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2025年大学生物（微生物培养实验）试题及答案

（考试时间：90分钟 满分100分）
班级______ 姓名______

第I卷（选择题 共30分）
答题要求：本卷共10小题，每小题3分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。
1. 以下关于微生物培养基的说法，错误的是（ ）
A. 牛肉膏蛋白胨培养基是常用的天然培养基
B. 选择培养基可用于筛选特定的微生物
C. 固体培养基常用于微生物的分离和鉴定
D. 培养基中必须含有碳源、氮源、无机盐和水，无需添加生长因子
2. 高压蒸汽灭菌法通常在什么条件下进行（ ）
A. 100℃，15分钟
B. 121℃，15 - 30分钟
C. 160℃，2小时
D. 180℃，30分钟
3. 接种环常用的灭菌方法是（ ）
A. 干热灭菌
B. 高压蒸汽灭菌
C. 灼烧灭菌
D. 化学药剂灭菌
4. 平板划线法分离微生物时，以下操作正确的是（ ）
A. 每次划线前都需灼烧接种环
B. 划线时要快速用力，划破培养基表面
C. 只需要在第一区域划线，后续区域无需再划线
D. 划线结束后，接种环无需灭菌
5. 培养细菌时，适宜的pH范围一般是（ ）
A. 4.0 - 6.0
B. 6.5 - 7.5
C. 7.5 - 8.5
D. 8.5 - 9.5
6. 微生物培养过程中，防止杂菌污染的关键环节不包括（ ）
A. 培养基灭菌
B. 接种环境消毒
C. 操作人员无菌操作
D. 培养温度控制
7. 以下哪种微生物适合在厌氧条件下培养（ ）
A. 大肠杆菌
B. 醋酸菌
C. 乳酸菌
D. 酵母菌
8. 测定微生物数量的方法不包括（ ）
A. 平板计数法
B. 显微镜直接计数法
C. 比浊法
D. 重量法
9. 以下关于微生物生长曲线的说法，正确的是（ ）
A. 调整期微生物代谢活跃，体积增长较快
B. 对数期微生物数量呈指数增长，代谢产物积累最多
C. 稳定期微生物出生率与死亡率基本相等
D. 衰亡期微生物大量繁殖，数量急剧上升
10. 用于鉴定细菌是否产生某种酶的培养基是（ ）
A. 基础培养基
B. 鉴别培养基
C. 加富培养基
D. 选择培养基

第II卷（非选择题 共70分）

（总共4题，每题10分，答题要求：请简要回答问题，表述准确清晰）
1. 简述配制培养基的一般步骤。
2. 微生物接种的方法有哪些？各有什么优缺点？
3. 如何进行微生物培养的无菌操作？
4. 分析微生物生长曲线各阶段的特点及影响因素。

（总共2题，每题15分，答题要求：根据所给材料，结合所学知识进行分析解答，观点明确，逻辑清晰）
材料：在进行微生物培养实验时，某同学按照常规方法配制了培养基，灭菌后接种了大肠杆菌。在培养过程中，发现培养基表面出现了多种不同形态的菌落。
1. 请分析出现多种不同形态菌落的可能原因。
2. 针对这种情况，该同学应该采取哪些措施来解决？

材料：某实验室要培养一种对氧气敏感的厌氧菌。
1. 设计一个适合该厌氧菌培养的方案，包括培养基的选择、培养条件的设置等。
2. 如何检测培养过程中该厌氧菌的生长情况？

答案：
1. D
2. B
3. C
4. A
5. B
6.D
7. C
8. D
9.C
10. B

1. 配制培养基的一般步骤：计算所需各种成分的用量；称量，准确称取各种成分；溶化，将称好的成分放入适当容器，加入适量蒸馏水，加热溶解；调pH，根据要求用酸碱调节培养基的pH；过滤，去除不溶性杂质；分装，将培养基分装到合适的容器中；灭菌，采用合适的灭菌方法对培养基进行灭菌。
2. 微生物接种的方法及优缺点：平板划线法，优点是操作简单，能使微生物在培养基表面分散生长，便于观察和分离单个菌落；缺点是不能准确计数。稀释涂布平板法，优点是可以计数，能得到单菌落；缺点是操作相对复杂。穿刺接种法，用于半固体培养基，可观察微生物的运动等特性。
3. 进行微生物培养无菌操作：实验前，对操作空间进行清洁和消毒；操作人员穿戴工作服、口罩、帽子等，洗手消毒；所用仪器、培养基等进行灭菌处理。接种时，在酒精灯火焰旁操作，接种环等接种工具灼烧灭菌后使用；打开培养皿等容器时，尽量减少开口时间和面积。培养过程中，保持培养环境的清洁，定期检查培养物是否被污染。
4. 微生物生长曲线各阶段特点及影响因素：调整期，微生物适应新环境，代谢活跃，体积增长较快，影响因素有接种量、培养基成分等。对数期，微生物数量呈指数增长，代谢旺盛，个体形态和生理特性稳定，影响因素有营养物质、温度、pH等。稳定期，微生物出生率与死亡率基本相等，活菌数保持相对稳定，代谢产物积累，影响因素有营养物质消耗、有害代谢产物积累等。衰亡期，微生物大量死亡，数量急剧下降，影响因素有环境恶化等。

材料题1：出现多种不同形态菌落的可能原因：培养基灭菌不彻底，残留有其他微生物；接种过程中受到污染，如接种环境不清洁、接种工具未彻底灭菌等；菌种不纯，本身含有多种微生物。解决措施：重新配制培养基并严格灭菌；对接种环境进行更彻底的消毒，对接种工具进行充分灼烧灭菌；重新分离和纯化菌种，确保使用纯净的菌种进行培养。

材料题2：适合该厌氧菌培养的方案：选择不含氧气或氧气含量极低的培养基，如疱肉培养基。培养条件设置为无氧环境，可采用厌氧培养箱或在培养基表面覆盖凡士林等隔绝空气。检测培养过程中该厌氧菌生长情况的方法：定期观察培养基的浑浊度变化，若变浑浊可能有细菌生长；可通过显微镜观察菌液中是否有该厌氧菌的形态特征；还可以进行活菌计数，如采用稀释涂布平板法（在无氧条件下操作）来确定菌数的变化。