药物的鉴别试验_59页.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第二章,药物的鉴别试验,药物的鉴别试验,掌握一般鉴别试验的原理。,熟悉一般鉴别试验的基本方法。,了解一般鉴别试验的条件和灵敏度。,基本要求,第二章,一、概述,第二章,依据药典进行的药物分析主要有三大项：鉴别、检查和含量测定。,药物的鉴别试验,（,identification test,）,是用于鉴别药物的真伪，在药物分析中属,首项工作,，只有证实被分析的药物是真的，才有必要接着进行检查、含量测定。,药典所收载的药物项下的鉴别试验方法，仅适用于贮藏在有标签容器中的药物，用以证实是否为其所标示的药物。,这些试验方法不能赖以鉴别未知物。,药物的性状反映了药物特有的物理性质。,包括外观,嗅味,溶解度及物理常数等。,1,性状,二、鉴别试验的项目,第二章,物理常数：熔点、比旋度、吸收系数。,1,性状,二、鉴别试验的项目,第二章,熔点,是固体化合物在,101.325KPa,下固,液两相处于平衡时的温度。纯净的固体有机物一般都有固定的熔点，一个纯化合物从开始熔化（初熔）至完全熔化（全熔）的温度范围叫做,熔程,或,熔距,，其熔程一般不超过,0.5,1,。当含有杂质时，熔点会有显著的变化，会使其熔点下降，熔程延长。,因此，可以通过测定熔点来鉴定有机物，并根据熔程的长短来判断有机物的纯度。,1,性状,二、鉴别试验的项目,第二章,熔点的测定方法,b,型管,(Thiele,管,),1,性状,二、鉴别试验的项目,第二章,比旋度：,在一定波长与温度下，偏振光透过长,1dm,且每,1ml,中含有旋光性物质,1g,的溶液时测得的旋光度称为比旋度。它是反映手性药物特性及其纯度的主要指标。,1,性状,二、鉴别试验的项目,第二章,吸收系数：,在给定波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数。有两种表示方式：摩尔吸收系数和百分吸收系数。,1,性状,二、鉴别试验的项目,第二章,百分吸收系数：,在一定波长下，溶液浓度为,1%,（,W/V,），,厚度为,1cm,时的吸收度，用 表示，是吸光物质的重要物理常数,2,、一般鉴别试验,（,general identification test,）,是依据某一类药物的物理化学性质为依据,通过化学反应来鉴别药物真伪,.,无机药物,:,根据阴、阳离子,（,钠盐、钙盐、硫酸盐、氯化物,）,的特殊反应,并以药典附录项下的一般鉴别试验为依据；,第二章,有机药物,:,多采用典型的官能团反应,（,芳香第一胺、水杨酸盐,）,.,二、鉴别试验的项目,一般鉴别试验的项目：,丙二酰脲类,、,托烷生物碱类,、,芳香第一胺类,、,有机氟化物类,、,无机金属盐类,（钠盐、钾盐、锂盐、钙盐、钡盐、铵盐、镁盐、铁盐、铝盐、锌盐、铜盐、银盐、汞盐、铋盐、锑盐、亚锡盐）、,有机酸盐,（水杨酸盐、枸橼酸盐、乳酸盐、苯甲酸盐、酒石酸盐）、,无机酸盐,（亚硫酸盐或亚硫酸氢盐、硫酸盐、硝酸盐、硼酸盐、碳酸盐与碳酸氢盐、醋酸盐、磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物）。,一般鉴别试验,通过一般鉴别试验只能证实是某一类药物,而不能证实是哪一种药物,.,例如,:,钠盐的焰色试验,不能辨认是氯化钠、苯钾酸钠或者是其它某一种钠盐药物,.,必须在一般鉴别试验的基础上,再进行专属鉴别试验,方可确认,.,第二章,二、鉴别试验的项目,3,、专属鉴别试验,(specific identification test,）,证实某一种药物的依据,它根据每一种药物化学结构的差异及其引起的物理化学性质不同,选用某些,灵敏的定性,反应,来鉴别药物真伪,.,第二章,二、鉴别试验的项目,第二章,苯巴比妥,司可巴比妥钠,巴比妥,二、鉴别试验的项目,一般鉴别试验,区别不同类别的药物,.,第二章,专属鉴别试验,则是在一般鉴别试验的基础上,区别同类药物的各个单体,.,二、鉴别试验的项目,专属性强,再现性好,灵敏度高,简便快速,第二章,鉴别方法要求,三、鉴别方法,化学鉴别法,色谱鉴别法,光谱鉴别法,第二章,三、鉴别方法,(,一,),化学鉴别法,将供试品直接加热或加适当试剂在规定的温度下进行实验,观测此时所发生的特异现象,.,第二章,1,干 法,三、鉴别方法,(,一,),化学鉴别法,铂丝用盐酸湿润后,蘸取供试品,在无色火焰中燃烧,使火焰显出特殊的颜色,.,第二章,例,1,钠的焰色实验,三、鉴别方法,(,一,),化学鉴别法,例,2,适当温度下加热供试品,生成特殊气味的气体,.,第二章,舒林酸,三、鉴别方法,(,一,),化学鉴别法,将供试品和试剂在适当的溶剂中,于一定条件下进行反应,发生易于观测的化学变化,.,第二章,2,湿法,三、鉴别方法,(,一,),化学鉴别法,(1),呈色反应鉴别法,(2),沉淀生成反应鉴别法,(3),荧光反应鉴别法,(,4),气体生成鉴别法,第二章,三、鉴别方法,(,一,),化学鉴别法,(1),呈色反应鉴别法,三氯化铁呈色反应,第二章,对,乙酰氨基酚,异羟肟酸铁反应,氯贝丁酯,Cl,三、鉴别方法,(,一,),化学鉴别法,(1),呈色反应鉴别法,茚三酮呈色反应,重氮化,-,偶合呈色反应,第二章,左旋多巴,对,乙酰氨基酚,三、鉴别方法,(,一,),化学鉴别法,(1),呈色反应鉴别法,氧化还原呈色反应,第二章,盐酸氯丙嗪,三、鉴别方法,(,一,),化学鉴别法,三、鉴别方法,(2),沉淀生成反应鉴别法,与金属离子的沉淀反应,与碘化铋钾的沉淀反应,其它沉淀反应,第二章,(3),气体生成反应鉴别法,(,一,),化学鉴别法,大多数伯胺（铵）类药物、酰尿类以及某,些酰胺类药物,可经强碱处理后加热产生氨气,.,化学结构含硫药物,可经强酸处理后加热,产生硫化氢气体,.,第二章,硫鸟嘌呤,巴比妥类药物,三、鉴别方法,(3),气体生成反应鉴别法,(,一,),化学鉴别法,第二章,含碘有机药物,经直火加热可,生成紫色碘蒸气,.,碘苷,含醋酸酯和乙酰胺,类药物经硫酸水解后,加乙醇可产生醋酸,乙酯的香味,.,对,乙酰氨基酚,三、鉴别方法,(,一,),化学鉴别法,(3),荧光反应鉴别法,药物本身在可见光下发射荧光,药物溶液,+,硫酸,药物溶液,+,溴,药物溶液,+,间苯二酚,药物经其它反应后发射荧光,第二章,三、鉴别方法,1,紫外光谱鉴别法,测定最大吸收波长,或同时测定最小吸收波长,.,第二章,乙胺嘧啶,供试品在,0.1mol/L,盐酸介质,中的紫外吸收在,272nm,处为峰,216nm,处,为谷,.,(,二,),光谱鉴别法,三、鉴别方法,(,二,),光谱鉴别法,规定吸收波长和吸收度比值法,两性霉素在,362nm,、,381nm,、,405nm,波长处有最大吸收,.,规定,362nm,与,381nm,处吸收度比值不大于,0.6,、,381nm,与,405nm,波长比值不大于,0.9,.,第二章,三、鉴别方法,(,二,),光谱鉴别法,己稀雌酚注射液用供试品溶液,250,450nm,波长吸收光谱与对照品是否一致鉴别,.,第二章,与对照品比较,对比吸收光谱,的一致性,三、鉴别方法,经化学处理后,测定其反应产物的吸收光谱特性,.,第二章,规定一定浓度供试品在最大吸收,波长处的吸收度,.,(,二,),光谱鉴别法,三、鉴别方法,2,红外光谱法,(,二,),光谱鉴别法,中国药典采用标准图谱对照法,BP,采用标准图谱对照法,USP,采用对照品法,JP,规定条件下测定一定波长处特征吸收峰,.,第二章,三、鉴别方法,3,原子吸收法,4 NMR,5 MS,(,二,),光谱鉴别法,第二章,三、鉴别方法,(,三,),色谱谱鉴别法,适用于复杂环境下药物有效成分及杂质鉴别,具有分离、分析同时进行的特点,.,第二章,色谱法（,HPLC GC TLC),三、鉴别方法,(,三,),色谱谱鉴别法,（,1,）高效液相色谱法,(HPLC),供试品和对照品色谱峰保留时间一致,.,（,2,）气相色谱法,(GC),同,HPLC,要求,第二章,三、鉴别方法,(,三,),色谱谱鉴别法,（,3,）薄层扫描法,(TLC),对照品比较法,供试品斑点与对照品的,R,f,值及斑点的颜色应一致,.,第二章,三、鉴别方法,（,3,）薄层扫描法,(TLC),采用与同浓度的对照品溶液，在同一块薄层板上点样、展开与检视，供试品溶液所显主斑点的颜色与位置应与对照品溶液的主斑点一致，而且斑点大小和颜色深浅也应大致相同。,采用供试品溶液与对照品溶液等体积混合，应显示单一、紧密的斑点。,选用与,供试品化学结构相似的药物对照品溶液与供试品溶液的主斑点比较，两者比移值应不同。,将上项下两种溶液等体积混合，应显示两个清晰分离的斑点。,第二章,化学法和仪器法相结合,每种药,品一般选用,2,4,种方法进行鉴,别试验,相互取长补短,.,方法要有一定的专属性、灵敏,性、且便于推广,.,尽可能采用药典中收载的方法,.,三、鉴别方法,(,四,),生物学法,利用微生物或实验动物进行鉴别的方法,第二章,三、鉴别方法,(,五,),药物鉴别新动向,1,，仪器方法大大增加，尤其是红外光谱和高效液相色谱。,2,，制剂广泛采用红外法鉴别。,3,，鉴别条目简练，选择专属的方法进行鉴别，平均每个品种收载,2,条左右。,第二章,三、鉴别方法,鉴别法小结,（,2,）,在维生素,C,的分子中具有烯二醇的结构，这个结构具有很强的还原性,可以和一些氧化剂作用,.,例,1.,维生素,C,的鉴别：维生素,C,分子中具有,2,个手性,C,原子,所以具有旋光性,可以通过测定旋光度来进行鉴别,.,（,1,）,药典中规定：,维生素,C,的比旋度应为,+20.5,+21.5,第二章,（,3,）红外光谱与对照图谱一致,.,三、鉴别方法,第二章,鉴别试验是以所采用的化学反应或物理特性产生的明显的易于觉察的特征变化为依据。,在规定的条件下完成。否则鉴别试验的结果是不可信的。,影响鉴别反应的因素主要有：,被测物浓度，试剂的用量、溶液的温度、,pH,、,反应时间和共存的干扰物质,等。,四、鉴别试验条件,1,溶液的浓度,主要指被鉴别药物的浓度，及所用试剂的浓度。由于鉴别试验多采用观测沉淀、颜色或各种光学参数（入,max,、入,min,A,等）的变化，来判定结果，而药物和有关试剂的浓度会直接影响上述的各种变化，必须严格规定溶液的浓度。,第二章,四、鉴别试验条件,2,、溶液的温度,:,每升高,10,反应速度升高,2,4,倍。,第二章,3,、溶液的酸碱度,许多鉴别反应都需要在一定酸碱度的条件下才能进行。溶液酸碱度的作用，在于能使各反应物有足够的浓度处于反应活化状态，使反应生成物处于稳定和易于观测的状态。,H,+,OH,-,条件,使反应处于稳定的状态。,四、鉴别试验条件,在鉴别试验中，如药物结构中的其它部分或药物制剂中的其它组分也可参加鉴别反应，产生干扰，应选择专属性更高的鉴别反应将其消除或将其分离,消除干扰成分的存在。,第二章,4,、干扰成分的存在,四、鉴别试验条件,第二章,有机化合物的化学反应和无机化合物不同，一般反应速度较慢，达到预期试验结果需要较长的时间。这是因为有机化合物是以共价键相结合，化学反应能否进行，依赖于共价键的断裂和新价键形成的难易，这些价键的更替需要一定的反应时间和条件。同时在化学反应过程中，有时存在着许多中间阶段，甚至需加入催化剂才能启动反应。因此，使鉴别反应完成，需要一定时间。,有机化合物,:,反应速度慢,加入催化剂。,无机化合物,:,反应速度快。,5,、试验时间,四、鉴别试验条件,第二章,五、鉴别试验的灵敏度,（一）反应灵敏度和空白试验,在一定条件下能在尽可能稀的溶液中观测出尽可能少量的供试品,.,反应对这一要求所能满足的程度称为反应的灵敏度,(sensitivity),。,以两个相互有关的量来表示,:,最低检出量,，,最低检出浓度,。,最低检出量,(minimum,detectalbe,quantity,，,又称检出限量,),(,以,m,表示,),单位通常用,g,表示。,1g=10,-6,g,最低检出量愈小，反应愈灵敏。但最低检出量不能充分表示反应的灵敏度，因为没有说明溶液的浓度。,第二章,最低检出浓度,(minimum detectable concentration,，,又称界限浓度,),应用某一反应，在一定条件下，能够观测出供试品的最低浓度，常以,1G(1V),来表示。,G,和,V,表示含有,1g,重某供试品的溶液的克,(ml),数。,最低检出量,和,最低检出浓度,之间的关系用下式表示,五、鉴别试验的灵敏度,表示所取供试液的最小体积,(ml),G,单位,g/g,。,在选用灵敏度很高的反应时，必须采用高纯度的试剂和非常洁净的器皿，才能保证鉴别试验的结果可靠性。为了消除试剂和器皿可能带来的影响，应同时进行,空白试验,（,blank test,）,以供对照。,空白试验：在与供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其它试剂均同样加入而进行试验。,反应的灵敏度与,分析方法,、,观察方式,、,反应条件,、,人的观察能力,等因素有关。,五、鉴别试验的灵敏度,对照试验,对照试验,是指在鉴别反应中常用已知样品的溶液代替供试品溶液，同法操作。对照试验出现正反应，说明试验条件是正常的。对照试验用于检查试剂是否变质失效或反应进行的条件是否控制正常。空白试验和对照试验对于正确判断鉴别结果有重要意义。,第二章,（二）提高灵敏度的方法,在实际工作中，常采用下列措施提高反应的灵敏度,1,、加入与水互不相溶的有机溶剂,.,浓集有色生成物，使有机溶剂中颜色变深，易于观测。,2,、改进观测方法,例如，将目视观测溶液的颜色，改为可见分光光度法；将观测生成沉淀改为比浊度法等。,五、鉴别试验的灵敏度,小结,1,鉴别的项目。,2,鉴别方法,（,1,）化学鉴别法。,（,2,）光谱鉴别法。,（,3,）色谱鉴别法。,3,鉴别的试验条件。,4,鉴别试验的灵敏度。,思考题,1,，用色谱法对药物进行鉴别，常用的色谱方法有那些？,2,，简述药物分析中主要的三类鉴别法？,3,，鉴别试验应该在规定的条件下完成，鉴别试验的条件有哪几项？,4,，药物的鉴别包括哪些项目？,5,，药物的鉴别可采用哪些方法？,6,，为何要做灵敏度试验和空白试验？,第二章,1,药物鉴别的意义是什么？,答：药物鉴别是利用物理的、化学的、物理化学或生物学的手段来辨别药物的真伪的试验，收载在药品质量标准的鉴别项下，在药物分析工作中属,首项工作,。辨别药品的真伪是,保证安全有效的前提条件。,练习题与答案,第二章,2,什么叫鉴别反应的空白试验和对照试验？在药物鉴别试验中空白试验和对照试验的意义是什么？,答：,空白试验,是在完全相同的条件下，只用试剂而无待测物存在（用溶剂代替样品溶液）时的试验，空白试验不出现正反应，说明试剂等不干扰试验。,对照试验,是指在鉴别反应中常用已知样品的溶液代替供试品溶液，同法操作。对照试验出现正反应，说明试验条件是正常的。对照试验用于检查试剂是否变质失效或反应进行的条件是否控制正常。,空白试验和对照试验对于正确判断鉴别结果有重要意义。,练习题与答案,第二章,3,常用的药物鉴别试验的方法有哪些？,答：,1,、化学方法,：制备衍生物测定熔点；呈色反应；沉淀反应；其他化学反应；,2,、分光光度法,：紫外分光光度法；红外分光光度法；,3,色谱法,：薄层色谱法和纸色谱法；高效液相色谱法；气相色谱法；,4,生物学方法,等。,练习题与答案,第二章,4,什么是一般鉴别试验和专属鉴别试验？,答：根据反应的专属性可将鉴别试验分为一般鉴别试验和专属鉴别试验。,一般鉴别试验,是以某一类药物的化学结构及其物理化学性质为依据，通过化学反应来鉴别该类药物真伪的方法。,专属鉴别试验,是根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性的不同，选用某些灵敏的定性反应来区分同类药物中的各个药物单体，达到确证药物真伪的目的。,练习题与答案,