高中生物基因工程的基本操作程序课件新人教版选修-PPT.pptx

高中生物基因工程的基本操作程序课件新人教版选修1、基因得结构、基因得结构(1)原核生物基因结构原核生物基因结构编码区编码区非编码区非编码区非编码区非编码区编码区上游编码区上游编码区下游编码区下游编码蛋白质编码蛋白质调控遗传信息得表达调控遗传信息得表达(调控程序调控程序)AATGTGCACGTAGTTAGTTACACGTGCATCAATC启动子启动子终止子终止子编码区编码区编码区编码区非编码区非编码区非编码区非编码区非编码区非编码区非编码区非编码区启动子启动子终止子终止子ATGTGCACGTAGTTAATGTGCACGTAGTTATACACGTGCATCAATTACACGTGCATCAATRNARNA聚合酶聚合酶聚合酶聚合酶AUGUGCACGUAGUUAAUGUGCACGUAGUUA 启动子启动子:位于基因首端一段能与位于基因首端一段能与RNARNA聚合酶结合并能起聚合酶结合并能起始始mRNAmRNA合成得序列。没有启动子合成得序列。没有启动子,基因就不能转录。基因就不能转录。RNA RNA聚合酶聚合酶:能够识别启动子上得结合位点并与其结合能够识别启动子上得结合位点并与其结合得一种蛋白质、得一种蛋白质、终止子终止子:位于基因得尾端得一段特殊得位于基因得尾端得一段特殊得DNADNA片断片断,她能她能阻碍阻碍RNARNA聚合酶得移动聚合酶得移动,并使其从并使其从DNADNA模板链上脱离下来模板链上脱离下来,使转录终止。使转录终止。编码区编码区非编码区非编码区非编码区非编码区(能编码蛋白质能编码蛋白质)启动子启动子终止子终止子(2)真核与真核与原核生物基因结构得比较原核生物基因结构得比较外显子外显子内含子内含子编码蛋白质编码蛋白质(不能编码蛋白质不能编码蛋白质)相同点相同点:都就是由能够编码蛋白质得编码区和具都就是由能够编码蛋白质得编码区和具有调控作用得非编码区。有调控作用得非编码区。不同点不同点:原核细胞基因得编码区就是连续得原核细胞基因得编码区就是连续得;真真核细胞得编码区就是间隔得核细胞得编码区就是间隔得,不连续得。不连续得。2、目得基因得概、目得基因得概念念主要就是指编码蛋白质基因主要就是指编码蛋白质基因例如例如:与生物抗逆性相关得基因与生物抗逆性相关得基因,与生物优与生物优良品质相关得基因良品质相关得基因,药物和保健品相关得基药物和保健品相关得基因因,与毒物降解相关得基因与毒物降解相关得基因,以及与工业所以及与工业所需要酶相关得基因。需要酶相关得基因。目前被广泛提取使用得目得基因有目前被广泛提取使用得目得基因有:苏云金杆菌抗虫基因、植物抗病基因苏云金杆菌抗虫基因、植物抗病基因(抗抗病毒、抗细菌病毒、抗细菌)、人胰岛素基因等。人胰岛素基因等。3 3、目得基因得获取得方目得基因得获取得方法法(4 4)从已有物种分离出目得基因从已有物种分离出目得基因(3)(3)用化学方法直接用化学方法直接人工合成目得基因人工合成目得基因(1)(1)从基因库中获取目得基因从基因库中获取目得基因(2)(2)应用应用PCR技术扩增目得基因技术扩增目得基因(1)(1)从基因库中获取目得基因从基因库中获取目得基因基因文库和部分基因文库得慨念基因文库和部分基因文库得慨念基因组文库和基因组文库和cDNA文库得主要区别文库得主要区别怎样从基因文库中找到我们所需要得目得怎样从基因文库中找到我们所需要得目得基因基因基因文库和部分基因文库得慨念基因文库和部分基因文库得慨念:将含有某种生物不同基因得许多将含有某种生物不同基因得许多DNA片段片段,导导入受体菌得群体中储存入受体菌得群体中储存,各个受体菌分别含有这种生各个受体菌分别含有这种生物得不同得基因物得不同得基因,称为基因文库。称为基因文库。基因文库中包含了一种生基因文库中包含了一种生物所有得基因物所有得基因,这种基因文库这种基因文库叫做基因组文库。叫做基因组文库。基因文库中包含基因文库中包含了一种生物得一部分基了一种生物得一部分基因因,这种基因文库叫做这种基因文库叫做部分基因文库。如部分基因文库。如:cDNA文库。文库。基因组文库得建立方法基因组文库得建立方法提取某种生物得全部提取某种生物得全部DNADNA用适当得限制酶酶切用适当得限制酶酶切一定大小得一定大小得DNADNA片段片段将将DNADNA片段与运载体连接片段与运载体连接导入受体菌中储存导入受体菌中储存基因组文库基因组文库方法一方法一:直接分离法直接分离法(鸟枪法鸟枪法)在细胞质中将在细胞质中将mRNA分离分离并加入反转录酶并加入反转录酶合成第二条合成第二条DNA链链外显子外显子内含子内含子 外显子外显子外显子外显子内含子内含子真核细胞得基因真核细胞得基因在细胞核内转录在细胞核内转录RNA在核内内含子被切去在核内内含子被切去,外显子彼此连接外显子彼此连接在细胞质中将在细胞质中将mRNA分离分离并加入反转录酶并加入反转录酶合成第二条合成第二条DNA链链基因得基因得cDNA不含内含子不含内含子mRNA原核细胞得基因原核细胞得基因在细胞质内转录在细胞质内转录基因组文库和基因组文库和cDNA文库得主要区别文库得主要区别 文库类型文库类型 cDNA文库文库 基因组文库基因组文库 文库大小文库大小基因中启动子基因中启动子(具有启动作用得具有启动作用得DNA片段片段)基因中内含子基因中内含子(位于编码蛋白质序位于编码蛋白质序列得非编码列得非编码DNA片段片段)基因多少基因多少 物种间得基因交流物种间得基因交流小小大大无无有有无无有有某种生物得部分基因某种生物得部分基因 某种生物得全部基因某种生物得全部基因可以可以部分基因可以部分基因可以大家学习辛苦了，还是要坚持继续保持安静继续保持安静怎样从基因文库中找到我们所需要得目得基因怎样从基因文库中找到我们所需要得目得基因 根据目得基因得有关信息根据目得基因得有关信息,例如例如,根据基因得根据基因得核苷酸序列、基因得功能、基因在染色体上得位核苷酸序列、基因得功能、基因在染色体上得位置、基因得转录产物置、基因得转录产物mRNA,以及基因得表达产物以及基因得表达产物蛋白质等特性来获取目得基因。蛋白质等特性来获取目得基因。(2)应用应用PCR技术扩增目得基因技术扩增目得基因定义定义:原理原理:DNA复制复制 PCR就是聚合酶链式反应就是聚合酶链式反应,就是一项在生就是一项在生物体外复制特定物体外复制特定DNA片段得核酸合成技术片段得核酸合成技术,在在短时间内大量扩增目得基因短时间内大量扩增目得基因 DNA分子热变性分子热变性(在在9095 OC时时,解解旋旋,双双链分开温度降低又结合成双链链分开温度降低又结合成双链)因此因此,在在PCR技技术中不需要解旋酶术中不需要解旋酶(与复制不同之在处与复制不同之在处)仪器仪器:PCR扩增仪扩增仪(自动调控温度得仪器自动调控温度得仪器)条件条件:有一段已知得基因得核苷酸序列有一段已知得基因得核苷酸序列,以便根以便根据这一序列合成引物据这一序列合成引物,脱氧核苷酸脱氧核苷酸,酶等。酶等。过程过程:a、DNA热变性热变性(909095 95 O OC C):b、复性复性(55(556060 O OC C):c、延伸延伸(70(7075 75 O OC C):d、重复重复a、b、c步骤步骤:双链双链DNA模板在热得作用模板在热得作用下下,氢键断裂形成单键氢键断裂形成单键DNA 系统温度降低系统温度降低,引物结合到互补引物结合到互补DNA链上链上,形成局部得双链形成局部得双链DNA 在在Taq酶作用下酶作用下,合成与模板互合成与模板互补得补得DNA子链子链,形成双链形成双链DNA 每重复一次每重复一次,目得基因增加一目得基因增加一倍倍PCR扩增为指数形式扩增扩增为指数形式扩增2n(n为扩增循环得为扩增循环得次数次数),在短时间内扩增大量目得基因。在短时间内扩增大量目得基因。用化学方法直接用化学方法直接人工合成目得基因人工合成目得基因反转录法反转录法mRNARNA与与DNA杂交链杂交链单链单链DNA双链双链DNA逆转录酶逆转录酶核苷酸酶核苷酸酶HDNA聚合酶聚合酶cDNA化学合成法化学合成法氨基酸序列氨基酸序列mRNA序列序列目得基因序列目得基因序列目得基因目得基因推测推测合成合成思考思考:不具有不具有,缺少非编码区缺少非编码区(启动子、终止子启动子、终止子)和非编和非编码序列码序列(如内含子如内含子),要人工构建。要人工构建。人工合成得目得基因就是否具有完整基因结人工合成得目得基因就是否具有完整基因结构得基因？构得基因？推测推测1 1 1 1、作用、作用、作用、作用:二、二、基因表达载体得构建基因表达载体得构建核核心心IMNIMN2 2、组成、组成:使目得基因在受体细胞中稳定存在使目得基因在受体细胞中稳定存在使目得基因在受体细胞中稳定存在使目得基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代。并遗传给子代。并遗传给子代。并遗传给子代。同时使目得基因能表达和发挥作用。同时使目得基因能表达和发挥作用。同时使目得基因能表达和发挥作用。同时使目得基因能表达和发挥作用。(3)(3)终止子终止子:就是使转录在需要得地方停止。就是使转录在需要得地方停止。(4)(4)标记基因标记基因:就是鉴别受体细胞中就是否含有目得就是鉴别受体细胞中就是否含有目得基因从而将含有目得基因得细胞筛选出来。基因从而将含有目得基因得细胞筛选出来。(2)(2)启动子启动子:就是就是RNA聚合酶识别和结合部位。聚合酶识别和结合部位。(1)(1)目得基因。目得基因。(5)复制原点复制原点:就是转录和复制得起点。就是转录和复制得起点。不同受体细胞不同受体细胞,目得基因导入受体细胞得方法不目得基因导入受体细胞得方法不同同,基因表达载体得构建有所差异。基因表达载体得构建有所差异。导入导入接种接种培养培养接种接种培养培养接种接种培养培养接种接种培养培养含有四环素得含有四环素得完全培养基完全培养基完全培养基完全培养基大肠杆菌不含大肠杆菌不含抗四环素基因抗四环素基因证明证明:不存活不存活含有四环素得含有四环素得完全培养基完全培养基证明证明:大肠杆菌含抗大肠杆菌含抗四环素基因四环素基因证明证明:大肠杆菌大肠杆菌得受体细胞含得受体细胞含有目得基因有目得基因 四环素四环素抗性基因抗性基因 四环素四环素抗性基因抗性基因完全培养基完全培养基存活存活如何把导入了目得基因得受体细胞筛选出来？如何把导入了目得基因得受体细胞筛选出来？存活得大肠杆菌存活得大肠杆菌培养培养培养培养质粒来源质粒来源:大肠杆菌大肠杆菌含有氨苄青霉素含有氨苄青霉素 得完全培养基得完全培养基含有四环素得含有四环素得完全培养基完全培养基人工改造质粒人工改造质粒(选择具有氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因农杆菌选择具有氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因农杆菌)质粒质粒知识拓展知识拓展Hin d限制性酶限制性酶Hin dIIIHin dIII目得目得DNA质粒质粒构建表达载体构建表达载体四环素抗性基因由于目得基因插入而失四环素抗性基因由于目得基因插入而失活活,形成只具有氨苄青霉素抗性基因形成只具有氨苄青霉素抗性基因DNA连接酶连接酶人类胰岛素得基因人类胰岛素得基因培养培养培养培养培养培养导入导入含目得基因得重组质粒导入大肠杆菌含目得基因得重组质粒导入大肠杆菌含有氨苄青霉素含有氨苄青霉素 得完全培养基得完全培养基含有四环素得含有四环素得完全培养基完全培养基两种培养基均不能生长大肠杆两种培养基均不能生长大肠杆菌菌 Ca2+处理细胞处理细胞形成感受态细胞形成感受态细胞检测检测(培养不具有氨苄青霉素培养不具有氨苄青霉素 抗性基因和四环素抗性积基因得大肠杆菌抗性基因和四环素抗性积基因得大肠杆菌)只有氨苄青霉素只有氨苄青霉素抗性基因质粒抗性基因质粒只具有氨苄青霉素只具有氨苄青霉素抗性基因大肠杆菌抗性基因大肠杆菌不具有氨苄青霉不具有氨苄青霉素素 抗性基因和抗性基因和四环素抗性积基四环素抗性积基因得大肠杆菌因得大肠杆菌完全培养基完全培养基培养培养检测含重组质粒得大肠杆菌检测含重组质粒得大肠杆菌含有氨苄青霉素含有氨苄青霉素 得完全培养基得完全培养基含有四环素得含有四环素得完全培养基完全培养基(大肠杆菌内含有氨苄青霉素抗性基因大肠杆菌内含有氨苄青霉素抗性基因,不含有四环素抗性基因不含有四环素抗性基因)只具有氨苄青霉素只具有氨苄青霉素抗性基因农杆菌抗性基因农杆菌不存活不存活存活存活证明证明:目得基因已导入质粒目得基因已导入质粒培养培养培养培养完全培养基完全培养基 培育出得培育出得到能够发酵产到能够发酵产生人类胰岛素生人类胰岛素得工程菌。得工程菌。寻根问底寻根问底:将生物得所有将生物得所有DNA直接导入受体细直接导入受体细胞不就是更简便吗？如果这么做胞不就是更简便吗？如果这么做,结果结果会怎样？会怎样？有人采用总有人采用总DNA注射法进行遗传转化注射法进行遗传转化:即将一个即将一个生物中得总生物中得总DNA提取出来提取出来,通过注射或花粉管通道法通过注射或花粉管通道法导入受体细胞导入受体细胞,没有进行表达载体得构建。没有进行表达载体得构建。这种方法针对性差这种方法针对性差,完全靠运气完全靠运气,也无法确也无法确定什么基因导入了受体细胞。此法目前争议颇定什么基因导入了受体细胞。此法目前争议颇多多,严格来说不算基因工程。严格来说不算基因工程。资资 料料:科学家在培育抗虫棉时科学家在培育抗虫棉时,起初把起初把苏云金芽孢杆菌得抗虫基因插入载体苏云金芽孢杆菌得抗虫基因插入载体质粒中质粒中,然后导入棉花得受精卵中然后导入棉花得受精卵中,结结果抗虫基因在棉花体内没有表达。果抗虫基因在棉花体内没有表达。然后在插入抗虫基因得质粒中插入抗虫基因启动然后在插入抗虫基因得质粒中插入抗虫基因启动子子,导入棉花受精卵导入棉花受精卵,长成得棉花植株还就是没有抗虫长成得棉花植株还就是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因得质粒中插入能力。科学家又在有启动子、抗虫基因得质粒中插入抗虫基因终止子抗虫基因终止子,导入棉花受精卵导入棉花受精卵,结果成长得植株结果成长得植株,有有了抗虫能力。了抗虫能力。资料证明资料证明:载体构建组成要完整载体构建组成要完整三、将目得基因导入受体细胞三、将目得基因导入受体细胞1、转化转化:目得基因进入受体细胞内目得基因进入受体细胞内,并且在受体细并且在受体细胞内维持稳定和表达得工程胞内维持稳定和表达得工程2、常见转化方法、常见转化方法:(1)(1)将目得基因导入微生物细胞将目得基因导入微生物细胞感受态细胞法。感受态细胞法。农杆菌转化法农杆菌转化法:双子叶植物和裸子植物。双子叶植物和裸子植物。(2)(2)将目得基因导入植物细胞将目得基因导入植物细胞基因枪法基因枪法:单子叶植物。单子叶植物。花粉管通道法花粉管通道法:双子叶植物。双子叶植物。显微注射法。显微注射法。(3)(3)将目得基因导入动物细胞将目得基因导入动物细胞常用法常用法:常用菌常用菌:微生物作受体细胞原因微生物作受体细胞原因:繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少过程过程:大肠杆菌大肠杆菌CaCa2+2+处理获得感受态细胞处理获得感受态细胞CaCaCaCa2+2+2+2+处理处理处理处理大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌感受态感受态感受态感受态 细胞细胞细胞细胞表达载体表达载体表达载体表达载体与感受态与感受态与感受态与感受态细胞混合细胞混合细胞混合细胞混合感受态细胞感受态细胞感受态细胞感受态细胞 吸收吸收吸收吸收DNADNA_感受态细胞法感受态细胞法:(1)将目得基因导入微生物细胞将目得基因导入微生物细胞例例:若通过基因过程生产人得糖蛋白可以用若通过基因过程生产人得糖蛋白可以用大肠杆菌作为工程菌吗？大肠杆菌作为工程菌吗？不可以不可以,糖蛋白上得糖链就是在内质网糖蛋白上得糖链就是在内质网和高尔基体上加工完成和高尔基体上加工完成,而内质网和高尔基而内质网和高尔基体存在真核细胞中体存在真核细胞中,大肠杆菌就是原核生物大肠杆菌就是原核生物,细胞中不含这两种细胞器。细胞中不含这两种细胞器。以酵母菌作为工程菌可以吗以酵母菌作为工程菌可以吗?可以可以,酵母菌为真核生物酵母菌为真核生物(真菌类真菌类)。特点特点特点特点:农杆菌转化法农杆菌转化法:(2)将目得基因导入植物细胞将目得基因导入植物细胞能感染双子叶植物和祼子植物能感染双子叶植物和祼子植物能感染双子叶植物和祼子植物能感染双子叶植物和祼子植物,对单子叶对单子叶对单子叶对单子叶植物没有感染能力植物没有感染能力植物没有感染能力植物没有感染能力过程过程过程过程:TiTi质粒得质粒得质粒得质粒得TDNATDNA可转移至受体细胞并整合到其染色体上可转移至受体细胞并整合到其染色体上可转移至受体细胞并整合到其染色体上可转移至受体细胞并整合到其染色体上适用生物适用生物:双子叶植物、祼子植物。双子叶植物、祼子植物。双子叶植物、祼子植物。双子叶植物、祼子植物。Hin d限制性酶限制性酶Hin dIIIHin dIII目得目得DNATi质粒质粒苏云金杆菌苏云金杆菌构建表达载体构建表达载体Bt毒素蛋白基因毒素蛋白基因 苏云金杆菌苏云金杆菌DNA连接酶连接酶 T-DNA(可转移可转移-DNA)知识拓展知识拓展农杆菌转化法得过程农杆菌转化法得过程:培养培养培养培养导入导入含目得基因得重组含目得基因得重组Ti质粒导入农杆菌质粒导入农杆菌含有氨苄青霉素含有氨苄青霉素 得完全培养基得完全培养基不能存活不能存活 Ca2+处理细胞处理细胞形成感受态细胞形成感受态细胞检测检测农杆菌农杆菌农杆菌农杆菌(培养不具有氨苄青霉素培养不具有氨苄青霉素 抗性基因和四环素抗性积基因得农杆菌抗性基因和四环素抗性积基因得农杆菌)具有氨苄青霉素抗具有氨苄青霉素抗性基因得农杆菌性基因得农杆菌农杆菌农杆菌不具有氨苄青霉不具有氨苄青霉素素 抗性基因得抗性基因得农杆菌农杆菌完全培养基完全培养基含有氨苄青霉素含有氨苄青霉素 得完全培养基得完全培养基农杆菌农杆菌证明证明:目得基目得基因已导因已导入入存活存活脱分化脱分化组织培养组织培养脱分化脱分化农杆菌农杆菌导入植物细胞通过组织培养产生新个体导入植物细胞通过组织培养产生新个体再分化再分化移植移植个体生物学个体生物学水平得鉴定水平得鉴定如虫吃后中毒死亡如虫吃后中毒死亡,则说明则说明摄入了抗虫基因并得到表达摄入了抗虫基因并得到表达导入植导入植物细胞物细胞组织培养组织培养花粉管通道法花粉管通道法:将目得基因导入植物细胞将目得基因导入植物细胞操作方法操作方法:特点特点:在植物花受粉后在植物花受粉后,花粉形成花粉管还末愈合前期花粉形成花粉管还末愈合前期,剪去柱头剪去柱头,然后然后,滴入滴入DNA(含得基因含得基因)使目得基因借使目得基因借助花粉管通道进入受体细胞助花粉管通道进入受体细胞十分简便经济十分简便经济例例:转基因抗虫棉转基因抗虫棉基因枪法基因枪法:利用压缩气体产生得动力利用压缩气体产生得动力,将包裹在金属粒表将包裹在金属粒表面得表达载体面得表达载体DNA打入受体细胞中打入受体细胞中,使目得基因与其使目得基因与其整合并表达得方法整合并表达得方法操作方法操作方法:金属粒金属粒:将目得基因导入单子叶植物细胞将目得基因导入单子叶植物细胞 钨粉粒子和金粉粒子钨粉粒子和金粉粒子,粒子得直径一般在粒子得直径一般在0、64um。适用适用:单子叶植物单子叶植物细胞类型细胞类型:操作程序操作程序:_显微注射法显微注射法:(3)将目得基因导入动物细胞将目得基因导入动物细胞发育成新性状动物发育成新性状动物发育成新性状动物发育成新性状动物移植到子宫或输卵管移植到子宫或输卵管移植到子宫或输卵管移植到子宫或输卵管培养成早期胚胎培养成早期胚胎培养成早期胚胎培养成早期胚胎显微注射显微注射显微注射显微注射取受精卵取受精卵取受精卵取受精卵提纯含目提纯含目提纯含目提纯含目得基因表得基因表得基因表得基因表达载体达载体达载体达载体受精卵受精卵四四 目得基因得检测与鉴定目得基因得检测与鉴定检查就是否成功检查就是否成功 导入过程完成后导入过程完成后导入过程完成后导入过程完成后,全部受体细胞都能摄入重组全部受体细胞都能摄入重组全部受体细胞都能摄入重组全部受体细胞都能摄入重组 DNA DNA分子吗？分子吗？分子吗？分子吗？真正能摄入重组真正能摄入重组真正能摄入重组真正能摄入重组DNADNADNADNA分子得受体细胞很少。分子得受体细胞很少。分子得受体细胞很少。分子得受体细胞很少。目得基因进入受体细胞后目得基因进入受体细胞后目得基因进入受体细胞后目得基因进入受体细胞后,就是否都能稳定维持就是否都能稳定维持就是否都能稳定维持就是否都能稳定维持和表达？和表达？和表达？和表达？不一定不一定不一定不一定,需要检测需要检测需要检测需要检测1、检测方法、检测方法:分子杂交技术分子杂交技术:(1)(1)DNA分子与分子与DNA分子得之间杂交分子得之间杂交(2)(2)DNA分子与分子与RNA分子得之间杂交分子得之间杂交(3)蛋白质分子蛋白质分子(抗原与抗体抗原与抗体)之间杂交之间杂交2、个体生物学水平得鉴定、个体生物学水平得鉴定:抗虫、抗病结种实验抗虫、抗病结种实验,活性比较实验活性比较实验1、检测、检测转基因生转基因生物得物得DNA探针探针15N N15N N14N N14N N(1)1)检测转基因生物染色体得检测转基因生物染色体得DNADNA上就是否插入了上就是否插入了目得基因目得基因基因探针基因探针:放射性同位素等标记得放射性同位素等标记得DNA分子分子方法方法 DNA分子杂交技术分子杂交技术变性变性变性变性变性变性变性变性变性变性变性变性方法方法 DNA分子杂交技术分子杂交技术(2)检测目得基因就是否转录出了检测目得基因就是否转录出了mRNA探针探针15N N15N N转基因生物转基因生物得得mRNA14N N14N N提取提取(3)检测目得基因就是否翻译成蛋白质检测目得基因就是否翻译成蛋白质方法方法抗原抗原-抗体杂交抗体杂交苏云金杆菌苏云金杆菌Bt毒素蛋白毒素蛋白将将Bt毒蛋白注毒蛋白注射小鼠体内射小鼠体内从小鼠血管抽出从小鼠血管抽出血液分离出抗血液分离出抗Bt毒素得抗体毒素得抗体抗体抗体蛋白质蛋白质 出现出现杂交带杂交带脱分化脱分化组织培养组织培养证明证明:提取蛋白质与提取蛋白质与Bt毒素蛋白质一样毒素蛋白质一样例例:用棉铃饲喂棉铃用棉铃饲喂棉铃虫虫,如虫吃后不出现中毒如虫吃后不出现中毒症状症状,说明未摄入目得基说明未摄入目得基因或摄入目得基因未表因或摄入目得基因未表达。如虫吃后中毒死亡达。如虫吃后中毒死亡,则说明摄入了抗虫基因则说明摄入了抗虫基因并得到表达。并得到表达。2 2、鉴定、鉴定个体生物学水平得鉴定个体生物学水平得鉴定(1)多细胞个体多细胞个体抗虫、抗病结种实验抗虫、抗病结种实验,活性比较实验活性比较实验 不能不能,受体细胞必须表现出特定得性状受体细胞必须表现出特定得性状,才能说明目得基因完成了表达。才能说明目得基因完成了表达。受体细胞摄入受体细胞摄入DNA分子后就说明目得基因分子后就说明目得基因完成了表达吗？完成了表达吗？若不能表达若不能表达,要对抗虫基因要对抗虫基因再进行修饰。再进行修饰。无表达产物无表达产物无表达产物无表达产物有表达产物有表达产物无表达产物无表达产物细菌得检测细菌得检测,将每个受体细胞单独培养形成菌落将每个受体细胞单独培养形成菌落,检检测菌落中就是否有目得基因得表达产物。淘汰无表达产测菌落中就是否有目得基因得表达产物。淘汰无表达产物得菌落物得菌落,保留有表达产物得进一步培养、研究。保留有表达产物得进一步培养、研究。(2)单细胞生物单细胞生物1 1、有关基因工程得叙述中有关基因工程得叙述中,错误得就是错误得就是()()A A、DNADNA连接酶将黏性末端得碱基对连接起来连接酶将黏性末端得碱基对连接起来 B B、限制性内切酶用于目得基因得获得、限制性内切酶用于目得基因得获得 C C、目得基因须由运载体导入受体细胞、目得基因须由运载体导入受体细胞 D D、人工合成目得基因不用限制性内切酶、人工合成目得基因不用限制性内切酶A课堂练习课堂练习