ABO亚型鉴定解析.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,2012.03,ABO,亚型,武汉亚洲心脏病医院检验中心,A,和,B,抗原是红细胞膜表面糖蛋白、糖脂分子的糖类决定簇。,A,抗原末端糖基,:N-,乙酰氨基半乳糖,B,抗原末端糖基,:D-,半乳糖。,Karl,Landsteiner,(1868-1943),ABO,抗原不是,ABO,基因的直接产物,ABO,血型分子生物学基础,ABO,亚型理论,A,亚型分类依据,红细胞上的,A,抗原依次减少，,H,抗原的活性则相对增强,幻灯片,3,1,、红细胞被抗,A,及抗,A1,凝集的程度,2,、红细胞被抗,AB,凝集的程度,3,、红细胞的,H,反应性程度,4,、血清内有无抗,A1,抗体,5,、分泌型人唾液内具有的,A,及,H,物质,抗,-A1,抗,-AB,抗,-H,A2C,抗,-A,、抗,-B,、,AC,、,BC,、,OC,亚型试剂,常规试剂,A1,和,A2,占,A,型的,99.99%,血清学区别：依赖抗,-A1,抗血清,试剂红细胞,唾液,（分泌型）,-A,-B,-AB,-A1,-H,A1,A2,B,O,A1,4+,0,4+,2+,W/0,0,0,4+,0,A/H,A2,4+,0,4+,0,3+,0/,W,0,4+,0,A/H,A,int,4+,0,4+,2+,3+,0,0,4+,0,A/H,1,、如无抗,-A1,，,A1,和,A2,不需加以区分。,2,、产生抗,-A1,的频率，,A2,型为,1%-8%,；,A2B,型为,22%-35%,。,3,、抗,-A1,在,37,反应才具有临床意义。,A3,和,Aend,两者均呈现,mf,外观,抗血清,试剂红细胞,唾液,（分泌型）,-A,-B,-AB,-A1,-H,A1,A2,B,O,A3,3+mf,0,3+mf,0,3+,0/w,0,4+,0,A/H,Aend,1+mf,0,1+mf,0,4+,0/w,0,4+,0,H,1,、,A3,凝集细胞占,60%,；,Aend,凝集细胞占,10%,，,Aend,需多次离心,才能被发现。,2,、出现,mf,时，要进行临床调查，了解患者是否是为白血病或骨,髓移植，如疑是疾病原因造成，应慎报亚型。,Ax,、,Ael,和,Am,抗血清,试剂红细胞,唾液,（分泌型）,-A,-B,-AB,-A1,-H,A1,A2,B,O,Ax,w,0,1+-3+,0,4+,w,0,4+,0,H,Ael,0,0,0,0,4+,w,0,4+,0,H,Am,0-1+,0,0-1+,0,4+,0,0,4+,0,A/H,Ay,极罕见，表现型与,Am,很相似,各种弱,A,亚型的鉴别要领,红细胞,与抗,-A,及,/,或,抗,-AB,反应,弱凝集,A3/Ax/,Aend,混合外观,(Mf,）,60%,A3,10,红细胞呈十分弱的,mf,凝集,Aend,与抗,-A,呈弱凝，与抗,-AB,凝集增强,Ax,不凝集,吸附放散抗,-A,Am/Ay/,Ael,容易吸附放散抗,-A,Am,分泌型唾液中有一定量的,A,物质,不容易吸附放散抗,-A,Ay,分泌型唾液含少量的,A,物质,吸附放散抗,-A,Ael,分泌型唾液只含,H,物质无,A,物质,B,亚型,B3,、,Bx,、,Bel,、,Bend,、,Bm,血清学特点同相应,A,亚型,不同之处，鉴定时不需抗,-A1,试剂，及,A2,细胞,抗血清,试剂红细胞,唾液,（分泌型）,-A,-B,-AB,-A1,-H,A1,A2,B,O,B3,0,3+mf,3+mf,0,4+,4+,3+,0/w,0,B/H,Bend,0,1+mf,0,0,4+,4+,4+,0/w,0,H,Bx,0,w,1-3+,0,4+,4+,3+,w,0,H,Bel,0,0,0,0,4+,4+,4+,w,0,H,Bm,0,0-1+,0-1+,0,4+,4+,3+,0,0,B/H,AB,亚型,A2B,、,A3B,、,AxB,、,AmB,、,AelB,、,AendB,、,AB3,、,ABx,、,ABm,、,ABel,、,ABend,同,A,亚型和,B,亚型的血清学特点,不同之处：不需抗,AB,血清鉴定；与抗,H,的凝集强度弱，呈,w/0,，同,A1B,抗血清,试剂红细胞,唾液,（分泌型）,-A,-B,-AB,-A1,-H,A1,A2,B,O,A1B,4+,4+,4+,4+,w/0,0,0,0,0,H/A/B,AxB,w,4+,4+,0,w/0,w,0,0,0,B/H,ABx,4+,w,4+,4+,w/0,0,0,w,0,cisAB,cisAB,是一种罕见的,ABO,亚型，人群中的发生率非常低，大约在,170000,到,580000,之间。最早出现起源于亲代与子代的,ABO,血型是遗传的矛盾，按照,ABO,三复等位基因学说和孟德尔遗传定律，,AB,和,O,型的双亲不可能生下,AB,型或,O,型的子代。,分子机理：在,A,等位基因的基础上发生了碱基错义突变，变异的,A,基因具有编码双功能活性酶的能力，血清学除了表现,A,抗原的特异性外，还表现少量,B,抗原的特异性。,血清学特点：,A,抗原接近正常或弱略于正常；,B,抗原较正常弱很多；,抗血清,试剂红细胞,唾液,（分泌型）,-A,-B,-AB,-A1,-H,A1,A2,B,O,cisAB,2-4+,2+,4+,0,4+,0,0,1-3+,0,H/A,ABx,4+,w,4+,4+,w/0,0,0,w,0,B,（,A,）,同,cisAB,的遗传方式相似，也是一种罕见的,ABO,亚型，,cisAB,是在,1964,年发现，,B(A),是在,1985,年发现；,分子机理：被认为是遗传学上的,B,型，在,B,基因基础上发生错义突变，由于单碱基突变，变异的,B,基因具有编码双功能活性酶的能力，血清学除了表现为,B,抗原特异性外，还表现为少量,A,抗原特异性。,血清学特点：较弱的,A,抗原和接近正常的,B,抗原特异性，血清中有较强的抗,-A,。,抗血清,试剂红细胞,-A,-B,-AB,-A1,-H,A1,A2,B,O,B,（,A),2+,4+,4+,0,4+,1-3+,1+,0,0,AxB,w,4+,4+,0,w/0,w,0,0,0,cisAB,、,B(A),正常,AB,型，,A,和,B,等位基因分别位于,9,号同源染色体的,ABO,位点上，分别从父方或母方遗传得到。,极少数人类个体的一条,9,号染色体上存在一个,cisAB,或,B,（,A,）,基因，它编码的酶具有双功能活性，可以同时催化,A,抗原和,B,抗原的合成。,cisAB,的,A,抗原接近正常，,B,抗原较正常弱很多；,B(A),的,B,抗原接近正常，,A,抗原弱很多。,cisAB,或,B,（,A,）,血清中存在针对弱抗原产生的不规则抗体,与抗,H,反应强度仅次于甚至接近与,O,细胞。,血清学方法判断为,AB,亚型，需分子生物学验证,cisAB,或,B,（,A,）,是从一个亲本遗传而来的，因此基因型是,cisAB,/,O,或,B,（,A,）,/,O,，表现型为,AB,型。,带有,cisAB,或,B(A),等位基因的个体，若与,O,型血的人（基因型,O,/,O,）生育，子女的血型可能表现为,AB,型或,O,型，而不像通常,AB,型血与,O,型血的父母只能生出,A,或,B,型血的子女。,孟买型和类孟买型,孟买型和类孟买型在,ABO,血型系统中为罕见的稀有血型，常因交叉配血不合而被发现。,为红细胞上,H,抗原缺乏而使,ABO,血型物质不能正常合成的一类血型。,遗传特点：与,A,、,B,基因相对独立的,H-h,系统是,hh,纯合子，不能合成表达,A,或,B,基因的前提物质,-H,物质,孟买型,类孟买型,H,抗原缺乏，非分泌型（,H,和,Se,基因均无活性），其红细胞和分泌液中均无,ABH,物质；,血清中有很强的抗,-H,，血清与所有,O,型人的红细胞反应都很强。,H,抗原缺乏，分泌型（,H,基因无活性而,SE,基因有活性），其分泌液中含有正常,ABH,物质，红细胞上含有少量,ABH,物质，一般认为可能为血浆中的,ABH,物质吸附到红细胞上所致，可通过吸收放散试验测得。,红细胞上,ABH,抗原缺乏或弱表达，血清中存在抗,H,或抗,HI,抗体,1952,年发现,1961,年发现,孟买型和类孟买型,血清学特点,抗血清,试剂红细胞,唾液,（分泌型）,-A,-B,-AB,-A1,-H,A1,A2,B,O,Oh,0,0,0,0,4+,4+,4+,3+,-,Omh,0,0,0,0,4+,4+,4+,w,H,Amh,w,0,w,0,0,w,0,4+,w,A/H,Bmh,0,w,w,0,0,4+,3+,w,w,B/H,血清学方法繁琐，结合正反定型、抗体筛选、吸收放散试验、唾液中的血型物质测定以及家系调查来综合分析。分子生物学方法进行,ABO,基因定型简便、快速、可靠，成为输血医学的研究热点,。,ABO,正反定型不一致,原因,类型,处理,正定型,额外抗原,多凝集,获得性,B,直抗强阳性,抗原减弱或缺失,血型物质增多,疾病原因,亚型,反定型,抗体减弱或缺失,年龄因素,丙球减少或缺乏,额外抗体,自身抗体,假凝集,亚型不规则抗体,同种抗体,ABO,正反定型不合原因分析,正定型,反定型,自身,C,可能原因,抗,-A,抗,-B,A1C,BC,OC,1,4+,0,1+,4+,0,0,2,4+,4+,2+,2+,2+,2+,3,3+,4+,1+,0,0,0,4,4+,4+,2+,2+,2+,0,5,0,0,2+,4+,0,0,6,0,0,4+,4+,4+,0,7,4+,0,0,4+,3+,0,同种抗体,A,亚型,缗钱状凝集,冷自身抗体,AB,型的亚型,同种抗体,A,型 抗,-H,O,型,A,亚型,同种抗体,孟买型,同种抗体,ABO,正反定型不一致,红细胞三洗,6,管：,-A,、,-B,、,AC,、,BC,、,OC,、自身,C,正常：,2,管强凝集，其他,4,管阴性,（,正定型,4+,；反定型,2+,）,异常：,1,、出现其他的凝集（不规则抗体,),2,、不到,2,管强凝集（,ABO,亚型、抗原、抗体减弱）,不规则抗体,亚型,6,管反应结果,ABO,亚型鉴定流程,1,、人,-A,、人,-B,2,、,-H (,新鲜,BC,、,OC,对照,）,3,、,-AB(,单独,A,亚型、,B,亚型,）,4,、,-A1 (,A,亚型的鉴定,),5,、排除其他不规则抗体,H,抗原强弱：,OA,亚,/B,亚,B AB,亚型,A1 A1B,ABO,亚型案例分析,案例,1,反应条件,正定,反定,-A,-B,Ac,Bc,Oc,自身,c,IS,0,1+w,4+,1+w,0,0,二次,0,2+w,4+,1+w,0,0,4*10 min,0,2+,2+,RT,恢复,0,2+w,2+w,0,0,Step1,正定型,多次离心,4,反应,吸收放散,反定型,多次离心,4,反应,加大血清量,吸收放散,增强抗原抗体反应,分析：,1,、强凝集,1,管，弱凝集,2,管。,2,、,B,抗原减弱，血清中存在正常抗,A,同时还有与,BC,反应的弱不规则抗体,3,、怀疑,B,亚型,4,、进一步实验：,Step2,-H,PC,OC,BC,IS,4+,4+,2+,Step3,关键步骤,人,-A,人,-B,-AB,IS,0,0,二次,0,0,1+S,4,0,2+w,考虑到人源抗血清效价比较低的缘故，并未得到预期的结果，但,4,显示有,B,抗原存在，与抗,-AB,也未见增强,H,抗原：,OA,亚,/B,亚,B AB,亚型,A1 A1B,根据以上的反应格局，高度怀疑,Bx,鉴于,Bx,亚型的血清学特征，即为血清中存在能凝集常规,BC,的抗体，为减少偶然性，选择健康,B,型,2,份，,O,型,2,份（对照），分别与待检血清反应,2dps+1d,BC-1,BC-2,OC-1,OC-2,IS,0,0,二次,0,0,排除其他不规则抗体，进一步证实为不规则抗,B,Step4,根据以上结果，该病例红细胞上有弱的,B,抗原，血清中有强的抗,A,和弱的不规则抗,B,红细胞与抗,H,呈强阳性凝集，根据血清学格局，初步判断为,Bx,亚型，须经分子生物学实验进一步确认。,结论,案例,2,反应条件,正定,反定,-A,-B,Ac,Bc,Oc,自身,c,IS,2+,0,2+S,3+S,0,0,二次,2+S,0,2+S,4+,0,0,Step1,分析：,1,、强凝集只有,1,管，弱凝集有,2,管。,2,、,A,抗原减弱，血清中有正常抗,B,，同时还存在,与,A1C,反应的比较弱的不规则抗体,3,、怀疑,A,亚型,4,、进一步实验：抗,-A1,、抗,-AB,、抗,-H,，,A2,细胞,Step2,人,-A,人,-B,-A1,-AB,IS,2+,0,0,4+,二次,2+s,0,0,4+,A1C,3+,与抗,-A1,不反应，为,A,亚型；同时与抗,-AB,凝集增强，进一步证明为,A,亚型,血清与,A1C,反应，与,A2C,不反应，证明存在不规则抗,-A1,抗体,Step3,PS+A2C,抗,-A+A2C,IS,0,3+w,二次,0,3+,Step4,-H,PC,OC,BC,IS,3+S,4+,2+,H,抗原增强，凝集强度与,O,细胞相当,根据以上的反应格局，高度怀疑,Ax,。,2dps+1d,AC-1,AC-2,OC-1,OC-2,IS,2+W,2+W,0,0,二次,2+,2+,0,0,排除其他不规则抗体，进一步证实为不规则抗,A1,Step5,结论,根据以上结果，该病例红细胞上有弱的,A,抗原，血清中有强的抗,A,和弱的不规则抗,A1,红细胞与抗,H,呈强阳性凝集，根据血清学格局，初步判断为,Ax,亚型，须经分子生物学实验进一步确认。,案例,3,反应条件,正定,反定,-A,-B,Ac,Bc,Oc,自身,c,IS,2+s,4+,1+w,0,0,0,二次,3+w,4+,1+w,0,0,0,4*10 min,2+w,1+s,RT,恢复,1+s,0,0,0,Step1,分析：,1,、强凝集,1,管，弱凝集,2,管。,2,、,A,抗原减弱，,B,抗原正常，血清中存与,AC,反应的弱不规则抗体,3,、怀疑,A,亚型,B,4,、进一步实验,Step2,人,-A,人,-B,-A1,IS,2+w,4+,0,二次,2+,4+,0,A1C,3+,与抗,-A1,不反应，为,A,亚型,血清与,A1C,反应，与,A2C,不反应，证明存在不规则抗,-A1,抗体,Step3,PS+A2C,抗,-A+A2C,IS,0,3+w,二次,0,3+,Step4,-H,PC,OC,BC,IS,4+,2+,二次,1+w,4+,2+s,H,抗原未见增强，因为有正常的,B,基因,根据以上的反应格局，高度怀疑,AxB,2dps+1d,AC-1,AC-2,OC-1,OC-2,IS,0,0,0,0,二次,0,0,排除其他不规则抗体，进一步证实为不规则抗,A1,Step5,案例,4,Step1,反应条件,正定,反定,-A,-B,Ac,Bc,Oc,自身,c,IS,1+,4+,2+s,0,0,0,二次,1+s,4+,3+,0,0,0,AxB,?B(A)?,Step2,IS,2+,二次,2+,Step3,PS+A2C,人,-A,人,-B,-A1,IS,0,4+,0,二次,0,4+,0,A1C,3+,人,-A,并未得到预期的结果。抗,-A1,不反应，初步判断为,A,亚,B,。仍然不能区分是,AXB,还是,B(A),排除,AXB,，,AXB,与,A2,细胞不反应，此点是鉴别,B(A),与,AXB,最有价值的依据之一,-H,PC,OC,BC,IS,4+,4+,2+s,二次,4+,4+,2+s,Step4,AXB,与抗,-H,呈弱凝集，而,B(A),与抗,-H,呈强凝集，这也是区分两者的一个非常重要的标记,结论：根据以上血清学实验，初步定为,B(A),亚型，须经分子生物学实验进一步确认。,B(A),亚型的特点：,1,、红细胞上,A,抗原减弱，,B,抗原基本正常,2,、,H,抗原增强，与,O,细胞,H,抗原相当,3,、血清中的抗,-A,与,A1,、,A2,细胞均有反应,B(A),与,AXB,的区别：,1,、,B(A),的,H,抗原增强，,AXB,不增强,2,、,B(A),的血清与,A1,、,A2,细胞均反应；,AXB,只与,A1,细胞反应。,案例,5,反应条件,正定,反定,-A,-B,Ac,Bc,Oc,自身,c,IS,4+,0,0,2+,0,0,二次,4+,0,2+,0,0,4*10 min,1+w,2+s,RT,恢复,1+w,0,2+,0,0,Step1,分析：,1,、强凝集,1,管，弱凝集,2,管。,2,、,A,抗原正常，,B,抗原减弱，血清中存与,BC,反应的弱不规则抗体,3,、怀疑,AB,亚型,4,、进一步实验：,Step2,-H,PC,OC,BC,IS,0,3+,1+w,二次,3+s,1+,4,1+,4+,1+s,Step3,人,-A,人,-B,-A1,IS,3+S,0,4+,二次,3+S,0,4,4+,人源抗血清显示有正常,A,抗原，有比较弱的,B,抗原。此处增加抗,-A1,的目的用以区分,CisAB,H,抗原未见增强，,CisAB,呈,4+,两者可区分,根据以上的反应格局，怀疑,ABx,2dps+1d,BC-1,BC-2,OC-1,OC-2,IS,2+,2+,0,0,二次,2+s,2+s,0,0,排除其他不规则抗体，进一步证实为不规则抗,B,Step4,案例,6,反应条件,正定,反定,-A,-B,Ac,Bc,Oc,自身,c,IS,4+,2+,0,2+w,0,0,二次,4+,3+w,0,2+,0,0,4*10 min,0,2+s,0,0,Step1,分析：,1,、强凝集,1,管，弱凝集,2,管。,2,、,A,抗原正常，,B,抗原减弱，血清中存与,BC,反应的弱不规则抗体,3,、怀疑,AB,亚型,ABx,?,CisAB,?,4,、进一步实验：,Step2,人,-A,人,-B,-A1,IS,1+s,0,二次,2+s,1+,0,4,3+s,2+,A1C,3+,与抗,-A1,不反应，说明,A,抗原为非正常,A1,型。初步排除,ABX,-H,PC,OC,BC,IS,4+,4+,2+w,二次,4+,4+,2+,Step3,ABx,与抗,-H,呈弱凝集，而,CisAB,与抗,-H,呈强凝集，这是区分两者的一个非常重要的标记,结论：根据以上血清学实验，初步定为,CisAB,亚型，须经分子生物学实验进一步确认。,cisAB,亚型的特点：,1,、红细胞上,A,抗原基本正常，,B,抗原弱于正常,B,抗原,2,、,H,抗原增强，与,O,细胞,H,抗原相当,3,、血清中存在弱的抗,-B,cisAB,与,ABx,的区别：,1,、,cisAB,的,H,抗原增强，,ABx,不增强,2,、,cisAB,的红细胞与抗,-A1,不反应；,ABx,与抗,-A1,反应,案例,7,反应条件,正定,反定,-A,-B,Ac,Bc,Oc,自身,c,IS,0,0,3+s,0,0,0,二次,0,0,4+,1+w,0,0,4*10 min,0,0,1+s,0,0,Step1,分析：,1,、强凝集,1,管，弱凝集,1,管。,2,、,O,型：抗,-B,减弱？,3,、,B,亚型：,B,抗原未检出，血清中有不规则抗,B?,4,、进一步实验：,Step2,-H,PC,OC,BC,IS,4+,4+,2+,二次,4+,4+,2+,Step3,人,-A,人,-B,-AB,IS,0,0,0,二次,0,0,0,4,0,0,0,人源血清和抗,-AB,均显示不反应。,H,抗原增强，,B,亚型和,O,型仍然无法区分。,由于该标本为健康献血员，无其他疾病史，可排除抗体减弱的可能。进一步实验，证明是否存在,B,抗原。,Step4,吸收放散试验,PC,OC,（对照）,4 1h,离心吸出上清,4NS,洗涤,6,次,56,热放散,10min,立即离心,吸出上清液（放散液）,再次离心,放散液中加入,BC,，,4,过夜,人,-B,离心看结果,4,过夜,PC,放,OC,放,IS,（,Bc,),2+,证明有,B,抗原存在,根据以上的反应格局，怀疑,Bel,2dps+1d,BC-1,BC-2,OC-1,OC-2,IS,0,0,0,0,二次,1+w,1+w,0,0,排除其他不规则抗体，进一步证实为不规则抗,B,Step5,结论,根据以上血清学试验，初步鉴定为,Bel,型。,其特点：,红细胞上仅有很少量的,B,抗原，常规的血清学方法难以检测出，需通过吸收放散试验才能证明,血清中通常存在不规则抗,B,需与抗,B,减弱的,O,型相区别,案例,8,反应条件,正定,反定,-A,-B,Ac,Bc,Oc,自身,c,IS,2+mf,4+,0,0,0,0,二次,2+mf,4+,0,0,0,0,+4dPs,0,0,4*10 min,RT,恢复,0,0,Step1,分析：,1,、强凝集,1,管，弱凝集呈,mf,。,2,、,mf,：疾病原因、异型输血、嵌合体、骨髓移植、亚型,3,、怀疑,A3B,4,、进一步实验：,鉴定血清中是否存在不规则抗,-A1,，排除,Step2,-H,PC,OC,BC,IS,4+,2+,二次,1+,4+,2+,Step3,人,-A,人,-B,IS,2+mf,4+,二次,2+mf,4+,人,-A,也显示为,mf,H,抗原未见增强,结论,根据以上血清学试验，可初步鉴定为,A3B,，进一步进行分子生物学试验确定,特点：,红细胞与抗,-A,、抗,-AB,反应，表现为,mf,，大约有,60%,凝集，周围有约,40%,未凝集红细胞,血型鉴定当出现,mf,外观时，对于白血病患者不轻易报亚型,我科案例,Step1,反应条件,正定,反定,-A,-B,Ac,Bc,Oc,自身,c,强生卡,3+,4+,4+,0,/,/,长春卡,2+,4+,4+,0,0,/,IS,0,4+,3+,0,0,0,多次,0,4+,3+,0,0,0,4*10min,0,4+,IS,1+,4+,二次,1+s,4+,AxB,?B(A)?,长春博得,南京欣迪,Step2,IS,2+,二次,2+,Step3,抗筛,强声卡,0,0,0,排除血清中,ABO,血型以外的不规则抗体,进一步排除,AXB,，,AXB,与,A2,细胞不反应，此点是鉴别,B(A),与,AXB,最有价值的依据之一,-H,PC,OC,BC,ABC,IS,2+,3+,+-,0,二次,2+s,3+s,1+w,+-,Step4,PS+A2C,AXB,与抗,-H,呈弱凝集，而,B(A),与抗,-H,呈强凝集，排除,AXB,结论,：根据以上血清学实验，初步定为,B(A),亚型，须经分子生物学实验进一步确认。送上,海血液中心进行分子生物学验证，基因型为,BA04/O04,。,遗憾之处,：未进行家系调查,2dps+1d,AC-1,AC-2,OC-1,OC-2,IS,2+s,2+s,0,0,二次,3+w,3+w,0,0,Step5,进一步排除其他不规则抗体的存在,Thank you!,