免疫沉淀反应.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2009.11.3,*,免疫电泳试验,2009.11.3,免疫电泳是一种将,区带电泳,和,双向免疫扩散,相结合的免疫化学分析技术。,实验原理,2009.11.3,实验原理,先将抗原样品在琼脂平板上进行,电泳,，使其中的各种成分因电泳迁移率的不同而被分离成,肉眼不可见的区带。,停止电泳后，在与电泳方向平行的槽内加入相应抗血清，使抗原和抗体呈,双向扩散,，已分离的各抗原与相应抗体在琼脂中扩散而相遇，在二者比例合适处形成肉眼可见的,沉淀弧,。,2009.11.3,实验原理,根据沉淀弧的数量、位置和形状与,已知标准抗原,进行比较，可分析、鉴定样品中所含的抗原成分及其性质。,2009.11.3,人全血清,兔抗人全血清,1.5,琼脂、,0.05mol/L pH8.6,巴比妥缓冲液,移液管,玻片、刀片、打孔器,电泳槽、电泳仪、水浴箱,主要的试剂和器材,2009.11.3,制板,将洁净玻片置于水平台面上，用移液管吸取,4-4.5ml,熔化的,1.5,琼脂加于载玻片上，待冷凝,。,实验步骤,2-5mm,2009.11.3,打孔及开槽,，挑去孔内的琼脂，,槽内琼脂暂不挑出,。（打一个孔即可）,4,5mm,10mm,中央偏右,2mm,3mm,2009.11.3,加样,用微量进样器吸取,10,l,稀释的,正常人全血清,于小孔中。,电泳,以,0.05mol/L pH8.6,巴比妥缓冲液为电泳缓冲液，将加样后的琼脂板置于电泳槽上，,样品孔靠近阴极端,，用缓冲液浸湿的双层纱布搭桥电泳。一般稳定端电压,100V,，电泳,1h,，即可终止电泳。,双扩散,取出电泳后的琼脂板，挑出中间槽内的琼脂，取,100,兔抗人全血清,充满槽内，注意勿外溢。将琼脂板放于湿盒内，水平置于,37,水浴箱中进行双扩散，,24h,后观察结果。,2009.11.3,观察沉淀弧的位置和条数，并画出沉淀弧。,实验结果,2009.11.3,抗原与抗体浓度比例应适当，否则会使某些成分不出现沉淀线。当蛋白质抗原浓度高于,20g/L,，应用缓冲液稀释后再进行电泳和扩散。,所用抗血清最好用两只或两只以上免疫动物的混合血清，增加抗血清的抗体谱。,浇板时要求厚度均匀，无气泡。打孔挖槽时要求外壁整齐，防止琼脂破裂。,扩散过程中需要在不同时间进行结果观察，做好记录。,每次电泳后应倒换正负电极或将两槽缓冲液混合后再使用。,注意事项,2009.11.3,应用,粗略分析纯化抗原或抗体的纯度。,正常及异常体液中蛋白质分析。,免疫后抗体组分的动态变化研究。,2009.11.3,