自身抗体检测及应用-华西医院.ppt

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,自身抗体检测及应用,彭 晓 东,自身免疫(,autoimmunity,),机体免疫系统针对自身成分发生免疫应答反应，出现自身抗体或致敏淋巴细胞的现象。,自身抗体(,autoantibody,),针对自身组织器官、细胞及细胞内成分的抗体。,概 念,自身免疫性疾病(,autoimmune disease，AID,),因自身免疫反应导致组织器官损伤或功能障碍所致疾病。,自身抗体的特性,自身免疫性疾病的重要标志,高滴度存在于自身免疫性疾病患者,与疾病的活动性相关,参与免疫病理性损伤,检测自身抗体常用的方法,间接免疫荧光法（,IIF）,ELISA,免疫印迹法,（,Western-blot）,酶免疫斑点法,常检测的自身抗体,类风湿因子（,RF）,抗核抗体（,ANA）,抗可提取性核抗原抗体（,ENA）,抗中性粒细胞胞浆抗体（,ANCA）,抗角蛋白抗体（,AKA）,抗心磷脂抗体（,ACA,）,类风湿因子,（,rheumatoid factor,RF）,抗变性,IgG Fc,的自身抗体，主要类型是,IgM,型,致病机理：,RF,与体内变性,IgG,结合形成免疫复合物，激活补体或被吞噬细胞吞噬，产生炎性介质导致组织炎性损伤，使患者发生骨关节炎及血管炎。,检测方法：,1.胶乳颗粒凝集实验,定性、半定量，敏感性和特异性不高，测定,IgM,-RF,2.速率散射比浊法（,ARRAY、IMAGE）,定量、准确、快速，测定,IgM,-RF,3.ELISA,定量、准确，可测定不同类型的,RF,临床应用：,（1）RF,在,RA、SLE、PSS,等多种自身免疫性疾病患者中均可被检出。,疾病,阳性率%,RA,79,SLE,30,SS,95,Sclerosis,80,PM,80,MCTD,25,（2）RF,滴度与,RA,患者临床表现呈正相关，,IgM,-RF,效价80,IU/ml,并伴有严重关节功能障碍 时通常提示患者预后不良。（3）,IgG,-RF,与,RA,患者的滑膜炎、血管炎和关节 症状密切相关，常伴随,IgM,-RF,同时出现，在正常人及非,RA,患者中很难检出。（4）,IgA,-RF,与,RA,患者关节症状的严重程度及骨 质破坏有显著相关性。,临床应用：,抗核抗体,（,antinuclear antibody，ANA）,以真核细胞（如,HEp,-2,细胞、肝细胞）的各种细胞核成分为靶抗原所检测的自身抗体的总称。,分类和命名,以首先检出该抗体的患者名字命名，如抗,Sm,、,抗,Sa,抗体等；,以相关疾病命名，如抗,Scl,-70、,抗,SS-A、,抗,SS-B,抗体等；,以抗原的部位命名，如抗核仁抗体、抗线粒体抗体、抗核膜抗体、抗细胞浆抗体等；,以抗原的化学性质进行分类命名，如抗,DNA、,抗,RNP、,抗组蛋白抗体等。,抗核抗体检测方法,间接免疫荧光法,（,indirect,immunofluorescence,IIF）,酶免疫斑点法,ELISA,免疫印迹法,（,Western-blot）,间接免疫荧光法,HEp,-2,细胞肝组织切片,荧光标记抗体,病人血清（待检抗体）,细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞周期,均质型 核糖体型 肌蛋白型 中心体型,斑点型 线粒体型 波形纤维蛋白型 纺缍体型,核仁型 高尔基体型 细胞角蛋白型 纺缍丝型,着丝点型 溶酶体型 原肌球蛋白型 中间体型,周边型 颗粒型 纽带蛋白型,PCNA,型,核点型(,dots),结蛋白(桥粒)型,IIF,检测,ANA,荧光染色模型,斑点型（,nRNP,/,Sm,）,高滴度的抗,U1-,nRNP,为,MCTD,的特征。,抗,Sm,抗体对,SLE,具有高度特异性。,斑点型（,SSA/SSB）,抗,SSA,最常出现于,SS,及新生儿红斑狼疮（100%）。,抗,SSB,抗体几乎仅见于女性，可出现于,SS,和,SLE,。,均质型,抗,dsDNA,抗体 抗组蛋白抗体(,histone,),抗,ssDNA,抗体 抗核小体抗体(,nucleosome,),抗,dsDNA,抗体,SLE,特异性抗体，与病情活动度相关。,周边型,可见于,胶原病、,PBC、CAH,等患者,核点型（,DOTS）,见于,SLE、SS、PBC、,风湿病。,抗着丝点型,PSS,局限型标志抗体。,抗原纤维蛋白型,仅见于,5%-10%,的,PSS,，男性高于女性。,抗,RNA,多聚酶,型抗体,仅见于硬皮病患者，阳性率为4%。,抗,PM-,Scl,（PM-1）,抗体,见于重叠综合征（多发性肌炎,PM/,皮肌炎,DM/,弥漫性,PSS,）,抗,Scl,-70,型,PSS,弥漫型的标志抗体。,增殖细胞核抗原型,（,PCNA）,SLE,特异性抗体，与发生弥漫性增殖性肾小球肾炎相关。,抗核糖体,P,蛋白,（,rib-P）,抗体,抗线粒体抗体,（,AMA）,SLE,标志抗体,原发性胆汁性肝硬化标志抗体,抗,Jo-1,抗体,抗高尔基体抗体,多发性肌炎（,PM）,标志抗体,偶见于,SLE,和,SS,抗肌动蛋白抗体,见于自身免疫性慢性活动型肝炎,抗,ENA,抗体谱,ENA(extractable nuclear antigen)：,可提取核抗原的总称,临床常检测的抗,ENA,抗体谱主要包括：,抗,Sm,抗,U1-RNP,抗,SSA,抗,SSB,抗,Jo-1,抗,Scl,-70,抗,rib-P,蛋白,检测方法,双向免疫扩散（,ID）,对流免疫电泳（,CIE）,免疫印迹法（,Western-blot）,ELISA,酶免疫斑点法,免疫印迹法,SDS-PAGE,电泳,转移电泳,酶免疫检测,是一组以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗原，与临床多种小血管炎性疾病密切相关的自身抗体，对系统性血管炎、炎症性肠病等疾病的诊断与鉴别诊断具有重要意义。,抗中性粒细胞胞浆抗体,（anti-,neutrophil,cytoplasmic,autoantibodies,ANCA）,荧光染色型,靶抗原,胞浆型,(,cANCA,),蛋白酶3（,PR3）,杀菌/通透性增高蛋白（,BPI）,核周型,(,pANCA,),髓过氧化物酶（,MPO）,组织蛋白酶,G（,Cath,-G）,乳铁蛋白（,LF）,白细胞弹性蛋白酶（,HLE）,非典型型,(,aANCA,),兼有两种特性,ANCA,荧光染色型与靶抗原,周边型抗中性粒细胞胞浆抗体,（,pANCA,）,主要见于炎症性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩病）,胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体,(,cANCA,),主要见于,Wegener,s,肉芽肿及微小多动脉炎,ANCA,临床应用,髓过氧化物酶（,MPO）,与显微镜下多血管炎、坏死性新,月体型肾小球肾炎,、,过敏性肉芽肿性血管炎相关,、,杀菌/通透性增高蛋白（,BPI）,主要见于肺部炎症性疾病,并与长 期慢性绿脓杆菌感染有一定关系,蛋白酶3（,PR3）,与,Wegener,s,肉芽肿（,WG）,密切相关。,仅,cANCA,诊断,WG,的特异性大于90%，联合,PR3,可超过95%，活动期几乎100%阳性。,组织蛋白酶,G(,Cath,-G),白细胞弹性蛋白酶(,HLE),乳铁蛋白(,LF),可,见于,SLE、IBD、PBC、PSC,等,AKA,主要见于,RA,，阳性率36%59%，特异性95%99%，其出现可以先于临床表现；高滴度可预示较严重的,RA,类型。,抗角蛋白抗体,（AKA）,主要见于溃疡性结肠炎,，,部分克罗恩病患者也可检出。与,ANCA,同时检测，对溃疡性结肠炎诊断的准确性可达72%。,抗小肠杯状细胞抗体,（AGCA）,新患1型糖尿病时，该抗体的发生率在90%以上。2型糖尿病患者若出现该抗体，则以后可能会发生1型糖尿病。,抗胰岛细胞抗体,（AICA）,ASMA,为自身免疫性肝炎型的血清学标志抗体，阳性率大于90%，高滴度对疾病诊断特异性几乎达到100%,。,抗平滑肌抗体,（ASMA）,LKM-1,是自身免疫性肝炎型的血清学标志,抗肝肾微粒体抗体,（,LKM）,自身免疫性肝炎型的血清标志抗体，大约有25%的自身免疫性肝炎仅该项抗体阳性。,抗可溶性肝抗原抗体,（,SLA）,一组针对含有磷脂结构抗原物质的自身抗体，主要包括,抗心磷脂抗体,、抗磷脂酸抗体和抗磷脂酰丝氨酸抗体。,靶抗原：,血浆中的磷脂结合蛋白，最常见的有,2,糖蛋白、凝血酶原或这些蛋白与心磷脂的复合物，特点是都含有磷脂基团。,抗磷脂抗体,（,anti-,phospholipid,antibody,APLA）,致病机理：,抗磷脂抗体与内皮细胞或血小板膜上的磷脂结合，可破坏细胞功能，使前列环素释放减少、血小板粘附凝集功能增强，构成血液的高凝状态、引起血栓形成；与红细胞膜上的磷脂结合，在补体参与下，可致红细胞膜破裂，发生溶血性贫血。,类型：,IgG,、A、M,型，,IgG,型最常见，其次是,IgM,型，,IgA,型与自身免疫性疾病的关系较小。,抗磷脂抗体,（,APLA）,抗心磷脂抗体,（,ACLA）,检测方法：,常用,ELISA,临床应用：,在,SLE,中总阳性检出率达70%80%，与病情活动 显著相关；,ACA,阳性者发生血管炎、溶血性贫血、心脏及中枢神经精神系统损伤的几率明显。,在,RA,患者阳性率为33%49%。,ACA,阳性是脑出血及脑梗塞的危险因素。,与反复自然流产和胎儿发育迟缓有一定的相关性,部分自身免疫性疾病中,自身抗体的检出率,自身免疫性疾病,ANA,阳性率（%）,SLE,80100,MCTD,95100,RA,2040,PSS,8595,PM/DM,3050,SS,7080,溃疡性结肠炎,26,慢性活动性肝炎,3040,其它风湿病,2050,ANA,在自身免疫性疾病中的检出率,疾病类型,抗原类型,阳性率%,SLE,dsDNA,3090,U1-,nRNP,1540,Sm,530,SSA,2060,SSB,1020,PCNA,3,核糖体,（rib）,520,心磷脂,2040,新生儿,LE,SSA,100,药物诱导,LE,组蛋白,95,单链,DNA,80,系统性红斑狼疮,(,SLE),抗原类型,阳性率（%),U1-,nRNP,95100,单链,DNA,2050,混合性结缔组织病（,MCTD）,抗原类型,阳性率（%）,IgM,-RF,6590,抗角蛋白抗体（,AKA）,3659,单链,DNA,8,组蛋白,少见,类风湿性关节炎,（,RA）,抗原类型,阳性率（%）,SSA,4095,SSB,4095,ssDNA,3060,唾液腺流出道,4060,RF,6080,原发性干燥综合征（,SS）,PSS,类型,相对应的抗原,阳性率（%）,弥漫型,原纤维蛋白,510,PM-,Scl,（PM-1）,3,Scl,-70,2575,RNA,多聚酶,4,局限型,着丝点,8095,进行性系统性硬化症,（,PSS）,抗原类型,阳性率（%）,PM-,Scl,（PM-1）,8,Jo-1,2535,Mi-1,10,Mi-2,5,Ku（,重叠综合征）,3055,单链,DNA,4050,PL-7,4,PL-12,3,多发性肌炎/皮肌炎(,PM/DM),自身免疫性慢性活动性肝炎(,AIH),抗原类型,阳性率（%）,肌动蛋白（,Actin,）,4090,ANA(,板层素，,SSA,等),3040,肝肾微粒体（,LKM-1）,7,可溶性肝抗原（,SLA）,100,线粒体2型（,AMA-M2）,510,线粒体9型（,AMA-M9）,10,原发性胆汁性肝硬化(,PBC),抗原类型,阳性率（%）,线粒体2型（,M2）,95,线粒体4型（,M4）,55,线粒体8型（,M8）,55,线粒体9型（,M9）,3585,核点,30,板层素,2,怀疑,SLE，,怎么办？,问题,常规检测程序,ANA,筛选,ENA,抗体谱,抗胞浆型抗体鉴定,其它自身抗体,免疫球蛋白、补体等检测,+,（）95%99%,可排除,SLE,SLE,治疗缓解,病情特重（大量,IC,沉积消耗抗体）,（）,低滴度 常见于,RA,等其它自身免疫性疾病,高滴度可作为诊断,SLE,的依据,ENA,抗体谱检测,（）,不能排除,抗,dsDNA,、,Sm,、,rib,抗体,（）,可帮助诊断,ANA,初筛,谢 谢！,标志抗体,相关疾病,dsDNA,SLE,Sm,SLE,SSB,SS,着丝点抗体,PSS（,局限型）,Scl,-70,抗体,PSS（,弥漫型）,AKA,RA,Jo-1,抗体,PM/DM,高滴度,RNP,抗体,MCTD,肝肾微粒体抗体,（,LKM-1）,型自身免疫性肝炎,平滑肌抗体（,SMA）,型自身免疫性肝炎,AMA（M2）,PBC,常见自身免疫性疾病的标志抗体,