药物分析课件第9章-维生素类药物的分析课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第九章,维生素类药物的分析,概 述,维生素A,维生素D,维生素E,维生素B,1,维生素C,练习与思考,返回主目录,基本要求,基 本 要 求,一、掌握维生素类药物的结构特点与分析方法之间的关系。,二、掌握维生素类药物的鉴别原理与方法。,三、掌握三点校正法测定维生素A的原理、测定方法与计算方法。,四、掌握维生素D的HPLC含量测定法和维生素E的GC含量测定法。,五、掌握维生素B,1,非水溶液滴定法与维生素C碘量法的测定原理、方法与注意事项。,六、熟悉本类药物其他的含量测定方法。,七、熟悉本类药物杂质检查方法。,八、了解维生素A三点校正法的推导过程。,返 回,概 述,维生素：,是维持人体正常代谢机能所必需的 微量营养物资。,人体不能合成维生素。,-H,维生素A醇,-COCH,3,维生素A醋酸酯,-COC,15,H,31,维生素A棕榈酸酯,R:,第一节 维生素A,为一个具有共轭多烯侧链的,环己烯,（一）,结构与性质,一、,具有,UV,吸收,存在多种立体异构化合物,VitA,2,VitA,3,易,发生脱氢、脱水、聚合反应,鲸醇,环氧化物,VitA醛,VitA,酸,蓝色,紫红,去水VitA（VitA,3,）,VitA,USP 显色剂 磷钼酸,规定斑点颜色和Rf,值,BP,杂质对照品法,显色剂 三氯化锑,TLC法,（三）,立体异构体,氧化降解产物,合成中间体,UV法,（一）,含量测定,三、,维生素A,2,维生素A,3,环氧化物,维生素A醛,维生素A酸,三点校正法（法定方法）,1.原理：,（1）杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；,（2）物质对光的吸收具有加和性。,测定对象,VitA醋酸酯,第一法 等波长差法,=12nm,第二法 等吸收比法,测定对象 VitA醇,1,=325nm,2,=310nm,3,=334nm,注意：,C,为混合样品的浓度,第二步 求,第三步 求效价,换算因数由纯品计算而得：,第四步：求标示量,方法：,（2）,第一法,维生素A醋酸酯,规定值 差值,判断差值是否超过规定值的,有一个以上超过,无超过,计算,A,328（,校正）,用,A,328,计算,0,3%,15%,3%,第二法,第二法,讨 论,V,A,醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法（即代数法）推导而来；,V,A,醇的吸收度校正公式是用相似三角形法（几何法或称6/7定位法）推导而来。,在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定,。在测定前务必要校正波长。测定的样品应不得少于两份。,VitAD胶丸中VitA的含量测定,精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.07985g/丸）的内容物 0.1287g 至10ml烧杯中，加环己烷溶解并定量转移至50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一50 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为,A,300,：0.374,A,316,：0.592,A,328,：0.663,A,340,：0.553,A,360,：0.228,A,300,/A,328,：0.564,A,316,/A,328,：0.893,A,328,/A,328,：1.000,A,340,/A,328,：0.834,A,360,/A,328,：0.344,求本品中维生素A占标示量的百分含量？,A,300,/A,328,：0.564,A,316,/A,328,：0.893,A,328,/A,328,：1.000,A,340,/A,328,：0.834,A,360,/A,328,：0.344,0.555,0.907,1.000,0.811,0.299,+0.01,0.01,0,+0.02,+0.04,=,=,=,=,=,A,328(校正),=3.52(2A,328,-A,316,-A,340,),=3.52(20.663 0.592 0.553),=0.637,A,328(校正),A,328(实测),A,328(实测),100=,0.637 0.663,0.663,100,=-3.92,E,1%,1cm,(328nm)=,A,328(校正),100m,s,/D,=,0.637,1000.1287/1250,=61.87,供试品中维生素A效价=,E,1%,1cm,(328nm),1900,=61.87 1900=117553（IU/g）,标示量%=,V,A,效价(IU/g)每丸内容物平均装量(g/丸),标示量(IU/丸),100%,=,1175530.07985,10000,100%,=93.9%,适用于维生素A醇,（等吸收比法）,第一法无法消除杂质干扰时用此法,皂化法、6/7A法,（3）第二法,水溶性,脂溶性,判断,max,是否在323327,nm,之间,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算,是,否,判断,A,300,/A,325,是否大于0.73,是,否,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算,A,325(,校正),0,3%,3%,三氯化锑比色法,（二）,优点 简便 快速,max,618nm620nm,标准曲线法,缺点,呈色不稳定（5 10s内）,水分干扰,与标准曲线温差1,专属性差,三氯化锑有腐蚀性,（二）,蓝色,+,3,SbCl,VitA,返 回,第二节 维生素D,维生素D,2,一、结构与性质,维生素D,3,开环的甾体,：具有甾类化合物的显色反应，可用于鉴别。,手性碳原子,：具有旋光性，可用于鉴别。,多烯,：可进行紫外检测。,二、鉴别试验,1.,显色反应,醋酐-硫酸反应 D,2,黄 红 紫 绿,D,3,黄 红 紫、蓝绿 绿,三氯化锑反应 橙红色渐变粉红,三氯化铁反应 橙黄色,二氯丙醇和乙酰氯反应 绿色,2.,比旋度鉴别,维生素D,2,维生素D,3,溶 剂,浓 度,比旋度值,无水乙醇,无水乙醇,40mg/ml,5mg/ml,+102.5+107.5,+105+112,注意事项,：应于容器开启30分钟内取样，,在溶液配制后30分钟内测定。,3.区别反应：,以96%乙醇为溶剂，加乙醇和85%硫酸，D,2,显红色，在570nm处有最大吸收，D,3,显黄色，,在495nm处有最大吸收。,4.其他方法,：,TLC、HPLC、制备衍生物测熔点,三、杂质检查,维生素D,2,中麦角甾醇的检查,：加洋地黄皂苷溶液，混合，放置18h不得发生浑浊或沉淀。,前维生素D的光照产物,四、含量测定方法,中国药典（2000年版）采用,正相高效液相色谱法,测定维生素D的含量，定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲酸二甲酯，该法分为,三个方法,。固定相：硅胶流动相：正己烷-正戊醇（997：3）,第一法,：用于无维生素A醇及其它杂质的干扰的情况，步骤如下：1系统适用性试验：测定重复性和分离度。,2测定校正因子：,A,S,/m,S,f,1,=-A,r,/m,r,f,2,=（A,S,m,r,-f,1,m,S,A,r1,）/（A,r1,m,S,）,3含量测定：,m,i,=（f,1,A,i1,+f,2,A,i2,）m,S,/A,S,第二法,：用于有杂质的干扰的情况，步骤如下：1皂化处理：皂化、乙醚提取、洗涤提取液、蒸除乙,醚、制备供试液A。2净化：供试液A经液相色谱分离，准确收集含有维,生素D及前维生素D混合物的全部流出液，制,备成供试液B。固定相：ODS 流动相：甲醇-乙腈-水（50：50：2）3含量测定：取供试液B按第一法测定。,第三法,：用于经第二法处理后仍有杂质的干扰的情况。步骤如下：,1制备供试液：取供试液A，净化，水浴加热，得供,试液C。制备对照液：对照品储备液：稀释、加热。2含量测定：在第一法的色谱条件下，交替精密进样,对照液和供试液，按外标法定量。,返 回,苯并二氢吡喃醇,第三节 维生素E,名 称,R,1,R,2,相对活性,-,生育酚,-,生育酚,-,生育酚,-,生育酚,CH,3,CH,3,H,H,CH,3,H,CH,3,H,1.0,0.5,0.2,0.1,*,*,*,dl,生育酚醋酸酯,结构与性质,一、,苯环+二氢吡喃环+饱和烃链,1、UV,2、乙酰化的酚羟基 易水解,緘,緘,緘,瑌,O,醌型化合物,生育酚,緘,緘,緘,緘,畗,緘,-,+,or OH,H,VitE,杂质，需检查,緘,O,生育红,（一）,硝酸反应,橙红色,鉴别,二、,7515,緘,緘,緘,畗,緘,HNO,3,VitE,生育酚,（橙红色）,生育红,生育酚,HNO,3,强氧化剂,三氯化铁联吡啶反应,（二）,生育酚,对-生育醌,O,弱氧化剂,血红色,=41.045.5,max,=284nm,min,=254nm,0.01%无水乙醇中,UV法,（三）,薄层板 硅胶G,展开剂 环己烷-乙醚（4 ：1）,显色剂 硫酸（105,5）,VitE R,f,=0.7,-生育酚,R,f,=0.5,-生育醌,R,f,=0.9,TLC法,（四）,2.游离生育酚,杂质检查,三、,原理,酸度,以,NaOH,滴定液（0.1,mol/L）,体积控制。,（M,生育酚,=430.8）,例,取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不得过 1.0ml。,2.15,限量,四、,含量测定,GC法（法定方法）,（一）,GC特点,1、,选择性好,灵敏度高,速度快,分离效能好,挥发性低、不稳定、极性强衍生化易受样品蒸气压限制,载气N,2,固定液硅酮（OV-17）,担体硅藻土或高分子多孔小球,柱温265,检测器氢火焰离子化检测器(FID),内标正三十二烷,n 500,R2,VitE测定的色谱条件,2、,内标法加校正因子,内标法,供试液（样品+内标）,内标物,对照液（对照+内标）,是样品中不存在的物质,与被测组分峰靠近,能与各组分完全分离,与被测组分的量接近,校正因子：,W,W,K,K,%,VitE,%,100,1,2,=,稀释倍数,稀释倍数,样,对,实际工作中的计算方法,（二）HPLC法,外标法,此外，还有铈量法、比色法和荧光法,返 回,氨基嘧啶环CH,2,噻唑环(季铵碱),第四节 维生素B,1,HCl,Cl,-,（一）,溶解性,1、易溶于水,2、水溶液呈酸性,（二）,UV,共轭双键,max,=246,nm,结构与性质,一、,与生物碱,（三）,硫色素反应,（四）,嘧啶环,噻唑环,（五）盐酸根,呈氯化物的反应，用于鉴别。,ChP,鉴别试验,二、,（一）,硫色素反应,硫色素,2H,VitB,1,H,+,H,+,H,+,H,+,（二）,沉淀反应,S元素反应,Cl,-,反应,（三）,其他反应,(,),瘆,緘,緘,緘,緘,緘,2,1,PbS,NaS,VitB,NO,3,Pb,NaOH,三、,含量测定,喹那啶红亚甲蓝（紫红天蓝）,（一）,非水溶液滴定法,反应摩尔比为,1：2,UV法,（二）,片剂、注射剂,=421,（每片）相当于标示量的%=,A=ECL,规格,g/片,g/100ml,g,ChP,W,E,A,%,cm,D,100,1,1,磢,%,100,标示量,平均片重,（每ml）相当于标示量的%=,规格,g/ml,ml,%,V,E,A,%,cm,100,1,100,1,1,磢,磢,磢,标示量,稀释倍数,畗,（三）,硫色素荧光法,原理,1、,荧光,硫色素,异丁醇,铁氰化钾,緘,緘,畗,緘,緘,緘,緘,畗,1,VitB,NaOH,特点,2、,（1）灵敏度高，线性范围宽,（2）代谢产物不干扰，适用于,体液分析,第五节 维生素C,L抗坏血酸,1、易溶于水,2、水溶液呈酸性,结构与性质,一、,（一）,溶解性,二烯醇结构,二酮基结构,二烯醇结构,（二）,还原性,有活性,有活性,无活性,糖类的显色反应,50,结构与糖类相似,（三）,具糖的性质,C,3,OH的,pKa=4.17,C,2,OH的,pKa=11.57,酸性,（四）,一元酸,L(+)抗坏血酸,活性最强,手性C（C,4,、C,5,）,（五）,光学活性,*,*,与碱反应,（六）,水解性,与氧化剂的反应,（一）,鉴别试验,二、,去氢抗坏血酸,緘,緘,畗,緘,O,VitC,1、与AgNO,3,反应,2、与2，6-二氯靛酚反应,(ChP2000),氧化型,玫瑰红色,还原型,蓝色,OH,(ChP2000),（,玫瑰色）,（无色）,3.其他氧化剂的反应,：,亚甲蓝或高锰酸钾 试剂褪色碱性酒石酸铜 砖红色沉淀磷钼酸 钼蓝,糖类的反应,（二）,或盐酸,50,吡咯,USP,（蓝色）,(糠醛),（戊糖）,50,(吡咯),UV,（三）,BP,0.01mol/L HCl,三、杂质检查,1.溶液的澄清度与颜色：有色杂质,分光光度法2.铁、铜离子：原子吸收分光光度法,指示剂 淀粉指示液,原理,1、,碘量法,（一）,含量测定,四、,H,+,取本品约0.2g，精密称定，加新,沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶,解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴,定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝,色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液,(0.1mol/L)相当于8.806mg的C,6,H,8,O,6,方法,2、,（1）酸性环境 d.HCl,（2）新沸冷H,2,O,减慢VitC被O,2,氧化速度,讨论,3、,（3）立即滴定,赶走水中O,2,减少O,2,的干扰,（4）附加剂干扰的排除,片剂 滑石粉 过滤,注射剂 抗氧剂,丙酮,甲醛,Na,2,SO,3,NaHSO,3,Na,2,S,2,O,3,Na,2,S,2,O,5,C,H,H,O,O,a,S,3,a,S,O,+,H,2,N,H,O,N,2,2,5,2,H,O,N,H,C,O,S,3,a,2，6-二氯靛酚钠滴定法法,（二）,USP,JP,原理,1、,酚亚胺,二氯靛酚,緘,緘,畗,，,-,6,2,VitC,自身指示终点法,方法,2、,（2）快速滴定 2min内,（1）酸性环境 HPO,3,-HAc,稳定VitC,防止其他还原性物质干扰,（3）剩余比色测定,（定量过量）,（测剩余染料）,讨论,3、,（4）缺点,需经常标定,贮存一周,不稳定,干扰多,氧化力较强,公元前3500年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来,的维A。,1600年-医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。1747年-苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维C。1831年-胡萝卜素被发现。1905年-甲状腺肿大被碘治愈。1911年-波兰化学家丰克为维生素命名。1915年-科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的,1916年-维生素B被分离出来。1917年-英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是,缺乏维D引起的。,维生素发展史,1920年-发现人体可将胡萝卜转化为维生素A。,1922年-维E被发现。,1928年-科学家发现维B至少有两种类型。,1933年-维E首次用于治疗。,1948年-大剂量维C用于治疗炎症。,1949年-维B3与维C用于治疗精神分裂症。,1954年-自由基与人体老化的关系被揭开。,1957年-Q10多酶被发现。,1969年-体内超级抗氧化酶被发现。,1970年-维C被用于治疗感冒。,1993年-哈佛大学发表维生素E与心脏病关系的研究结果。,返 回,练习与思考,A型题,1.维生素B,1,的鉴别方法是,A.三氯化铁反应 B.硫色素反应,C.柯柏反应,D.与碱性酒石酸铜试液反应,E.双缩脲反应,2.维生素E中国药典规定的含量,测定方法为,A.非水溶液滴定法,B.旋光法,C.HPLC法,D.紫外分光法,E.GC法,B型题,A。亚消基铁氰化钠反应 B.硫色素反应,C.硝酸反应 D.三氯化锑反应,E.硝酸银试液的反应,1.维生素C,2.维生素E,3.维生素B,1,4.维生素A,E,C,B,D,X型题,1.用碘量法测定的药物有,A.醋酸地塞米松,B.丙酸睾酮,C.维生素C,D.硫酸阿托品,E.维生素C注射液,返 回,2.可用紫外分光光度法测定含量的,药物有,A.维生素A丸剂,B.丙酸睾酮,C.维生素A,D.硫酸阿托品,E.维生素B,1,片,