大肠杆菌PPT.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,大肠菌群类检测方法介绍,大肠菌群,(,Coliform,),粪大肠菌群,(,Fecal,Coliform,),大肠杆菌,(,E.coli,),肠杆菌科,(,Enterobactericeae,),肠杆菌科四种指标菌的范围,（隶属关系）,食品中大肠菌群类及其检验,大肠菌群,（,coliforms,）：,指一群在,36,条件下培养,48,h,能发酵乳糖、产酸产气的需氧和,兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。,该菌群主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评,价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能,。,粪大肠菌群（,Faecal coliform,）,：,系指一群在,44.5,培养,24,h48h,能发酵乳糖、产酸产气的需氧,和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。,大肠杆菌（,Escherichia coli,）,：,大肠杆菌广泛存在于是人和温血动物的肠道中，能够在,44.5,发酵乳糖产酸产气、,IMViC,生化试验为,+-,或,-+-,。,包括：产肠毒素（,ETEC,）肠致病性（,EPEC,）肠侵袭性,(EIEC),肠出血性,(EHEC),主要菌型：,O157:H7,大肠菌群类检测方法,GB,SN,日本方法,VRB,固体平板法,Deso,固体平板法,显色培养基法,3M Petrifilm,测试片法,MPN Table,革兰氏染色,242h,44.50.5,粪大肠菌群检测的,GB,法,乳糖胆盐发酵管产气的培养物,EC,肉汤,不产气,粪大肠菌群阴性,产气,EMB,平板,18-24h,有典型菌落报告为阳性,361,back,44.50.5,IMVIC,back,营养琼脂斜面,18-24h,back,back,back,back,法国标准化协会（,AFNOR,）,认证,美国农业部（,USDA,）,认证,美国食品和药品管理局（,US FDA,）,认证,美国食品安全与检测机构（,USDA FSIS,）,认证,日本食品安全法规标准分析方法,北美国家认证,加拿大健康保护协会认证,澳大利亚和新西兰食品安全认可方法,波兰标准化委员会（,PKN,）,认证,智利农业部（,SAG,）,认证,中国的,GB,和,SN,即将发布实施,国,际,官,方,方,法,3M,测试片法检测食品中大肠菌群和大肠杆菌,3M,Petrifilm,TM,大肠杆菌,/,大肠菌群,测试片,的检测原理,-,葡萄糖苷酶,四唑翁指示剂,（,tetrazolium,）,-,半乳糖苷酶,薄膜,粘合剂指示剂,冷水可溶性凝胶,标准培养基冷水可溶性凝胶,粘合剂,印有格子的纸片,大肠菌群及大肠杆菌,3M Petrifilm,检测法,接种,1ml,样品匀液到每张,Petrifilm,TM,大肠菌群测试片,计数红色带气泡的菌落,报告大肠菌群数,36,C,1,C,检,样,25g(mL,）样品,+225mL,稀释液,只检测大肠菌群,大肠杆菌和大肠菌群同时检测,24 h,2h,10,倍系列稀释,接种,1ml,样品匀液到每张,Petrifilm,TM,大肠杆菌,/,大肠菌群测试片,计数蓝色带气泡的菌落,报告大肠杆菌数,36,C,1,C,24 h,2h,或,48 h,2h,计数蓝色带气泡和红色带气泡的菌落,报告大肠菌群数,含有改良的,VRB,培养基,目标菌落为红点带气泡,36,1C,24,2,h,培养时叠放片数小于,20,计数范围,15-150,AOAC,官方方法,3M,Petrifilm,TM,大肠菌群测试片,24,h,得出大肠菌群数,肉、家禽和海鲜，,24,h,得出大肠杆菌数,其它食品，,48,h,得出大肠杆菌数,E.coli,O157,表现为大肠菌群,3M,TM,Petrifilm,TM,大肠杆菌,/,大肠菌群测试片,谢谢大家,!,将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染液，染,1min,，水洗。,滴加革兰氏碘液，作用,1min,，水洗。,滴加,95%,乙醇脱色约,1530s,，直至颜色液被洗掉。不要过分脱色，水洗。,滴加复染液，复染,1min,，水洗，待干，镜检。,结果：,革兰氏阳性菌呈紫色,革兰氏阴性菌呈红色,革兰氏染色法：,back,IMVIC,色氨酸肉汤,：在,361,培养,242h,后，加,Kovacs,氏试剂,0.2-0.3ml,上层出现红色为靛基质阳性反应。,MR-VP,培养基,：,在,361,培养,482h,。以无菌操作移取,1ml,至,13100mm,试管中，加,5%-,萘酚乙醇溶液,0.6ml,40%,氢氧化钾溶液,0.2ml,，和少许肌酸结晶，振摇试管后静置,2h,，出现伊红色为,VP,试验阳性。,将,MR-VP,培养物的剩余部分再培养,48h,滴加,5,滴甲基红溶液。培养物变红则为甲基红试验阳性，变黄为阴性。,Kovacs,氏枸橼酸盐肉汤,：,361,培养,96h,后记录有无生长。,LST,肉汤,：于,361,培养,482h,，观察试管是否产气。,back,生化试验：,菌落挑取,三糖铁琼脂 蛋白胨水 半固体斜面,PH7.2,尿素琼脂,KCN,肉汤 赖氨酸脱羧酶试验培养基,克氏双糖铁琼脂,培养过夜,TSI,底层产酸不产硫化氢，,KCN,阴性，尿素阴性,大肠杆菌,革兰氏阴性菌,