血吸虫病免疫诊断技术规范.ppt

,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,血吸虫病免疫诊断技术,-,现场应用技术规范,一、目前常用的血吸虫病免疫诊断类型与方法,1),凝集反应,直接凝集试验,间接凝集试验,正向间接凝集试验,-,间接红细胞凝集试验（,IHA,）,反向间接凝集试验,间接凝集抑制试验,2),沉淀反应,环卵沉淀试验（,COPT,）,3),免疫电泳技术,经典的免疫电泳技术,对流免疫电泳,酶标记抗原对流免疫电泳,双向酶标对流免疫电泳,免疫印迹技术,4),免疫标记技术,酶免疫测定,-,酶联免疫吸咐试验（,ELISA,）,免疫荧光法,放射免疫测定法,免疫胶体金技术,-,斑点金免疫渗滤试验（,DIGFA,渗滤法）,免疫胶体染料试验,-,胶体染料试纸条试验（,DDIA,层析法）,化学发光免疫分析,二、未稍采血（塑料管法）操作规程,1,采血部位,通常取手指或耳垂。耳垂末梢血循环较差，受气温影响较大，冬季最好不用；由于耳垂采血痛感较轻，病人容易接受，可先充分按摩，改善耳垂末梢循环。手指采血应选择无名指。,2,采血器材,一次性三棱针或弹簧刺血针、,75%,的酒精、无菌脱脂棉球、聚乙烯塑料管（直径,2mm,，长,8cm,）、镊子、酒精灯等。,3,采血方法,1,）以手指按摩采血部位，使局部充血，再用,75%,酒精棉球消毒皮肤。,2,）待干后用左手固定采血部位，右手持消毒针迅速刺入皮肤,2-3mm,，取,出刺针，血液即自行溢出。如血流不畅，可于四周稍加压力。,3,）用消毒干棉球擦去第一滴血液，以后流出的血即可采用。,4,）用塑料管进血口靠近血滴让血液自行流入管内，采集,3,cm,血液,(,一次检测,),。,5,）采血完毕，刺处用消毒棉球拭擦干净。,6,）采血后的塑料管将进血端留一小段空隙，靠近酒精灯烧熔管口，用镊子轻,轻夹住已基本溶化的采血管进血端约,10,秒,将进血端牢牢封住,贴上标签,。,7,）塑料管封口端朝下垂直于容器中，待血清自然析出或离心后，剪去塑料管之,血球部分，将血清移至中部，,用于检测。或两端封口后放冰箱保存备用,。,4,注意事项,采血部位要严格消毒，做到一人一针；采血针忌用注射针头；采血针刺入速度要迅速；有炎症部位不能采血；采血时切忌用力挤压；采血后伤口继续出血应用干棉球压迫；,用塑料管收集血液时应尽量避免空气进入管内,;,如果空气进入管内可将塑料管的另一端位置提高,以排除空气,然后继续采集血液到指定位置,可用普通离心机低速,(1000-1500,转,),离心,5,分钟,以分离血清，防止离心过速或过长。,塑料管封口要严密，防止血液流失。,用剪刀剪塑料管时应保持剪刀的清洁，避免交叉污染,。,分离后的血清（或血浆）样品可置冰箱保存,。,实验废弃物应按照相关规定处理，严禁随意丢弃,。,三、间接红细胞凝集试验,(IHA),操作规程,1,基本原理,抗原吸附于经适当处理的红细胞表面，使红细胞致敏。致敏红细胞与病人血清中特导性抗体（抗,SEA,特异性抗体）相遇时，在适宜的条件下（电解质、温度、,pH,），抗原与特导性的抗体相结合，使红细胞出现肉眼可见的凝集反应。为正向间接凝集。,器材：,1.,移液器,100l,一支、,1000l,（,1ml,）一支、配套吸头、吸头盒及移液器架等,2.,“,V,”,型反应板一块、白纸一张、记号笔,3.,旋转震荡器一台,4.,温箱一台,5.,实验记录纸、记录笔、,废弃物杯,5),实验准备要求：,待检血清（或血浆）要新鲜，,不能有溶血或混有红细胞,。,应选择“,V”,型，底角为,90,度的,反应板,。,不要选择“,U”,型及不同底角的“,V”,型反应板。,“,V”,型反应板要清洁、不潮湿，反应孔完好光洁。,试剂盒在有效期内,4,实验操作步骤,1),样本编号,，从左到右按,1,n,号排列。,2,）取一块,96,孔“,V”,型反应板,横向平放纵向使用,。血凝反应板编号：,1,）横,向（行）从左到右编号：,1,、,2,、,3,、,、阴、阳；,2,）纵向（列）从上,到下编号：,1:5,、,1:10,、,1:20,、,1:40,。,3,）稀释对照品：阴性对照、阳性对照品各,加,100l,蒸馏水稀释溶解,，加盖混,匀后放回原处备用。,4,）配置致敏红细胞悬液：启开安瓶，以每支冻干致敏红细胞加,1ml,致敏红细,胞稀释液,（蒸馏水、红瓶）,稀释混匀备用。,5),启开标本稀释液,（生理盐水、兰瓶）,安瓶。,6,）调节移液器为,100l,。血凝反应板的第,1,行（横向）第,1,孔各加标本稀释液,100l,。,7,）调节移液器为,25l,。血凝反应板的纵向（列）第,2,4,孔各加标本稀释液,25l,。,加液完毕，检查每孔是否有漏加孔或加双倍孔，并及时纠正。,8,）于第一排第,1,孔加,1,号待测血清,25l,，加完血清（盖上盖子）放回原处，充分混匀,（吸打,4,次，混匀吸打在第一档进行，移液吸头不能触碰反应孔 底壁）,使血清成,15,稀释。,（加血清时要核对一下样本编号防止加错 位）,。,9,）在第,1,孔吸出,25l,于第,2,孔（纵向），同上混匀使血清成,1:10,稀释。后吸出,25l,于第,3,孔（纵向），同上混匀使血清成,1:20,稀释。后吸出,25l,于第,4,孔纵向），同上混匀使血清成,1:40,稀释,后吸出,25l,弃去，自动卸去吸头。同上操作进行第,2,n,号样本、阴性对照、阳性对照倍比稀释。倍比稀释 一个样本一个吸头。,10,）,全部样品（及对照）倍比稀释完成后，调节移液器为,75l,，然后在第一行（纵,列第一孔）吸取,75ml,弃去，一个样本一个吸头。,11),检查每孔液面是否在同一高度，否则应及时纠正。,12,）充分混匀致敏红细胞悬液,（每加若干次要混匀一次），,然后在每孔加致敏红细胞,悬液,25l,（原则上以每个样品为单位即列为单位加液），不需换吸头，但不能,触碰反应板，自动卸去吸头。,13,）,先试一试震荡器，正常运转后将反应板震摇,1,2,分钟，盖上盖子，,置,37(,水,浴,)30min,后下垫白纸观察结果。并做好记录。,14,）记录结果后，,实验台面清理：未使用试剂、未使用吸头、移液器（刻度复原至最,高档）等放回原处；实验废物放入规定的收集器内。,5,结果判定,1,）首先应观察对照管：阴性对照应不出现凝集现象，阳性对照应出现,凝集现象，结果方可成立。如出现异常则说明实验操作有误或血球,本身有自凝现象，试验结果不能成立。,2,）根据红细胞凝集程度以,“”，“”，“”，“”,记录结果，以呈“”凝集的血清最高稀释度作为血清的效价,以效价,1:10,作为阳性判断标准。,3,）报告形式：,1:40,阳性（）,4,）血凝反应强度的判定如下：,：红细胞全部下沉在孔底，形成肉眼可见紧密、边缘光滑的小圆点。,：多数红细胞下沉在孔底形成圆点，周围可见少量凝集红细胞，肉眼见周边模糊,(,或中间出现较为明显的空白点,),。,：孔底中心可见少量红细胞下沉的小圆点，多数凝集红细胞在孔底周围形成小薄层,：红细胞形成薄层凝集,边缘呈现不规则的皱褶。,6,注意事项,1,）,结果观察时不能移动反应板，如条件限制则要非常小心慢移，切勿摇动反应板，以免凝集分,散，影响结果判断。结果观察时下垫白纸。,2,）,血凝板以,96,孔“,V”,型底角应为,90,度有机玻璃板为适宜，确保所用器材清洁,血凝板清洗不能,用毛刷、移液吸头不能触碰反应孔,以避免损坏反应孔,造成假阳性。,3,）待测血清或血浆不能混有红细胞或被细菌污染。标本不能及时检测可在内,4,度保存,2,3,天。长时间保存应放冰箱冻存。,4,）结果判断的时间与温度有关，,应根据作业指导书在相同温度相同时间条件下判断,。,5,）使用加样器加样，每测,1,个样本要更换滴头，在倍比稀释待检血清中，混匀时应避免产生气泡,（混匀吸打都在第一档进行）而影响吸量准确性。,6,）试剂盒于,2,8,避光保存。自检定合格之日起有效期为,2,年。醛化红细胞能耐,60,加热，并可,反复冻融不破碎，在,4,可保存,3,6,个月，在,20,可保存一年以上。从冰箱取出使用时先要,放室湿平衡一定时间。,1,基本原理,血吸虫病患者血清中存在的抗血吸虫抗体（,IgG,）与胶体染料标记的日本血吸虫可溶性虫卵抗原（,SEA),相结合，形成染料标记的抗原,抗体复合物，这复合物通过层析技术与固定在硝酸纤维膜上的抗人,IgG,（二抗）相结合，形成可见的染色带，即为阳性反应。,四、胶体染料试纸条法（,DDIA,）操作规程,2,实验操作准备,1),穿戴好工作服、口罩和手套，做好基本实验准备工作。,2,）实验试剂和器材检查和摆放。要求试剂批号与有效期符合产品,说明；器材符合相关质量要求。,3),检查完毕后，按照实验常规要求摆布好实验试剂和器材。,4,）实验试剂和器材,实验试剂盒：,1.,染料标记液,2.,试纸条,3.PVC,小杯,4.,使用说明书,器材：,1.,移液器,50l,一支、吸头、吸头盒及移液器架等,2.PVC,小杯架、废弃物杯,3.,实验记录纸、记录笔、记号笔,5,）要求：,1,待检血清要新鲜，不能有溶血或混有红细胞,3,实验操作,1,）样本编号,1,n,号，并从左到右按,1,n,号排列。,2,）取,PVC,小杯架子，,装上,PVC,小杯（下垫白纸）,3,）编号：横向（行）（标在小杯架子上）从左到右编号：,1,、,2,、,3,、,。做好相应,实验记录。,4,）,轻轻颠倒混匀染料标记液，确保沉淀完全被混悬。,5,）,调节移液器,为,50l,。根据样品数每小杯加,50l,染料标记液至,PVC,小杯中。,加液完毕，检查每孔是,否有漏加孔或加双倍孔，并及时纠正。,6,）调节移液器为,20l,。,分别加,20l,待检血清（加血清时要核对一下样本编号防止加错位），每个样,本缓缓混匀（吸打,4,次），,混匀时应避免产生气泡。整板样本加完后，,检查每孔是否有漏加孔或加,双倍孔，并及时纠正。,7,）将整板放手上轻轻震荡，,加血清一分钟（含混匀时间）后加试纸条。,8,）取试纸条插入小杯中，待小杯内反应液,吸干后,观察结果,（,15,分钟）,。,9,）,在光线充足但非强光下观察，正面面向试纸条观察,（阳性检测带一般 在对照带下,0.9cm,处，插入杯底斜靠时一般在,PVC,小杯上沿略上处，防 止误判），观察结束放回原处，记录结果。,10,）,实验台面清理：,未使用试剂、未使用吸头、移液器（刻度复原至最高 档）等放回原处；实验废物放入规定的收集器内。,4,要求,1,）,标记液混均要轻，倒置时没有沉淀物后再颠倒,2,次；,2,）一个样品一支吸头；加血清时要集中注意力,切不可漏加或跳管或重叠；,3,）取试纸条时，,用手捏住吸水垫（较长的一端），严禁触摸检测膜或倒捏,。,4,）试纸条一定要,入杯底,。,5,）试纸条面向自己排列整齐、一次放好，,在结果观察前严禁触碰试纸条和小杯架，,也不要做台面清洁工作，防止试纸条顷倒；,6,）观察结果时要注意光线、方向，,不要刻意判断，防止将“固相二抗”的折光误判阳性,。,5,结果判断,阳性反应：,1,）检测带和对照带都出现紫蓝色带。,2,）,检测带出现深紫蓝色带（反应强），对照带显色减,弱甚至不显色。,阴性反应：对照带出现紫蓝色带而检测带无显色带。,无效：检测带和对照带都不出现显色带。,6,储存条件及有效期,试剂盒保存于,4-8,，防止冷冻。有效期,6,个月。,五、酶联免疫吸咐试验（,ELISA,）操作规程,1,基本原理,1,),抗原（日本血吸虫可溶性虫卵抗原,SEA,）以物理性地吸附于固相载体（聚苯乙烯或聚氯乙烯塑料板）表面（包被），并保持其,免疫,学活性；,2),加待检标本（有相应的特异性抗体）（一抗），即与固相上抗原结合，形成抗原抗体复合物。,3),加酶标记的二抗形成,Ag-Ab1-Ab2*HRP,三联复合物（第二抗体通过共价键与酶连接形成酶结合物,-,辣根过氧化物酶（,HRP,）标记结合物），而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；,4),洗涤后加底物和显色剂（,H,2,O,2,的邻苯二胺（,OPD,）或四甲基联苯胺（,TMB,），酶结合物中的酶再催化底物和显色剂反应，产生显色反应。,5),根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。,2,实验操作准备,1),穿戴好工作服、口罩和手套，做好基本实验准备工作。,2),实验试剂和器材检查和摆放。要求试剂批号与有效期检查符合产品说明；器材符合相关质量要求。,3),检查完毕后，按照实验常规要求摆布好实验试剂和器材。,4,）实验试剂盒,(,康百得,),：,1,）预包被板 （,SEA,预包被聚苯乙烯或聚氯乙烯塑料板）,48T/96T,2,）酶结合物（,1,号液）（辣根过氧化物酶（,HRP,）标记结合物）,1,支,3,）洗涤液（,2,号液）,1,支,4,）底物（,3,号液）（四甲基联苯胺（,TMB,）,1,支,5,）显色剂（,4,号液）（,H2O2,）,1,支,6,）样本稀释液（,5,号液）,1,支,7,）终止液（,6,号液）（硫酸（,H2SO4,）,1,支,8,）阳性对照品（冻干品）,1,支,9,）临界对照品（冻干品）,1,支,10,）阴性对照品（冻干品）,1,支,11,）使用说明书,1,份,5,）实验器材：,移液器,20l,、,100l,、,1000l,各一支、,200l,、,1000l,吸头及吸头盒和移液器架,样品稀释板,酶标板架,塑料洗瓶（装蒸馏水）,恒温水浴箱一台,吸水纸、废弃物杯,实验记录纸、记录笔、记号笔、剪刀,6,）血清样本检查，要求：,1,待检血清要新鲜，不能有溶血或混有红细胞或脂血或严重黄胆或已污染，,3,操作程序,1,）样本编号：样本编号,1,n,号，排列，并做好记录。,2,）样品稀释板编号：选取一块样品稀释板横向平放纵向使用。,横向（行）从左到右编号：,1,、,2,、,3,、,.,3,）样本稀释：,样品稀释板内每孔加入样本稀释液（,5,号液）,500l,，根据样本数一次全部加完。,分别加入待检测血清,5l,（待检测血清按,1,：,100,稀释），充分混匀（吸打,4,次）。,4,）阴性、临界、以及阳性对照每支加入,300l,蒸馏水复溶，充分溶解后放置样品稀释板边以阴性、临界、阳性对照品排列。,5,）加样反应：,取预包被板放入板架内，安好，标记好或安排好样品与对照位置，并做好记录。,样本检测孔第,1-n,孔每孔分别加已稀释样本血清,100l,，取样时要将样品吸打几次混均后再吸。,每板最后依次为阴性、临界、阳性及空白对照孔，分别加入复溶后的阴性、临界、阳性对照液及样本稀释液（,5,号液）各,100l,。,6,）置,37,水浴箱避光反应,30,分钟后甩去孔内液体。,7,）洗涤：,每孔加洗涤液（,2,号液）,1,滴,(,滴瓶垂直加液，下同,),，立即用蒸馏水注满（首次加蒸馏水时尽量不要溢出孔外，以免抗体溢出到临孔），静置,30,秒后甩去，再直接用蒸馏水洗涤四次，每次均需静置,30,秒。最后一次甩去拍干。,8,）加酶反应,:,除空白对照孔外其余每孔加酶结合物（,1,号液）,2,滴，置,37,水浴箱避光反应,30,分钟后甩去孔内液体，如上洗涤，拍干（关健操作：要洗涤到位并拍干，否则可能产生假阳性）。,9,）显色反应：,加底物（,3,号液）,1,滴。,加显色剂（,4,号液）,1,滴，混匀（轻轻敲打）。,置,37,水浴箱避光显色,10,分钟。初步观察，做好预记录。,加终止液（,6,号液）,1,滴，混匀，终止反应（加终止液后蓝色会变为黄色，无色的仍然无色）。,置白纸上观察结果。,4,结果判断,1,）肉眼观察：,空白无色，阴性对照无色或接近无色，临界对照呈浅黄色，阳性对照呈明显黄色，表示实验有效。,待检孔无色或呈浅于临界对照孔的微黄色表示该标本为阴性，待检孔呈深于临界对照空的黄色表示该标本为阳性。,2,）仪器判断：,以空白对照调零，用酶标仪于,450nm,（,TMB,）（,620nm,作参比波长）读取,OD,值，待检孔,OD,值大于阴性对照,P/N2.1,倍者为阳性。当阴性对照,OD,值低于,0.05,时按,0.05,计算。,3,）结果记录,结果判断,目测判读结果,B1-7,10-11,D1-2,为正常血清，,B8,、,9,12,及,D3,、,4,为血吸虫病人血清；,D5,阴参，,D6,临界，,D7,阳参，,D9,空白,病人血清,阴参,临界,阳参,正常人血清,31,结果判断,加,2M H,2,SO,4,后,32,ELISA,结果,B1-7,10-11,D1-2,为正常血清，,B8,、,9,12,及,D3,、,4,为血吸虫病人血清；,D5,阴参，,D6,临界，,D7,阳参，,D9,空白,测定,OD,值,33,5,注意事项,1,）试剂盒在,2-8,保存，冰冻失效、温度过高保存活性降低。每次取出时先平衡至室温后使用。滴瓶每次用后一定要将盖拧紧，各瓶盖之间切不可混用。各试剂盒之间不可混用。,2,）洗涤时将蒸馏水加满孔内，每次停放,30,秒钟后，甩去孔内液体。禁用自来水等其他水源。,3,）为提高实验的可比性建议使用仪器判读结果，并对阴性对照测复孔以减少误差。,4,）洗涤要彻底，特别是酶结合物反应后，洗涤一定要充分；,5,）,OPD,对光非常敏感，应避光反应；结果应尽快检测,6,）酶标反应均应在湿盒中进行。,六、斑点免疫金渗滤法（,DIGFA,）操作规程,1,试验原理,将抗原（日本血吸虫可溶性虫卵抗原,SEA,）包被于硝酸纤维素薄膜,(,微孔滤膜,),上,滴加在膜上的待检血清通过滤膜时，其中的抗体与膜上的抗原相接触，起到亲和层析的浓缩，形成抗原抗体复合物。然后，红色胶体金颗粒标记的第二抗体所形成的金标探针，与复合物中的抗体结合，滞留在反应板上，形成肉眼可见的红色斑点。,3,实验操作准备,1),穿戴好工作服、口罩和手套，做好基本实验准备工作。,2),实验试剂和器材检查和摆放。要求试剂批号与有效期检查符合产品说明；器材符合相关质量要求。,3),检查完毕后，按照实验常规要求摆布好实验试剂和器材。,4,）实验试剂盒：,1,）预处理空白反应板,(,含质控点,),2,）洗涤液,3,）金标抗体液,4,）使用说明书,5,）器材：,1.,移液器,50l,、,200l,吸头、吸头盒及移液器架,2.,实验记录纸、记录笔、记号笔。,6,）被检样血清检查，要求：,本方法对待检血清要求高，要仔细检查，详见注意事项。,4,操作程序,1,）将试剂盒、试剂取出，置予室温下平衡,2,）样本编号：样本编号,1,n,号，从左到右按,1,n,号排列，并作好记录。,3,）取,n,块预处理空白反应板,(,含质控点,),放好并编号。,4,）按顺序每次取,2,块板，依次在反应孔中间位置加入,2,滴洗涤液，待液体完全渗透,5,）依次在每块板反应孔正中间垂直加入,25l,新鲜特检血清（对应编号），待血清完全渗透。,（关健操作：,1,、如没完全渗透就加液可呈假阴性，但过干后再加液则呈假阳性。,2,、完全渗透的标准是膜上特别是孔周边折光液体消失）,6,）依次在每块板加入,2,滴洗涤液，待液体完全渗透。,7,）依次在每块板加入,4,滴金标抗体液，待液体完全渗透。,8,）依次在每块板加入,2,滴洗涤液，待液体完全渗透，观察结果。,9,）按顺序取下一轮,2,块板，同上进行第,3,和第,4,份、第,5,和第,6,份、,样本检测。,10,）样品全部检测完成后复查结果（但必须控制在,1,小时内），并记录。,11,）清理台面，移液器调至最高档。,5,结果判断,判断结果的时间应以完成操作后，即时观察为准。部分品种在放置数小时或,1,日后，结果会发生变化,1,）出现两个红色圆点为阳性；,2,）出现一个红色圆点为阴性；,3,）无圆点（呈白板状）表示试剂失效或操作有误，应当重新测试,6,注意事项,1,）本试验对血清标本要求高，最好应用新鲜血清。测定血清标本要求离心分离以消除血脂的影响,(4000,转分，,15,分钟或,8000,转,l,分，,5,分钟,),，不宜用未稍采血（塑料管法）样本。吸取血清标本时，应避开血脂、纤维蛋白或沉淀等，取其清亮透明部分。,2,）试剂盒从冰箱取出后应恢复至室温才能使用，试剂盒最佳使用温度是,30,37,。,3,）以,2,个样本为一批依次进行操作。血清样品加样时，应在反应孔的正上方垂直加样。,4,）待反应板上的液体完全渗透后，立即加入下一种液体。既要防止渗透不全，又须避免反应膜干枯（是本试验操作的关键）。在加液时应避免出现气泡，尤其是金标液。,5,）判断结果以即时观察为准若较长期保存，将反应板正面朝下放置即可。,6,）于,2-8,冷藏保存，切勿冷冻应当避免强烈光照和高温。检测完毕后,未用的反应板要立即放入自封袋中密闭冷藏。,七、移液器的使用规程,1,量程的调节,在调节量程时，逆时针或顺时针按照正常的调节方法，旋转旋钮即可,;,在该过程中，,千万不要将按钮旋出量程,，否则会卡住内部机械装置而损坏了移液枪。,2,枪头,(,吸液嘴,),的装配,方法是将移液枪,(,器,),垂直插入枪头中，稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合。如果是多道,(,如,8,道或,12,道,),移液枪，则可以将移液枪的第一道对准第一个枪头，然后倾斜地插入，往前后方向摇动即可卡紧。,3,移液的方法,移液之前，要保证移液器、枪头和液体处于相同温度。,吸取液体时，移液器保持竖直状态，将枪头插入液面下,(,浸入的深度为：,P20,、,P100,、,P200,小于或等于,2,毫米，,P1000,小于或等于,3,毫米。,在吸液之前，可以先吸放几次液体以润湿吸液嘴,(,尤其是要吸取粘稠或密度与水不同的液体时,),。这时可以采取两种移液方法。,一是前进移液法。用大拇指将按钮按下至第一停点，然后慢慢松开按钮回原点。接着将按钮按至第一停点排出液体，稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体。最后松开按钮。,二是反向移液法。此法一股用于转移高粘液体、生物活性液体、易起泡液体或极微量的液体，其原理就是先吸入多于设置量程的液体，转移液体的时候不用吹出残余的液体。先按下按钮至第二停点。慢慢松开按钮至原点。接着将按钮按至第一停点排出设置好量程的液体，继续保持按住按钮位于第一停点,(,千万别再往下按,),，取下有残留液体的枪头，弃之。,4,常见的错误操作,1),吸液时，移液器本身倾斜，导致移液不准确,(,应该垂直吸液，慢吸慢放,),。,2),装配吸头时，用力过猛，导致吸头难以脱卸,3),平放带有残余液体吸头的移液器,(,应将移液器挂在移液器架上,),。,4),用大量程的移液器移取小体积样品,(,应该选择合适量程范围的移液器,),。,5),直接按到第二档吸液,(,应该按照上述标准方法操作,),。,6),卸去吸头：卸掉的吸头一定不能和新吸头混放，以免产生交叉污染。,5,移液器,(,移液枪,),维护保养时的注意事项,1,）,如不使用，要把移液枪的量程调至最大值的刻度，,使弹簧处于松弛状态以保护弹簧。,2,）最好定期清洗移液枪，可以用肥皂水或,60,的异丙醇，再用蒸馏水清洗，自然晾干。,3,）高温消毒之前，要确保移液器能适应高温。,4,）,校准是可以在,20-25,度环境中，通过重复几次秤量蒸馏水的方法来进行,。,5,）使用时要检查是否有漏液现象。方法是吸取液体后悬空垂直放置几秒中，看看液面是否下降。如果漏液，原因大致有一下几方面：,1,、枪头是否匹配；,2,、弹簧活塞是否正常；,3,、如果是易挥发的液体,(,许多有机溶剂都如此,),，则可能是饱和蒸汽压的问题。可以先吸放几次液体，然后再移液。,谢谢,!,2009,年,无锡,