Lowry氏法测定蛋白质含量.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,Lowry,氏法测定蛋白质含量,The Lowry Method for Protein,Quantitation,目的与要求：,掌握,Lowry,氏法测定蛋白质含量的原理及方法；,掌握分光光度法,实验原理,：,在碱性条件下蛋白质的肽键与,Cu,2+,螯合，形成蛋白质,-,铜复合物。（双缩脲反应,Biuret Reaction,）,蛋白质分子中带有酚基的酪氨酸极易使酚试剂中的磷钼酸,-,磷钨酸还原，生成钼蓝,-,钨蓝蓝色化合物，蓝色深浅与蛋白质含量成正比。利用蓝色深浅与蛋白质浓度成正比的关系可绘制标准曲线，测定样品中蛋白质含量。（还原反应）,操作步骤,1.,取三支试管分两组，按下表操作,试管编号,0 1 2,牛血清白蛋白标准,-1.0 -,蒸馏水,(,mL,)1.0 -,待测蛋白质溶液,(,mL,)-1.0,2.,各管加入试剂甲,5ml,混匀放置,10,分钟。,3.,各管加入试剂乙,0.5ml,后立即混匀，,37,水浴,30,分钟后用,500nm,单色光比色测定。,4.,计算 样品蛋白质含量（,ug,/ml,）,结果与计算,：,根据测定管光密度值计算血清蛋白质含量，,C,测,=A,测,*,C,标,/C,测,注意事项：,各管加酚试剂时必须快速，并立即摇匀，不应出现混浊。,移液管使用前要看清楚刻度和是否写着快、吹，如有则需要用洗耳球吹出剩余液体,进行测定时，加,F,olin,酚试剂时要特别小心，因为该试剂仅在酸性,pH,条件下稳定，但上述还原反应只在,pH=10,的情况下发生，故当,Folin,一酚试剂加到碱性的铜,蛋白质溶液中时，必须立即混匀，以便在磷钼酸,磷钨酸试剂 被破坏之前，还原反应即能发生。,分光光度计使用前需预热，绝对调零和空白管调节透光度为,100%,。,