三、植物细胞骨架的光学显微镜观察.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,细胞生物学实验课件,实验三,植物细胞骨架的光学显微镜观察,一,.,实验目的,1.,掌握考马斯亮蓝,R250,对植物细胞骨架染色的方法。,2.,通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞骨架的制备方法与显微形态观察。,二,.,实验原理,细胞骨架,(cytoskeleton),，是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络,结构，根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为,微丝、,微管和中等纤维,。细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运,输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用,。,本试验采用去垢剂,TritonX-100,的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的,膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后,者用考马斯亮蓝,R250,染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。,三,.,实验用品,1.,材料：洋葱,2.,器材：,显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、擦镜纸、,50ml,烧杯,药品,：,pH6.8,的磷酸缓冲液,；,M-,缓冲液,：,50mmolL,-1,(PH6.7),咪唑,、,50 mmolL,-1,KCl,、,0.5 mmolL,-1,MgC1,2,、,1 mmolL,-1,EGTA,、,0.1 mmolL,-1,EDTA,、,1 mmolL,-1,巯基乙醇,、,4 mmolL,-1,甘油,、,1 mmolL,-1,HCl,调,pH,至,7.2,；,1%Triton-X100,:,用,M-,缓冲液,配,制；,3%,戊二醛,：用,pH6.8,的磷酸缓冲配制；,0.2%,考马斯亮蓝,R250,染液,：,0.8g,考马斯亮蓝,R250,、,46.5ml,甲醇,、,7ml,冰醋酸,、,46.5ml,蒸馏水。,四,.,实验方法步骤,1.,撕取洋葱鳞茎内表皮,1cm,2,若干片，置于小烧杯中。,2.,用磷酸缓冲液（,pH6.8,）,提前浸泡,2,小时左右。,3.,吸去磷酸缓冲液，用,1%,TritonX,100,处理,20,分钟。抽提细胞骨架以外的蛋白质，从而使骨架图像更加清晰。,4.,吸去,TritonX-100,，,用,M,-,缓冲液洗,2,次，每次,5,分钟。,M,-,缓冲液有稳定细胞骨架的作用。,5.,用,3%,戊二醛固定,0.5,1h,。,6.,用磷酸缓冲液（,pH6.8,）洗,2,次，每次,5,分钟。,7.,考马斯亮蓝,R250,染色,30,分钟。,8.,蒸馏水洗,2,次。,9.,置于载玻片上，盖上盖玻片，在光学显微镜下观察。,五,.,实验报告,1.,绘出洋葱鳞叶内表皮细胞内细胞质骨架的分布图。,2.,说明实验过程中各步骤处理的作用。,细胞骨架,