紫外可见分光光度法培训.ppt

单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,紫外可见分光光度法培训课件,2,一、概述,分子光谱,原子核在其平衡位置附近的相对振动,-,振动能级,（,E,v,）,e+,v+,r,e,v,r,物质分子内部三种运动形式,电子相对于原子核的运动-,电子能级（,Ee,）,分子本身绕其重心的转动,-,转动能级（,E,r,）,3,一、概述,分子光谱,e+,v+,r,e,v,r,电子能级,振动能级,转动能级,4,一、概述,分子光谱,r,0.0050.050eV,远红外光谱(分子转动光谱),v,0.05eV,红外光谱(分子振动光谱),e,120eV,紫外可见光谱(分子的电子光谱),电磁波谱,g,-X-,射线,紫外,可见,红外,微波,无线电,200 400 800,3200(nm),波长,真空紫外,近红外,核磁共振,波长越短，能量越高,6,二、,紫外可见光谱,可见吸收光谱：电子跃迁光谱,吸收光波长范围,400780,nm，,主要用于有色物质的定量分析。,紫外吸收光谱：电子跃迁光谱,吸收光波长范围200,400,nm（,近紫外区），可用于结构鉴定和定量分析。,特点,灵敏度高,选择性较好,通用性强,准确度较好,操作简单,价格低廉,1、光的互补性与物质的颜色,最大吸收波长，max,利用紫外光谱可以推导有机化合物的分子骨架中是否含有共轭结构体系,如C=CC=C、C=CC=O、苯环等。,而对于不同物质，它们的吸收曲线形状和max则不同。,另外还有互变异构体，常见的互变异构体有酮烯醇式互变异构，如乙酰乙酸乙酯的酮烯醇式互变异构。,检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理,2）标准对比法：,吸收光谱的波长分布是由产生谱带的跃迁能级间的能量差所决定，反映了分子内部能级分布状况，是物质定性分析的依据。,吸收曲线与最大吸收波长 max,稠环芳烃及杂环化合物,生n 共轭,7,吸收曲线与最大吸收波长,max,用不同波长的单色光照射，测吸光度,二、紫外可见吸收光谱,不同浓度的溶液，测吸光度,8,二、紫外可见吸收光谱,同一种物质对不同波长光的吸光度不同。吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长,max,不同浓度的同一种物质，其吸收曲线形状相似,max,不变。而对于不同物质，它们的吸收曲线形状和,max,则不同。,吸收光谱的波长分布是由产生谱带的跃迁能级间的能量差所决定，反映了分子内部能级分布状况，是物质定性分析的依据。,吸收谱带的强度与该物质分子吸收的光子数成正比，是物质定量分析的依据。,9,有机化合物的紫外可见吸收光谱,分子中外层价电子跃迁的结果（三种）：形成单键的,电子、形成双键的,电子、未成键的,n,电子,分子轨道理论：一个成键轨道必定有一个相应的反键轨道。通常外层电子均处于分子轨道的基态，即成键轨道或非键轨道上。,当外层电子吸收紫外或可见辐射后，就从基态向激发态(反键轨道)跃迁。主要有四种跃迁，所需能量,大小顺序为：,n,n,200,nm）,含有不饱和键的有机分子易发生这类跃迁,C=C;C=C ;N=N ;C=O,有机化合物的紫外-可见吸收光谱分析多以这两类跃迁为基础,*比,n*,跃迁几率大 100-1000 倍,*跃迁吸收强，10,4,n*,跃迁吸收弱，500,13,紫外光谱中常用的术语,生色团：,从广义来说，所谓生色团，是指分子中可以吸收光子而产生电子跃迁的原子基团。但是，人们通常将能吸收紫外、可见光的原子团或结构系统定义为生色团。,14,紫外光谱中常用的术语,助色团,助色团是指带有非键电子对的基团，如-,OH、-OR、-NHR、-SH、-Cl、-Br、-I,等，它们本身不能吸收大于200,nm,的光，但是当它们与生色团相连时，会使生色团的吸收峰向长波方向移动，并且增加其吸光度。,15,生色团,含有,键不饱和官能团,助色团,基团本身无色，但能增强生色团颜色,为含有,n,电子，且能与电子作用，产,生,n ,共轭,184,204,254,270,苯,（*）,苯酚,（,OH,为助色团）,/,nm,紫外光谱中常用的术语,16,紫外光谱中常用的术语,红移与蓝移,有机化合物的吸收谱带常常因引入取代基或改变溶剂使最大吸收波长,max,和吸收强度发生变化:某些有机化合物经取代反应引入含有未共享电子对的基团（-,OH、-OR、-NH,2,、-SH、-Cl、-Br、-SR、-NR,2,）之后，吸收峰的波长将向长波方向移动，这种效应称为红移效应。在某些生色团如羰基的碳原子一端引入一些取代基之后，吸收峰的波长会向短波方向移动，这种效应称为蓝移效应。如-,CH,2,、-CH,2,CH,3,、-OCOCH,3,。,17,红移,max,向长波方向移动,蓝移,向短波方向移动,增色效应,吸收强度即摩尔吸光 系数，,增大的现象,减色效应,吸收强度即摩尔吸光系数，,减小的现象,引入取代基或改变溶剂,紫外光谱中常用的术语,18,无机化合物的紫外可见吸收光谱,过渡金属离子,d,一,d,的,电子跃迁,（,2,）,镧,系和,锕,系离子的,f,一,f,电子跃迁,电荷转移吸收光谱,-,络合物的吸收,在分光光度法中具有重要意义,:,微量组分的定量分析。,当吸收紫外可见辐射后，分子中原定域在金属,M,轨道上电荷的转移到配位体,L,的轨道，或按相反方向转移，这种跃迁称为电荷转移跃迁，所产生的吸收光谱称为荷移光谱。,19,有机化合物紫外-可见吸收光谱,1.饱和烃及其取代衍生物,饱和烃类分子中只含有,键，只能产生,*跃迁。,饱和烃的最大吸收峰一般小于150,nm，,超出紫外、可见分光光度计的测量范围。,饱和烃的取代衍生物如卤代烃，其卤素原子上存在,n,电子，可产生,n,*,的跃迁。,n,*,的能量低于,*。例如，,CH,3,Cl、CH,3,Br,和,CH,3,I,的,n,*,跃迁分别出现在173、204和258,nm,处。氯、溴和碘原子引入甲烷后，其相应的吸收波长发生了红移，显示了助色团的助色作用。,直接用烷烃和卤代烃的紫外吸收光谱分析这些化合物的实用价值不大。但是它们是测定紫外和（或）可见吸收光谱的良好溶剂。,20,2.不饱和烃及共轭烯烃,在不饱和烃类分子中，除含有键外，还含有键，它们可以产生,*和,*两种跃迁。,*跃迁的能量小于,*跃迁。例如，在乙烯分子中，,*跃迁最大吸收波长为180,nm,在,不饱和烃类分子中，当有两个以上的双键共轭时，随着共轭系统的延长，,*跃迁的吸收带 将明显向长波方向移动，吸收强度也随之增强。在,共轭体系中，,*跃迁产生的吸收带又称为,K,带。,有机化合物紫外-可见吸收光谱,21,3.羰基化合物,羰基化合物含有,C=O,基团。,C=O,基团主要可产生,*、,n,*、n,*,三个吸收带，,n,*,吸收带又称,R,带，落于近紫外或紫外光区。醛、酮、羧酸及羧酸的衍生物，如酯、酰胺等。,羧酸及羧酸的衍生物虽然也有,n,*,吸收带，但是，羧酸及羧酸的衍生物的羰基上的碳原子直接连结含有未共用电子对的助色团，如-,OH、-Cl、-OR,等，由于助色团上的,n,电子与羰基双键的,电子产生,n,共轭，导致*轨道的能级有所提高，使,n,*,跃迁所需的能量变大，,n,*,吸收带蓝移至210,nm,左右。,有机化合物紫外-可见吸收光谱,22,4.苯及其衍生物,苯有三个吸收带，它们都是由,*跃迁引起的。,E,1,带出现在180,nm（,MAX,=60，000）；E,2,带出现在204,nm（,MAX,=8000）；B,带出现在255,nm（,MAX,=200）。,在气态或非极性溶剂中，苯及其许多同系物的,B,谱带有许多的精细结构，这是由于振动跃迁在基态电子上的跃迁上的叠加而引起的。在极性溶剂中，这些精细结构消失,当苯环上有取代基时，苯的三个特征谱带都会发生显著的变化，其中影响较大的是,E,2,带和,B,谱带。,有机化合物紫外-可见吸收光谱,23,5.稠环芳烃及杂环化合物,稠环芳烃，如奈、蒽、芘等，均显示苯的三个吸收带，但这三个吸收带均发生红移，且强度增加。随着苯环数目的增多，吸收波长红移越多，吸收强度也相应增加。,当芳环上的-,CH,基团被氮原子取代后，则相应的氮杂环化合物（如吡啶、喹啉）的吸收光谱，与相应的碳化合物极为相似，即吡啶与苯相似，喹啉与奈相似。此外由于引入含有,n,电子的,N,原子的，这类杂环化合物还可能产生,n,*,吸收带。,有机化合物紫外-可见吸收光谱,24,溶剂对紫外吸收光谱的影响,1.溶剂的极性,溶剂的极性越强，由,跃迁产生的谱带向长波方向移动越显著。这是因为发生,跃迁的分子激发态的极性总大于基态，在极性溶剂的作用下，激发态能量降低的程度大于基态，从而使基态到激发态跃迁所需的能量变小，使吸收带发生红移。,所用溶剂极性越强，则由,n,跃迁产生的谱带向短波方向移动越明显，即蓝移越大。发生,n,跃迁的分子都含有未成键的孤对电子，与极性溶剂形成氢键，使得分子的非键轨道能量有较大程度的降低，使,n,跃迁所需的能量相应增大，致使吸收谱带发生蓝移。,25,2.,pH,值对紫外光谱的影响,pH,值的改变可能引起共轭体系的延长或缩短，从而引起吸收峰位置的改变，对一些不饱和酸、烯醇、酚及苯胺类化合物的紫外光谱影响很大，如果化合物溶液变为碱性时，吸收峰发生红移，表明该化合物为酸性物质。如果变为碱性，发生蓝移，可能为芳胺。,例如：苯酚（当,pH,大于7时，发生红移）,苯胺与盐酸苯胺,溶剂对紫外吸收光谱的影响,利用被测物质的分子对紫外,-,可见光具有选择性吸收的特性而建立的分析方法。,一、紫外可见吸光光度法的特点,（,1,）,具有较高的灵敏度。,（,2,）,有一定的准确度，该方法相对误差为,2%-5%,，可满足对微量组分测定的要求。,（,3,）,操作简便、快速、选择性好、仪器设备简单。,（,4,）,应用广泛,互补光,单色光,：只具有一种波长的光。,混合光,：由两种以上波长组成的光，如白光。,物质对光的选择性吸收,白光,青蓝,青,绿,黄,橙,红,紫,蓝,1、光的互补性与物质的颜色,物质的颜色,是由于物质对不同波长的光具有选择性的吸收作用而产生的，,物质的颜色由透过光的波长决定,。,例：硫酸铜溶液吸收白光中的黄色光而呈蓝色；,高锰酸钾溶液因吸白光中的绿色光而呈紫色。,如果两种适当颜色的光按一定的强度比例混合可以得白光，这两种光就叫,互为补色光,。物质呈现的颜色和吸收的光颜色之间是互补关系。,不同颜色的可见光波长及其互补光,白光,青蓝,青,绿,黄,橙,红,紫,蓝,2,、吸收光谱或吸收曲线,吸收曲线：测定某种物质对不同波长单色光的吸收程度，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图。,KMnO4,的吸收曲线,最大吸收波长，,max,定量分析的基础：某一波长下测得的吸光度与物质浓度关系的有关,300,400,500,600,350,525 545,Cr,2,O,7,2-,MnO,4,-,1.0,0.8,0.6,0.4,0.2,Absorbance,Cr,2,O,7,2-,、,MnO,4,-,的吸收光谱,350,光谱定性分析基础：吸收曲线的形状和最大吸收波长,32,三、光的吸收定律,光的吸收程度和吸收层厚度的关系,A,b,光的吸收程度和吸收物浓度之间的关系,A,c,朗伯,比耳定律,A=,bc,吸光光度法的理论基础和定量测定的依据,朗伯,(Lambert),比耳,(Beer),33,A,：,吸光度,-,溶液对光的吸收程度,b,：液层厚度,(,光程长度,cm),c,：溶液的摩尔浓度，,mol,L,：,摩尔吸光系数,，,L,mol,cm,；,三、光的吸收定律,A,lg,（,I,0,/,I,t,)=,b c,浓度为,1 mol/L,、液层厚度为,1cm,时该溶液在某一波长下的吸光度,A,lg,（,I,0,/,I,t,)=,a b c,c,：溶液的浓度，,g,L,a,：吸光系数，,L,g,cm,浓度为,1 g/L,、液层厚度为,1cm,时该溶液在某一波长下的吸光度,a,a,=,/,M,（,M,为摩尔质量）,34,摩尔吸光系数,三、光的吸收定律,不随浓度,c,和光程长度,b,的改变而改变，在温度和波长等条件一定时，,仅与吸收物质本身的性质有关,同一吸收物质在不同波长下的,值是不同的。在最大吸收波长,max,处的摩尔吸光系数，常以,max,表示。代表,可能达到的最大灵敏度。,max,越大表明光度法测定该物质灵敏度越高,10,5,：超高灵敏；,=(6,10,）,10,4,：高灵敏,10,2,mol/L,时，吸光质点间可能发生缔合等相互作用，直接影响了对光的吸收。,溶液中存在着离解、聚合、互变异构、配合物的形成等化学平衡时。使吸光质点的浓度发生变化，影响吸光度,39,例：铬酸盐或重铬酸盐溶液中存在下列平衡：,Cr,4,2-,2,H,=,Cr,2,7,2-,H,2,溶液中,Cr,4,2-,、,Cr,2,7,2-,的颜色不同，吸光性质也不相同,故溶液,pH,对测定有重要影响,.,40,四、紫外可见分光光度计,41,四、紫外可见分光光度计,42,Hitachi U 3010,紫外可见分光光度计,普析通用,TU-1221,型,紫外可见分光光度计,四、紫外可见分光光度计,43,波长,330800 nm,722,型光栅分光光度计,四、紫外可见分光光度计,光度计的基本结构,光源,单色器,狭,缝,样品室,检测器,45,显示屏,波长调节旋钮,比色池架,四、紫外可见分光光度计,46,在整个紫外光区或可见光谱区可以发射,连续 光谱,具有足够的辐射强度,较好的稳定性,较长的使用寿命,可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长,范围在,320,2500 nm,。,紫外区：氢、氘灯，发射,185,400 nm,的连续光谱。,光源,47,将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。,单色器,棱镜、光栅,狭缝,狭缝是指由一对隔板在光通路上形成的缝隙，用来调节入射单色光的纯度和强度，也直接影响分辩力。,出射狭缝的宽度通常有两种表示方法：一为狭缝的实际宽度，以毫米（,mm,）表示，另一种为光谱频带宽度，即指由出射狭缝射出光束的光谱宽度，以毫微米,nm,表示。例如，出射狭缝的宽度是,6nm,，并不是说出射狭缝的宽度是,6nm,，而是指由此狭缝射出的光具有,6nm,的光谱带宽。,49,样品室,在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。,50,利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号,检测器,光电池、光电管或光电倍增管。,结果显示记录系统,检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理,单光束仪器,H,W,红,蓝,S,1,S,2,单色器,样品室,单光束仪器的缺点：,操作麻烦：,空白,I,O,样品,I,任一波长,不能进行吸收光谱的自动扫描,光源不稳定性影响测量精密度,双光束仪器,I,O,I,双光束仪器的特点和不足：,测量方便，不需要更换吸收池,补偿了仪器不稳定性的影响,实现了快速自动吸收光谱扫描,不能消除试液的背景成分吸收干扰,双波长仪器,切,光,器,1,2,采用双单色器,/nm,A,0,200 300 400,待测成分,干扰成分,1 2,消除,光谱重叠干扰,A,1,=A,a,1,+A,i 1,A,2,=A,a,2,+A,i 2,A,i 1=,A,i 2,A,=,A,1-,A,2,=,Aa,2,-A,a,1,=,（,a,1,-,a,2,）,bC,a,消除了共存组分的干扰,双波长仪器能否消除背景干扰？,A,1,=lg I,0,/I,1,=,1,bC+A,b,A,2,=lg I,0,/I,2,=,2,bC+A,b,式中,A,b,为背景吸收或干扰物质的吸收,若波长选择合适，,1,和,2,处,A,b,相同,则,A,=lg I,1,/I,2,=,（,1,-,2,）,bC,因此测量两波长,吸光度之差，就,消除了背景吸收,的干扰。,显色反应及显色条件的选择,显色反应,将待测组分转变成有色化合物的反应,显色剂,与待测组分形成有色化合物的试剂,五、无机分析应用,显色反应类型,络合反应,氧化还原反应,取代反应,缩合反应,选择要素,灵敏度高,(,大,),选择性好,(,无特效显色剂,),有色生成物稳定,组成恒定,(,不同络合比颜色不同,),显色剂在测定波长处无明显吸收,有色化合物与显色剂颜色对比度大，要求,60nm,。,61,显色条件的选择,1.,显色剂用量,2.,反应体系的酸度,影响金属离子和显色剂的存在形式、络合物组成、稳定性及反应进行程度,显色条件的选择,3.,显色时间,4.,显色温度,5.,溶剂,6.,干扰的消除,选择适当的显色反应条件,加入掩蔽剂,分离干扰离子,(,萃取法、离子交换法、吸附法等）,吸光度测量条件的选择,1.,选择适当的入射光波长,一般应该选择,max,为入射光波长。但如果,max,处有共存组分干扰时，则应考虑选择灵敏度稍低但能避免干扰的入射光波长。,2.,控制适宜的吸光度（读数范围）,T,min,36.8%,A,min,（吸光度测量误差最小）,最佳读数范围,T,%=70,10,A,64,3.,选择合适的参比溶液,若仅待测组分与显色剂反应产物有吸收，其它试剂均无吸收，用纯溶剂（水,),作参比溶液；,若显色剂或其它试剂略有吸收，试液本身无吸收，用,“,试剂空白,”,(,不加试样溶液,),作参比溶液；,若待测试液有吸收，而显色剂等无吸收，则可用,“,试样空白,”,(,不加显色剂,),作参比溶液。,（2）有一定的准确度，该方法相对误差为2%-5%，可满足对微量组分测定的要求。,减色效应吸收强度即摩尔吸光系数，减小的现象,例如，在乙烯分子中，*跃迁最大吸收波长为180nm,检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理,1 2,氯、溴和碘原子引入甲烷后，其相应的吸收波长发生了红移，显示了助色团的助色作用。,若仅待测组分与显色剂反应产物有吸收，其它试剂均无吸收，用纯溶剂（水)作参比溶液；,吸光光度法的理论基础和定量测定的依据,四、紫外可见分光光度计,原子核在其平衡位置附近的相对振动-,200 300 400,光谱定性分析基础：吸收曲线的形状和最大吸收波长,溶剂的极性越强，由跃迁产生的谱带向长波方向移动越显著。,羰基化合物含有C=O基团。,e 120eV 紫外可见光谱(分子的电子光谱),几种化合物的分子吸收光谱图,化合物maxmax,65,定性分析,结构分析,标准谱图对照,经验规则计算,官能团鉴定,顺反异构体的确定,互变异构体的确定,五、有机分析应用,66,化合物的定性分析,利用紫外光谱可以推导有机化合物的分子骨架中是否含有共轭结构体系,如,C=CC=C、C=CC=O、,苯环等。利用紫外光谱鉴定有机化合物远不如利用红外光谱有效，因为很多化合物在紫外没有吸收或者只有微弱的吸收，并且紫外光谱一般比较简单，特征性不强。利用紫外光谱可以用来检验一些具有大的共轭体系或发色官能团的化合物，可以作为其他鉴定方法的补充。鉴定化合物主要是根据光谱图上的一些特征吸收，特别是最大吸收波长,max,即摩尔吸光系数,值，来进行鉴定。,67,鉴定的方法有两种：,（1）与标准物、标准谱图对照：将样品和标准物以同一溶剂配制相同浓度溶液，并在同一条件下测定，比较光谱是否一致。,（2）吸收波长和摩尔吸光吸收：如果样品和标准物的吸收波长相同，摩尔吸光吸收也相同，可以认为样品和标准物是同一物质。,化合物的定性分析,68,若在,200,750nm,波长范围内无吸收峰，则可能是直链烷烃、环烷烃、饱和脂肪族化合物或仅含一个双键的烯烃等。不含共轭体系，无醛、酮、溴、碘。,官能团鉴定,若在,270,350nm,波长范围内有低强度吸收峰,(,10,100L,mol,-1,cm,-1,),（,n,跃迁），则可能含有一个简单非共轭且含有,n,电子的生色团，如羰基。,若在,2,0,300nm,波长范围内有中等强度的吸收峰则可能含苯环。,化合物的结构分析,69,若在,210,250nm,波长范围内有强吸收峰，则可能含有,2,个共轭双键；若在,260,300nm,波长范围内有强吸收峰，则说明该有机物含有,3,个或,3,个以上共轭双键。,若该有机物的吸收峰延伸至可见光区，则该有机物可能是长链共轭或稠环化合物。,化合物的结构分析,70,五、有机分析应用,异构体的确定,反式异构体的,max,和,max,大于顺式异构体,化合物纯度的检验,氢键强度的测定,成分分析,71,异构体的确定,对于构造异构体，可以通过经验规则计算出,max,值与实测值比较，即可证实化合物是哪种异构体。对于顺反异构体，一般来说，某一化合物的反式异构体的,max,和,max,大于顺式异构体。另外还有互变异构体，常见的互变异构体有酮烯醇式互变异构，如乙酰乙酸乙酯的酮烯醇式互变异构。,72,成分分析,紫外光谱在有机化合物的成分分析方面的应用比其在化合物定性鉴定方面具有更大的优越性，方法的灵敏度高，准确性和重现性都很好，应用非常广泛。只要对近紫外有吸收或可能有吸收的化合物，均可用紫外分光光度法进行测定，定量基础朗伯,-,比尔定律。,六、仪器操作,一、定性分析,不同物质结构不同或者说其分子能级的能量,(,各种能级能量总和,),或能量间隔各异，因此不同物质将选择性地吸收不同波长或能量的外来辐射，这是,UV-Vis,定性分析的基础。,定性分析具体做法是让不同波长的光通过待测物，经待测物吸收后，测量其对不同波长光的吸收程度,(,吸光度,A),，以吸光度,A,为纵坐标，辐射波长为横坐标作图，得到该物质的吸收光谱或吸收曲线，据吸收曲线的特性,(,峰强度、位置及数目等,),研究分子结构。,-,胡罗卜素,咖啡因,阿斯匹林,丙酮,几种化合物的分子吸收光谱图,二、定量分析,1.,单组份定量方法,1,）标准曲线法,(,职业卫生检测中常用,),：,用标准样品配制成不同浓度的标准系列，在与待测组分相同的条件下，测量吸光度，用吸光度对样品浓度绘制标准曲线标准曲线的斜率即为绝对校正因子。在测定样品中的组分含量时，要用与绘制标准曲线完全相同的条件测量吸光度，然后根据吸光度在标准曲线上直接读出样品组分的浓度。,2,）标准对比法：,该法是标准曲线法的简化，即只配制一个浓度为,c,s,的标准溶液，并测量其吸光度，求出吸收系数,k,，然后由,A,x,=kc,x,求出,c,x,该法只有在测定浓度范围内遵守,L-B,定律，且,c,x,与,c,s,大致相当时，才可得到准确结果。,二、岛津UV2550定量分析步骤（标准曲线法）,先开主机，然后再打开,UVPROBE,软件；,启动,UVPROBE,以后，点击界面下方“连接”进行仪器连接，仪器进行连接检查，待检查全部通过后，点击“,OK”,点击“光度测定”；,点击“方法”，波长设定为通过光谱检测到所测样品的最大吸收波长,然后加入波长，类型多选择为“多点”，,WL1=,最大波长。点击“下一步”，（注：根据所测样品对相应的参数进行设定），“方法”设定完后，点击“关闭”；,将两个空白参比放入光束吸收池架；,点击“自动调零”；,双击标准表中的任意位置激活标准表，在表头位置将显示激活；,点击下拉菜单中的,I,-,扣空白；,在标准表中依次输入标准系列,ID,；,读取标准样品：将两个空白参比放入光束吸收池架，点击“自动调零”，然后放入样品，输入样品浓度，依次进行“读取”。样品的浓度读取完后，在“标准曲线”表中点击“右键”,-“,属性”中选择“方程式”、“相关系数”，查看标准曲线；,样品读取：点击样品表中的任意位置激活标准表，在表头位置将显示激活；,在样品表中输入样品,ID,，放入待测样品，进行“读取”。,打印结果：点击文件,-,打印,-,（选择打印标准表或样品表）,关机：点击操作界面“断开”，然后关闭仪器电源，关闭操作软件，关闭电脑，将比色皿倒扣放置保存。,单组分的测定曲线法,参比 标准样品 待测样品,七、仪器维护保养,一、环境要求,、使用工作温度：,15,35,，湿度：,45,80%,，如果温度高于,30,，则湿度必须小于,70%,、避免日光直射,、避免震动（轻拿轻放）,、避免强磁场，电场,、远离腐蚀性气体，并避免置于任何可能导致紫外区吸收的含有机,/,无机试剂气体的区域,、避免脏污、多尘环境,感谢观看,