过氧化氢酶活性 演示文稿.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,过氧化物酶活性测定,一、实验目的：,学习和掌握过氧化物酶,(POD),活性测定的原理及方法。,二、实验原理,:,在通常情况下，需氧生物在还原氧至水的过程中会产生氧气，植物细胞中电子传递不通畅时，会产生一系列活性氧（超氧阴离子自由基，羟自由基，单线态氧，过氧化氢），会直接或间接启动膜脂过氧化作用，导致膜的损伤和破坏。,过氧化物酶广泛存在于植物体中，是生物体内存在的一种防护氧自由基对细胞膜系统伤害的酶，在细胞膜产生过氧化物的破坏有保护作用，在植物生长发育过程中它的活性不断发生变化。,过氧化物酶能催化过氧化氢氧化酚类，产物为醌类化合物,此化合物进一步缩合或与其他分子缩合，产生颜色较深的化合物。本实验是以邻甲氧基苯酚（即愈创木酚）为过氧化物酶的底物，在该酶存在下，,H2O2,可将邻甲氧基苯酚氧化成红棕色的,4-,邻甲氧基苯酚，其反应为：,该红棕色的物质在波长,470nm,处有最大光吸收，故可通过测,470nm,处的吸光度变化来测定过氧化物酶的活性。,器材与试剂,1,实验仪器：分光光度计，离心机，秒表，天平，研钵。,2,实验试剂：,50mmol/L,磷酸缓冲液,50mmol/L,愈创木酚溶液，,2%,过氧化氢。,3,实验材料：小麦（营养液，盐胁迫）。,实验步骤,1.,粗酶液的提取 称取植物材料,0.5g,，加,5ml50mmol/L,磷酸缓冲液,于研钵中研磨成匀浆，以,4000r/min,离心,15min,，残渣再用,5ml,磷酸缓冲液,提取一次，合并两次上清液,25ml,容量瓶定溶，保存在冷处。,2.,酶活性的测定,取光径,1cm,比色杯,2,只，于,1,只中加入,磷酸缓冲液,1ml,50mmol/L,愈创木酚溶液,1ml,，,2%,过氧化氢,1ml,，作为校零对照；另一只加入,50mmol/L,愈创木酚溶液,1ml,，,2%,过氧化氢,1ml,，上述酶液,1ml,（如酶活性过高可适当稀释），立即开启秒表计时，于分光光度计,470nm,波长下测量,OD,值，每隔,1min,读数一次。以每分钟,OD,变化值表示酶活性大小，即以,A,稀释倍数,（,min,鲜重,g,）表示。,注意事项,酶的提取需要在低温下进行。,