培养基的制备和高压蒸汽灭菌.ppt

*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,培养基的制备和高压蒸汽灭菌,2007.11,目的与要求,1,、了解培养基的配制原理，掌握制备培养基的过程。,2,、学习高压蒸汽灭菌操作技术。,3,、初步掌握划线和涂布平板的技术。,4,、了解抗生素对细菌的抑制作用。,配培养基,灭菌、倒平板,划线、涂布平板,抑菌圈实验,实验流程,任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理,培养基,培养基（,medium),：,由人工配制的适合微生物生长、繁殖或适合积累代谢产物的营养基质。,在微生物学研究和生长实践中，配置合适的培养基是一项最基本的要求。,培养基,按化学成分来分类,按物理状态来分类,按功能进行分类,天然培养基,合成培养基,半合成培养基,固体培养基,液体培养基,半固体培养基,脱水培养基,基础（本）培养基,营养（加富）培养基,完全培养基,选择培养基,鉴别培养基,培养基的配制过程,计算用量,:,200ml,固体培养基,称量：托盘天平,溶解：自来水,调,pH,：自然,pH,灭菌：,一般培养基，,121,0,C,15-30min,：,20min,；,含糖培养基：,112,0,C,15-30min,；,易产生沉淀的物质：分别灭菌后再混合,倒平板,3g/L,牛肉膏,10g/L,蛋白胨,5g/L,NaCl,2%,琼脂粉,灭菌,灭菌（,Sterilization,）,是指利用物理、化学等手段杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子的过程。,灭菌方法,化学药品灭菌,辐射灭菌,过滤除菌,加热法,干热灭菌,湿热灭菌,火焰灼烧,热空气灭菌,煮沸消毒法,常压蒸汽灭菌法,高压蒸汽法,高压蒸汽灭菌锅的构造,Be careful!,高压蒸汽灭菌锅的使用,待,灭菌物品的包扎,装锅、加水,加盖,（,对角线均匀拧旋）,升温、排气,（放大气,5min,）,恒温,切断电源、冷却,开锅取物,121,20,min,Attention!,倒平板,融化的琼脂培养基,冷却至,50,左右,(,以手背能忍受的温度为准,),平板划线的基本程序,灭菌接种环,沾取菌液,接种,灭菌接种环,杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本,杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境,连续划线法,灭菌过的移液管,吸取菌液,0.1ml,滴在培养皿中央,用灭菌的涂布棒均匀涂布：,将菌悬液先沿一条直线轻轻地来回推动,使之分布均匀，,然后改变方向沿另一垂直来回推动，平板内边缘处可改变方向用三角玻扒再涂布几次。,三角铁扒,平板涂布的基本程序,涂布好的平板,滤纸片,抑菌圈实验,青霉素,每组,4,人,需要灭菌的东西：,固体培养基,200ml,（,2g,蛋白胨，,0.6g,牛肉膏，,1gNaCl,，,4g,琼脂，自来水,200ml,，自然,pH,）,培养皿,10,个（每人倒平板两个，一个划线，一个涂布；涂布的那个用于抑菌圈实验）,1ml,移液管,4,支,(,每人,1,支）,滤纸片，每人两片，每组需剪,10,片，装入培养皿中灭菌,Ready?,GO!,思考题,1,、总结一下，配制培养基应注意哪些问题。,2,、高压灭菌的关键是什么？,3,、加入青霉素滤纸的涂布平板究竟会产生什么样的效果，为什么？,Game Over!,（,1,）加入适量自来水于灭菌锅中（至水位线）。,（,2,）放入需要灭菌的东西。,注意：不要摆得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果。,（,3,）加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气（对角线均匀拧旋）,（,4,）打开放气阀，打开电源，自开始产生大气后,5,分钟（此时蒸汽锅内的冷空气由排气阀排尽），关紧放气阀，让温度随蒸汽压力上升而上升，当达所需压力时（即温度上升到,121,），控制热源维持所需时间（,20,分钟），然后停止加热，让其自然冷却。,注意：应用此法灭菌是否彻底的一个重要关键是在压力上升之前，必须将锅内的冷空气完全排尽。,（,5,）待压力降至,0,磅时，打开排气阀，再打开锅盖，取出灭菌物。,注意：压力未降至,0,磅时，切勿打开锅盖，否则突然降压，招致培养基沸腾，沾湿棉塞，甚至冲出管外。,具体操作步骤：,