HCY生化检测试剂方法比较PPT培训课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,HCY生化检测试剂方法比较,提纲,目录,3,同型半胱氨酸（,Hcy,）简介,常用,Hcy,测定方法：直接法与间接法,直接法测定,Hcy,原理,直接法优点及,如何,区分两种方法学的,试剂,间接法的缺陷,关于直接法试剂的几个问题,功能特点,：,Hcy是一个含硫氨基酸，是蛋氨酸代谢的中间产物。,Hcy,自发形成的巯基内酯化合物，可以和反式视黄酸共同引起血小板的凝集，与此同时，同型半胱氨酸巯基内酯还可引起血栓素（,TXB2,）的形成。,同型半胱氨酸巯基内酯，与低密度脂蛋白形成复合体，随后被巨噬细胞吞噬，形成泡沫细胞。促进血凝块的形成，从而引起临床上常见的梗塞性疾病。,同型半胱氨酸（Hcy）简介,同型半胱氨酸（,Hcy,）致血管病变机制,致血管内皮细胞损伤和功能异常,对血管平滑肌细胞(VSMCS)的影响,刺激血管平滑肌增殖,对凝血系统的影响,增加血液中血小板的黏附性,对血脂的影响,同型半胱氨酸（Hcy）简介,常用,Hcy,测定方法,参考文献：,同型半胱氨酸检测技术的研究进展及评价,；谭功军等，实用预防医学，2010，11（24）：2334-2337,常用方法,优缺点,色谱法：,HPLC,、,GC-MS,具有很高的准确度和稳定性，缺点是处理标本的能力有限，临床实验室未配备设备及操作人员，常作为同型半胱氨酸检测的参考方法；,荧光偏振免疫检测（FPLA）,成本高，需专用仪器。,酶联免疫,灵敏度高特异性强，但精密度差，耗费人力，操作时间长，不适宜做单个标本和急诊标本。,化学发光,成本高，需专用仪器,循环酶法：,直接法,、间接法,可在大型生化分析仪上使用，操作简单，结果准确可靠，且可和其他参数进行同时分析，目前最为常用的临床检测方法；,数据来源：,www.kegg.jp,同型半胱氨酸在体内的主要代谢途径：,直接法测定,Hcy,原理,直接法（水解酶法）,间接法（胱硫醚法）,直接法测定,Hcy,原理,ATP+L-methionine+H,2,O=phosphate+diphosphate+S-,methyl-L,-methionine,S-methyl-L-methionine+L-homocysteine=L-methionine,+,S-adenosyl-L-homocysteine,S-adenosyl-L-homocysteine+H,2,O=L-homocysteine+adenosine,adenosine+H,2,O=inosine+NH,3,2-oxoglutarate+NH,3,+NADH+H,+,=L-glutamate+H2O+NAD,+,直接法优点,目前国际市场上，能够在生化分析仪器上使用的,Hcy,试剂有两种，都是循环酶法。一种为,直接法,（,水解酶循环酶法,），另一种为,间接法,（,胱硫醚循环酶法,）。,水解酶循环酶法，该法特异性高、抗干扰力强、适用于各种生化仪，该类产品被国际大公司,(,如罗氏，奥林帕斯等,),广泛采用。,如何区分两种方法学的试剂,很多胱硫醚循环酶法的试剂其试剂比例也可以完全够模仿水解酶循环酶法试剂。有一个方法可以简易的区分两者：,胱硫醚循环酶法（简称间接法）：其试剂二（,R2,）是,淡黄色的！,水解酶循环酶法（简称直接法）：其试剂二（,R2,）是,无色的！,直接法优点,循环酶法,原理设计,1,3,2,4,干扰项目,直接法,间接法,市场选择,试剂性能,直接法优点,原理设计,胱硫醚循环酶法（简称间接法）,的,Hcy,检测试剂在基本的设计上存在着问题，其检验是靠测量,Hcy,转化为,-,胱硫醚时产生的胱硫醚，但是却不能够消除内生,-,胱硫醚，而恰恰有很多人，尤其是肾脏疾病患者的内生,-,胱硫醚水平非常高（可高达,300mol/L,，大部份,20mol/L),。间接法的,Hcy,试剂受到了内生胱硫醚的明显干扰。,它测的是同型半胱氨酸,(Hcy),与内源性胱硫醚的总和,，因此被称为是很好的检测胱硫醚的试剂而非检测,Hcy,的试剂。,水解酶循环酶法（简称直接法）,不受上述干扰。此项数据结果发表在,AACC,杂志上。这也是一些国际知名公司拒绝使用胱硫醚循环法,Hcy,试剂的原因。,直接法优点,原理设计,1,、间接法存在内源性胱硫醚的假阳性干扰,罗氏和雅培公司的医学部检测专家甚至声称间接法试剂是很好的检测胱硫醚的试剂而非检测,Hcy,的试剂。,肾脏疾病非常普遍，如果有实验室想要使用间接法试剂来测试,Hcy,，那么他们将不得不同时进行肌酐的检测来确认实验的结果是,Hcy,的，而不是由于肾脏疾病而产生的胱硫醚的。,直接法优点,原理设计,2,、间接法检测准确性及线性范围存在问题,间接法的试剂检测线性范围窄，对于高于,50 mol/L,的样本中报告出假阴性结果，往往无法给出正确的结果，试验很可能只报告出,30mol/L,或更低。,为此，贝克曼公司,曾,给用户发出忠告文件，详见参考文献,:,Selhub J.Homocysteine metabolism.Ann Rev Nutr,1999,19:217-46,直接法优点,干扰项目,1,、间接法试剂会受到脂肪酶试剂的干扰,如果间接法Hcy试剂与脂肪酶试剂在同一台仪器上使用，那么其结果将受到脂肪酶试剂的严重干扰。,间接法试剂厂家同样对客户发出了忠告性文件称如果同时使用脂肪酶试剂，请务必仔细清洗。,直接法优点,干扰项目,2,、间接法试剂会受到铁试剂的干扰,若在仪器上同时做铁项目，那么间接法试剂就不能在该仪器上使用。,美国Carolina州液体化学（实验室）做了铁试剂对间接法试剂与直接法试剂的干扰实验，结果发现间接法试剂检测的Hcy水平很低，而直接法的Hcy结果却相当准确。,为此,FDA,对间接法试剂也发出了警告提示,直接法优点,美国,FDA,对间接法,Hcy,试剂发出的警告信,见链接：,www.fda.gov/ICECI/EnforcementActions/WarningLetters/2005/ucm075355.htm,，详见论文,1,世界检验试剂领域的几大巨头,:,罗氏、雅培、贝克曼,一致选择：,直接法（,5,酶循环酶,法）,占据全球,70%,以上的市场份额,间接法（胱硫醚法）,主要来源：,英国,AXIS-SHEILD,、美国,CATCH,其国际市场不断萎缩。,目前其使用者,主要集中在中国,的部分厂家。,（原因：大包装价格相对较低）,直接法优点,市场选择,直接法优点,试剂性能,采用直接法，灵敏度较高。,线性范围：350mol/L，,r0.990,；,精密度：批内CV4.6%；,抗干扰能力：样本中Vit C2g/L，结合胆红素1000mol/L，乳糜25mmol/L，血红蛋白2g/L对本试剂测定结果无明显影响；,稳定性：热稳定性高，37，7天加速速率下降,6,%；密闭贮存2-8避光稳定1,8,个月，开瓶2-8避光稳定,28,天。,关于直接法试剂的几个问题,1,、血氨会影响检测结果吗,说法：血氨会影响直接法试剂的检测结果。,答案是：不会影响！,原因：,5,酶直接法中的酶有数个酶的主要作用就在于消除干扰物质的干扰作用，其中对于血氨的消除更是有绝对超量的酶的消除过程，这在,5,酶直接法的反应曲线中有明显的反映。,关于直接法试剂的几个问题,2,、,SAH,会影响结果结果吗,说法：,SAH,是直接法的中的产物，人体内也存在，所以会影响结果。,答案：没有影响！,原因：无论是正常人群还是患病人群，其样品血中的,SAH,都是极微量的，相对于试剂中绝对过量的,SAH,来说，完全可忽略不计。,关于直接法试剂的几个问题,3,、间接法为何在国内也有市场,虽然,Hcy,的终端销售价格相同，但考虑到国内医药体制的特殊情况，间接法试剂（只用到两种主要酶）具有生产成本更低的优势，有能力给销售渠道出让更多的利润；,也有,采用,2,酶或者,3,酶的直接法试剂,，其成本大大降低，但其检测灵敏度以及抗干扰物质的能力都受到了极大的影响；,综合来看，,5,酶直接法是目前美国,FDA,及,AACC,认可的生化试剂中检测,Hcy,方法中特异性最高，最可靠，最准确的方法，虽然生产成本相对较高，但仍为罗氏、雅培、贝克曼等国际品牌所采用。,附：参考文献,参考文献,Frantzen F,Faaren AL,Alfheim l,et al.Enzyme conversion immunoassay for determining total homocysteine in plasma or serum.Clin Chem,1998,44:311-16,Selhub J.Homocysteine metabolism.Ann Rev Nutr,1999,19:217-46,Jacob RA,Wu MM,Henning SM,et al.Homocysteine increases as folate decreases in plasma of healthy men during short-term dietary folate and methyl group restriction.J Nutr,1994,124:1072-1080.,Diazyme Laboratories.Homocysteine 2 reagent enzymatic assay.Diazyme Data Sheet.70112 Rev,2008.,Chao Dou,Dongyuan Xia,Liqing Zhang,et al.Development of a Novel Enzymatic Cycling Assay for Total Homocysteine.Clinical Chemistry 51,No.10,2005:1987-1989,