第四讲-中药理化鉴定.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第四讲-中药理化鉴定,第四讲,中药理化鉴别,2,理化鉴别,物理、化学的方法,中药材及其制剂所含的有效成分、主成分或特征性成分进行定性、定量分析，以鉴定真伪、评价品质。,色谱、波谱,对于化学成分不清楚，或因次要成分的干扰而无法进行主成分分析时，可进行鉴定和识别。,3,常用的理化鉴定方法,显微鉴别,定性反应（,颜色或沉淀反应）,色谱法,波谱法,4,（,1,）显微鉴别,适用对象：,主要用于药材及成药中药材粉末的鉴别,示例：灵芝孢子胶囊,5,6,7,8,大家学习辛苦了，还是要坚持,继续保持安静,9,10,（,2,）颜色或沉淀反应,与特定试剂发生反应 不同的颜色或沉淀,11,生物碱,+,碘化铋钾 沉淀,蒽醌,+,碱液 显色,黄酮,+,盐酸镁粉 现象,内酯,+,异羟肟酸铁 显色,皂苷,-,-,Liebermann,一,Burchard,酚类,+,三氯化铁 显色,鞣质,+,明胶 沉淀,氨基酸,+,茚三酮 显色,糖类,+,苯酚硫酸 显色,12,（,3,）色谱法,分离、分析鉴双重优势。,常用色谱鉴定方法：,薄层色谱法,气相色谱法,高效液相色谱法,纸色谱法,凝胶电泳,毛细管电泳等技术,13,薄层色谱法,特点：方便、成本小,广泛应用,14,灵芝胶囊,TLC,鉴别,15,阳性对照,：,鉴别药材按制剂工艺处理,，再按鉴别方法提取的溶液,阴性对照,：,除去制剂中要鉴别的药材,，剩下的各味药按制剂工艺处理，再按鉴别方法提取的溶液,方法：对照药材法或对照品法,16,气相色谱法,适用范围：挥发性成通过衍生化后能够气化的成分的定性、定量分析,特点：灵敏度高、分离效率高,注：不挥发的成分，也可采用裂解气相色谱或闪蒸气相色谱来进行鉴定。,17,示例：,衍生化后,GC/MS,检测方法时测定银杏内酯,A,和银杏内酯,B,18,衍生化原理,银杏内酯,A,：,银杏内酯,B,：,19,衍生化产物裂解过程,银杏内酯,A,：,银杏内酯,B,20,色谱柱：,HP-1,（,17m200m0.10m,）,气化室温度：,250,柱温：,200,230,（,3/min,）,260,（,20/min,）,265,（,2/min,）,分流进样，分流比,51,载气：氦气,流速,：,0.9ml/min,柱前压：,20.2psi,恒压,色谱条件,21,质谱检测参数,MSD:,选择性离子检测（,SIM,）,离子化方式：电子轰击离子化（,EI,）,检测离子：,MT m/z:301,银杏内酯,A m/z:537,银杏内酯,B m/z:625,轰击电压：,70V,倍增器电压：,1624V,22,GC-MS,谱图,银杏内酯,A,银杏内酯,B,23,高效液相色谱法,特点：柱效高、分离度好、重现性好,适用范围广,24,典型色谱图,女贞子提取物,HPLC,图,25,进样过程,自动进样,手动进样,注：定量管决定进样体积,26,举例,:,不同吴茱萸样品指纹图谱,相似度比较,广西灌阳,四川广元,27,凝胶电泳,适合对象：肽类、核酸、多糖等大分子,28,毛细管电泳,优点：具有,HPLC,与电泳技术长处,进样量少,29,30,毛细管电泳,31,Capillary Zone Electrophoresis(CZE):Migration Superimposed on EOF,32,Micellar Electrokinetic Chromatography(MEKC),33,黄芩中,6,种黄酮类成分胶束电动毛细管色谱图,1.,汉黄芩苷,2.,黄芩素,3.,黄芩苷,4.,千层纸素,5.,汉黄芩素,6.,内标水杨酸,7.,白杨素,34,（,4,）波谱法,原理：中药成分结构不同 产生特征吸收峰,常见方法,可见一紫外分光光度法,红外分光光度法,串联质谱,核磁共振,X,线分析法,35,可见紫外分光光度法,适用范围：总提取物、部分提取物中 某类成分,可通过导数光谱法进行混合物中单一组分的测定,通过指纹图谱进行定性分析,36,常见谱图,37,举例 比色法,38,39,红外分光光度法,主要用于指纹图谱的分析、鉴定。,40,质谱法（,MS,）,可直接用于粉末药材（成药）的分析、鉴定，是一种新的质谱技术。,41,42,核磁共振波谱法（,NMR,）仪器,用于具有特定结构类型化合物的定性、定量分析，如植物中吡咯里西啶生物碱的,NMR,分析。,HPLC-NMR,43,X,线分析法,适用于,矿物类,药材的分析、鉴定，也可应用于,粉末药物,的直接分析。,44,分析实例,万氏牛黄清心丸鉴别,明,.,痘疹世医,心法，清心开窍剂，主治热邪内陷心包所致窍闭神昏症。,方药分析,牛黄 君药,黄连、黄芩、栀子 臣药,朱砂、郁金 佐使药,45,栀子,-,种皮石细胞,黄芩,-,纤维,黄连,-,纤维,朱砂,不规则块状物或颗粒状物，暗红棕色、鲜红色或棕黄色,郁金,-,糊化淀粉团块,显微鉴别,46,各味药材所含化学成分,牛黄,胆酸类成分,黄连,主要为小檗碱,黄芩,主要为黄酮类,栀子,主含栀子苷,朱砂,主含硫化汞（,HgS,）,郁金,主含挥发油,化学和色谱鉴别,47,化学鉴别,朱砂的鉴别,原理：,HgS+2HCl+Cu,CuCl,2,+Hg+H,2,S,取本品,3g,，,加水,，,洗去悬浮物，取出朱红色沉淀，加入盐酸1,ml,及铜片，加热煮沸，铜片由黄色变为银白,银白色汞齐,48,色谱鉴别,1.,人工牛黄的鉴别,制备：,剪碎，加硅藻土,0.6g,，加氯仿,10ml,，,冰醋酸0.5,ml,，,加热回流,，,蒸干,回流液,，,再,加乙醇2,ml,复,溶，,即得。,对照品溶液,：,胆酸和猪去氧胆酸1,ml,含1,mg,的混合溶液,49,TLC,法,薄层板,：,CMC-Na,，硅胶,G,展开剂,：醋酸乙酯,-,正己烷,-,醋酸,-,甲醇,（,32:6:1:1,）,显色剂,：,10%,磷钼酸乙醇液，,110,0,C,10min,50,人工牛黄,供试品,牛黄空白，阴性,猪去氧胆酸,胆酸,胆酸,+,猪去氧胆酸,51,2,、黄芩的鉴别,制备：,取本品,3g,，剪碎，加硅藻土,0.5g,，研匀，加甲醇,20ml,，,加热回流,1hr,放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。,对照品溶液：,黄芩,苷,对照品加甲醇制成每1,ml,含1,mg,的溶液，作为对照品溶液。,52,TLC,法,薄层板,：,CMC-Na,，硅胶,G,（,4%,醋酸钠）,展开剂,：醋酸乙酯,-,丁酮,-,甲酸,-,水,（,5:3:1:1,）,显色剂,：,2%,三氯化铁乙醇液,-OH,与,Fe,+3,络合,使斑点更为集中,53,黄芩苷,供试品,黄芩空白,54,4,、黄连的鉴别,制备：盐酸,-,甲醇提取液,4ml,，,蒸干，,再,加甲醇,溶解,。,对照药材溶液,：,黄连对照药材,50mg,，加甲醇,10ml,，回流,15min,蒸干，再加甲醇复溶。,对照品溶液,：,取盐酸小檗碱对照品，加甲醇,0.5mg/ml,的溶液。,55,TLC,法,薄层板,：硅胶,G CMC-Na,展开剂,：苯,-,醋酸乙酯,-,甲醇,-,异丙 醇,-,浓氨试液（,12:6:3:3:1,）,显色方式,：,UV,（,365nm,）,56,