定五味子中三种木脂素的含量,（,A,）对照品和（,B,）样品色谱图,1,：五味子甲素；,2,：五味子乙素；,3,：五味子醇甲,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,液相色谱结构及应用,第三部分,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,液相色谱发展历史,经典液相色谱：室温、常压,柱效低、时间长（常有几个小时）,现代液相色谱：,高效液相色谱：,High performance Liquid Chromatography,，,HPLC,填料颗粒小而均匀,高压输送流动相,又称 高压液相色谱,(,High Pressure Liquid Chromatography,，,HPLC,),。,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,我国药典收载高效液相色谱法项目和数量比较表,方法,项目,数量,1985,年版,1990,年版,1995,年版,2000,年版,HPLC,法,鉴别,9,34,150,检查,12,40,160,含量测定,7,60,117,387,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,液相色谱分类,按原理分为：吸附色谱法（,AC,）,分配色谱法（,DC,）,离子交换色谱法,(IEC),排阻色谱法,(EC),，又称凝胶,过滤色谱（,GFC,）,亲和色谱法,(AC),分配色谱按固定相和流动相极性分为：,正相色谱和反相色谱,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,固定相与流动相,反相,HPLC,极性,:,固定相,流动相,固定相,-,极性强,流动相,(,己烷,庚烷,),-,极性弱,极性物质后出峰,正相色谱,20%,反相色谱,80%,正相色谱,20%,反相色谱,80%,主流,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,液相色谱构成,溶剂传输系统,高压泵,样品引入系统,进样器,样品分离系统,色谱柱,信号检测系统,检测器,数据处理系统,软件,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,溶剂传输系统,贮液罐,流动相,输液泵,梯度洗脱装置,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,贮液罐,存放流动相的容器,材料通常为玻璃，不锈钢或表面涂聚四氟乙烯的不锈钢等。,不能使用塑料容器,容器应,定期清洗,，特别是盛,水、缓冲液,和混合溶液的瓶子，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,流动相,流动相应不改变填料的任何性质,纯度：分析纯或色谱纯,必须与检测器匹配,粘度低,对样品的溶解度要适宜。,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,流动相的选择,在,正相色谱,中，溶剂的强度随极性的增强而增加；在,反相色谱,中，溶剂的强度随极性的增强而减弱。,正相色谱,的流动相通常采用,烷烃,加适量极性调整剂。,反相色谱的流动相通常以,水,作基础溶剂，再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂，如,甲醇、乙腈、四氢呋喃,等。,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,流动相的选择,参考资料：,乙腈的毒性是甲醇的,5,倍，是乙醇的,25,倍。,价格是甲醇的,67,倍。,100%,甲醇的冲洗强度相当于,89%,的乙腈,/,水。,乙腈的截止波长为,190nm,，甲醇的截止波长为,205nm,。,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,流动相的,pH,值,反相离子抑制,技术：采用反相色谱法分离弱酸（,3pKa7,）或弱碱（,7pKa8,）样品时，通过调节流动相的,pH,值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术。,对于弱酸，流动相的,pH,值越小，组分的,k,值越大，当,pH,值远远小于弱酸的,pKa,值时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱，情况相反。,分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用,50mmol/L,磷酸盐缓冲液和,1%,醋酸溶液；分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用,50mmol/L,磷酸盐缓冲液和,30mmol/L,三乙胺溶液。,注：流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的强相互作用，减轻或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺（如三乙胺）又称为减尾剂或除尾剂,。,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,缓冲盐流动相注意点,(1),现配现用,.,低温下密封保存一般不超过,3,天。,(2),确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收（在波,长,210nm,附近进行检测时，不能用,醋酸,和,柠檬,酸,的缓冲液）,(3),冲液必须过滤膜。,(4),使用缓冲液期间，用注射器推纯水，清洗柱塞,杆，延长泵密封垫寿命。,(5),工作完毕后及时冲洗,LC,系统缓。,(6),梯度洗脱时,确认不同比列的缓冲液与有机溶剂,能互溶。,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,流动相的过滤和脱气,流动相的过滤,滤膜类型：,聚四氟乙烯滤膜,：,适用于所有溶剂，酸和盐。,醋酸纤维滤膜：,不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。,尼龙,66,滤膜：,适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸，,不适用于二甲基甲酰胺。,再生纤维素滤膜：,蛋白吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,脱气：,除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡,气泡对测定的影响：,1,）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积,2,）柱中气泡使流动相绕流，峰变形,3,）检测器中的气泡产生基线波动,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,脱气的目的,1.,防止由气泡的产生引起的故障,2.,防止由溶解（在液体中的）气体量,的变动引起的检测不稳定程度,1,）示差折射率检测器,*使折射率变化,2,）,UV,检测器（,200,nm,以下）,*溶解氧气有吸收,3,）荧光检测器,*溶解氧气有消光作用,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,脱气方法,1,.,低压脱气法（真空脱气法）,2.,吹氦脱气法,超声波脱气法,在线脱气法,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,往复式输液泵结构,流动相,泵头清洗管路,柱塞杆,密封圈,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,并联泵与串联泵,串联往复式泵：,Waters 600,泵，,岛津,10AD,泵,并联往复式泵：,Agilent 1100,系列，,岛津,10AT,泵,串联柱塞泵,消除流量脉冲,并联柱塞泵,减小流量脉冲,单向阀结构,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,梯度洗脱装置,高压梯度洗脱,低压梯度洗脱,1-,四通；,2-,混合器泵控制器；,3-,高压输液泵；,A,B,C-,电磁比例阀，,a,b,c-,溶剂瓶,1,，,2-,泵；,3,，,4-,泵控制器；,5-,梯度程序控制器；,6-,混合器,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,进样系统,手动进样器,自动进样器,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,手动进样器的原理图,装填状态,进样状态,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,六通阀进样方式：,部分装液法：进样量应不大于定量环体积的,50%,（,最多,75,），并要求每次进样体积准确、相同。,完全装液法：进样量应不小于定量环体积的,510,倍（,最少,3,倍,），这样才能完全置换定量环内的流动相，消除管壁效应，确保进样的准确度及重复性。,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,注意事项：,样品溶液进样前必须用,0.45m,滤膜过滤，以减少微粒对进样阀的磨损。,转动阀芯时不能太慢，更不能停留在中间位置，否则流动相受阻，使泵内压力剧增，甚至超过泵的最大压力；再转到进样位时，过高的压力将使柱头损坏。,为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中，每次分析结束后应,阀清洗接头和注射器,冲洗进样阀，防止交叉污染。,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,自动进样器,注意事项：,样品瓶中应有超过瓶高,1/3,的样品量,样品瓶中样品不要装太满，应留有一定的空气。,使用与仪器配套的样品瓶。,机械手,样品盘,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,洗针溶剂根据流动相的不同应有所不同。,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,色谱柱,色谱柱结构：,柱管，卡帽，卡套，筛板，接头，螺丝等,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,色谱柱,色谱柱的分类：,色谱柱按用途可分为分析型和制备型,尺寸规格：,常规分析柱（常量柱），内径,25mm,（常用,4.6mm,，国内有,4mm,和,5mm,），柱长,1030cm,；,窄径柱（,narrow bore,，又称细管径柱、半微柱,semi-,microcolumn,），内径,12mm,，柱长,1020cm,；,毛细管柱（又称微柱,microcolumn,），内径,0.20.5mm,半制备柱，内径,5mm,；,实验室制备柱，内径,2040mm,，柱长,1030cm,；,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,柱填料基质,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,硅胶填料,物,理,性,质,物理性质,硅胶纯度,色谱柱尺寸,颗粒形状,粒径,表面积,孔径,填料硅胶的纯度,与残留金属离子浓度,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,硅胶填料,化学性质,键合类型,碳覆盖率,封端,化学性质,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,C18,硅胶填料结构,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,高效液相色谱检测器,UV,荧光,示差折光,蒸发光散射,信号,吸光度,荧光强度,折光率,散射光强,流速影响,无,无,无,无,温度影响,小,小,大,小,检测限,(,g/ml,),10,-10,10,-13,10,-7,10,-9,梯度洗脱,适宜,适宜,不宜,适宜,细管径柱,难,难,难,适宜,样品破坏,无,无,无,无,通用型,否,否,是,是,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,紫外检测器,工作原理：通过测定样品在检测池中吸收紫外,-,可见光的大小来确定样品的含量。朗伯,-,比尔定律：当一束单色光辐射通过物质溶液时，如果溶剂不吸收光，则溶液的吸光度与吸光物质的浓度和光经过溶液的距离成正比。,A=,bc,A:吸光度；E：吸光系数；b：光路长度；c：溶液浓度,对于给定的检测池（,b,一定），在固定的波长下（,一定），紫外检测器的输出一个与样品浓度（,c,）成正比的光吸收信号,吸光度（,A,）。,分类紫外,-,可见光检测器光电二极管阵列检测器（,PDA,或,DAD,）,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,紫外,-,可见光检测器（,UV-Vis,）结构,1-,氘灯；,2-,透镜；,3-,滤光片；,4-,夹缝；,5-,放射镜；,6-,光栅；,7-,分束器；,8-,参比光电二极管；,9-,流通池；,10-,样品光电二极管,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,光电二极管阵列检测器,(PDA/DAD),结构,1-,氘灯；,2-,光源转化镜；,3-,钨灯；,4-,反射镜；,5-,入口狭缝；,6-,扇形镜；,7-,圆形镜；,8-,参比吸收池；,9-,样品吸收池；,10-,准光镜；,11-,分光器入口狭缝；,12-,平面镜；,13-,光栅；,14-,光电二极管阵列,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,荧光检测器,(FD),原理：,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,荧光检测器结构,1-,中压汞灯光源；,2-10%,反射棱镜；,3-,激发光滤光片；,4-,透镜；,5-,测量池,6-,参比池；,7-,发射光滤光片；,8-,光电倍增管；,9-,放大器；,10-,记录器；,11-,光电管；,12-,对数放大器；,13-,线性放大器,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,荧光检测器使用注意事项,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,示差折光检测器,(IRD),原理：通过连续测定色谱柱流出液折射率的变化而对样品浓度进行检测。,溶有样品的流动相和流动相本身之间折射率只差反映了样品在流动相中的浓度。,公式：,R=Z c,i,(n,i,-n,0,),R:,仪器响应信号；,Z,：仪器常数；：,c,i,溶质摩尔浓度；,n,i,：溶质折射率；,n,0,：溶剂折射率,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,示差折光检测器结构,偏转式折光仪光路原理图,1-,光源；,2-,夹缝；,3-,遮光罩；,4-,样品（进）；,5-,反光镜；,6-,参比（进）；,7-,透镜；,8-,调零；,9-,光束分离器镜片；,10-,光电池,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,示差折光检测器使用注意事项,不能做梯度实验,此种类型检测器为压力敏感型和温度敏感型检测器,-,注意保持泵压力的平衡,-,注意环境温度的恒定,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,蒸发光散射检测器,(ELSD),原理,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,蒸发光散射检测器结构,（,a,）结构图,1-,溶剂流；,2-,喷雾气；,3-,雾化器；,4-,蒸发器；,5-,光阱；,6-,光源；,7-,排气口；,（,b,）结构图（表明散射光进入光电倍增管的光路）,1-,光源；,2-,光阱；,3-A-A,截面；,4-,光电倍增管,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,蒸发光散射检测器使用注意事项,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,其他检测器,安培检测器,电导检测器,手性检测器,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,检测器的使用和保养,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,HPLC,如何得到好的结果,流动相,缓冲液,/,溶剂选择,梯度优化,流速选择,脱气，流速稳定,流动相制备,柱,高柱效,二级作用力,温度控制,检测,灵敏度,选择性,温度波动影响,样品,提取方法选择,样品溶剂选择,氧气影响,仪器,性能,稳定性,耐用性,易操作性,综合评估,分析技术的稳定性,可靠性,定量准确性,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,总结：,GC,与,LC,的比较,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,化学生物学及中药分析教育部重点实验室,&,岛津合作实验室,