交叉配血知识.ppt

意识决定,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,意识决定,*,1,2025/12/12 周五,交叉配血,知识讲座,检验科 马燕,2,2025/12/12 周五,RBC,表面有丰富唾液酸，在中性环境中带负电荷，互相分离。可通过缩短细胞间距，以及在致敏细胞上的抗体之间搭桥使,RBC,凝集。,凝集一般为二个步骤,抗体吸附于,RBC,抗原上成为致敏状态,致敏,RBC,凝集形成块状,3,2025/12/12 周五,标本的采集及要求,一,血型,二,不规则抗体的筛选,三,交叉配血,四,一,二,三,四,4,2025/12/12 周五,标本的采集与要求,5,2025/12/12 周五,1.,标本要新鲜,:,前三个月内输血或妊娠,:,配血试验标本抽取,48h,避免因,回忆反应,产生的抗体漏检。,新近的输血或妊娠：,可引起意外抗体迅速出现,如果对病人的输血史或人身史不明,使用的标本必须是输血前,48h,内抽取的。,血量约为,5ml,。,2.,使用右旋糖酐、,pvp,等：,治疗前抽取标本备用,防止,RBC,缗钱状凝集的干扰,标本要具有代表性，能代表患者目前状况,6,2025/12/12 周五,3.24,小时内输了,12u,血,后：,可输注未经交叉配血的,ABO,、,RH,同型的血液,因为原始交叉配血用的血清已不能代表患者血清的情况。,4.,防止血样的稀释和溶血的产生,：,溶血标本一般不使用,因为血清中游离血红蛋白可掩盖在输血前实验中抗体反映引起的溶血,5,.,标本标识,：,唯一性标识,无误、,与输血申请单一致,6.,使用血浆标本：,应排除纤维蛋白原的干扰,7.,输血后标本保存：,2-8,至少一周。,9,2025/12/12 周五,2.,离心力的标准,不同规格离心机，力矩不同，统一离心转速，但没有统一离心力。,离心转速换算公式：,RCF=1.118 10-5 (rpm)2 R,(cm),3.,离心后结果观察注意事项,将试管成,30-45,角拿在手上，细胞扣朝上，手腕轻轻用力，用液体去冲细胞扣。,切不可用力使劲摇试管，那样凝集颗粒会被摇散，弱凝集则会误判为阴性。,-,细胞成细沙状沿试管壁流下,+,细胞成块状或成齿状沿试管壁流下,10,2025/12/12 周五,常用的记录符号及所示的凝集强度,4+,一个大的凝集块,背景透明,无游离细胞,3+,数个大凝集块,背景透明,无游离细胞,2+,许多小凝集块,肉眼可见,大小均匀,背景基本透明,有游离细胞,1+,很小的凝集块,肉眼可见,背景不透明,游离细胞较多,需要用显微镜观察,W+,微小凝集块,肉眼很难看清,背景混浊,要用显微镜观察,O,无凝集,无溶血,全部是游离细胞,要用显微镜观察,PH,部分溶血,H,完全溶血,WF,混合外观,11,2025/12/12 周五,4.,盐水试验,多采用立即离心法,正确的操作是：,RBC,悬液加到血清后立即离心并观察结果,反应时间过长而延误离心对,ABO,血型系统的抗体检出影响,室温,2,分钟后离心,可能使,3+,4+,的,凝集减弱,为,0+,1+,并有溶血,室温,5,分钟后离心,原有,凝集可能消失,并有溶血,有的标本延迟离心,原有凝集会变为,既不凝也不溶血,难以发现,ABO,血型的不配合。（多发生在,O,型人的血清抗体与,A,型、,B,型或,AB,型红细胞反应的试验中,发生率为,2%-3%.,发生机制是反应强的抗,A,、抗,B,和抗原强度强的,A,、,B,抗原作用,补体,C1,在有,Ca2+,存在的条件下,固定到红细胞膜上,妨碍了红细胞的凝集,进一步可能引起溶血）,解决的方法：,A:,血清与红细胞混合后立即离心。,B:,用血浆或灭活的血清做试验,C:,用,EDTA,盐水配制红细胞悬液,D:,稀释血清,12,2025/12/12 周五,加样时,先加血清,再加红细胞，以避免漏加；,抗体和抗原的比例一般为,2,：,1,。,必须要做,正反定型,实验才能确定血型。,正定型试验有条件可,加做抗,AB,（检测弱,A,、弱,B,）,反定型一定要加做,O,细胞,（发现不规则抗体）,13,2025/12/12 周五,5.,正反定型结果不一致,原因：技术、受检红细胞或血清本身,（,1,）技术和管理错误,器材不洁,假阳,试剂污染或不足,假阳,标本和试剂搞错,假阳,、,假阴,离心过度或不足,假阳,、,假阴,结果记录或判断错误,假阳,、,假阴,漏加试剂,假阴,阳性反应产生溶血现象未能识别,假阴,14,2025/12/12 周五,（,2,）标准血清效价太低、亲和力不强,。,如抗,A,血清效价不高，可将,A,亚型误定为,O,型，,AB,型误定为,B,型。,（,3,）红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当,，使反应不明显，误判为阴性反应。,（,4,）血清异常,华通胶或血清蛋白异常引起串钱状形成，影响反定性结果,（,5,）红细胞致敏,在含高蛋白介质试剂中可发生凝集，产生假,阳性,（,6,）近期曾异型输血,，病人血液标本成为不同型别的红细胞混合物，定型时显示,“,混合外观凝集,”,现象。,（,7,）疾病因素导致抗原减弱,某些白血病病人,ABO,血型抗原可受到抑制，检出困难。,（,8,）红细胞多凝集现象,RBC,因遗传或获得性的表面异常，发生多凝集现象。,15,2025/12/12 周五,（,9,）获得性类,B,由于,G-,杆菌作用，,RBC,可获得“类,B”,活性,（,10,）异常血浆蛋白,病人血浆中异常的白蛋白、球蛋白比例异常和高浓度的,FIB,等能导致缗钱状形成，造成假凝集现象,（,11,）,近期内进行大量的,血浆置换,治疗，影响抗体效价，造成反,定型困难。,（,12,）不规则抗体的产生,受检者血浆中，含有,ABO,血型抗体以外的不规则抗体，如自身抗,I,，与试剂,A,、,B,细胞上的相应抗原起反应。,（,13,）低丙种球蛋白血症,可能会因免疫球蛋白水平全面下降使血清定型时不见凝集或仅见弱凝集反应。,（,14,）药物等因素,药物、右旋糖酐等静脉注射某些造影剂可引起红细胞聚集而类似凝集。,（,15,）年龄因素,如新生儿、老年人等。,16,2025/12/12 周五,正反定型不一致的处理方法,首先要重做试验一次。,严格执行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察结果，可解决明显的问题,.,对一些疑难问题需进一步检查。可初步采取以下措施：,1),重新抽样,，纠正因污染或搞错标本造成的不符。,2),将红细胞洗涤数次，配成,5%,盐水细胞悬液，用,抗,A,、抗,B,、抗,A+B,做实验，可得到其他有用信息。有条件加做抗,H,试验,3),对受检者作,直接抗人球蛋白试验,，看,RBC,有没有被致敏,4),如疑为,A,抗原或,B,抗原减弱，可将受检红细胞与抗,A,或抗,B,血清作,吸收放散试验,。,5),如试验结果红细胞成,缗钱状排列，加等渗盐水,1,滴,混匀，往往可使缗钱现象消失。,6),做反定型试验时需要加做,O,细胞。,17,2025/12/12 周五,疑难血型病例,1.,白血病血型变异,2.,血浆蛋白紊乱,3.,类,B,4.,多,/,全凝集,5.,冷凝集,6.ABO,亚型,18,2025/12/12 周五,三、不规则抗体的筛选,筛选目的,筛选步骤,不规则抗体筛选与交叉配血结果分析,19,2025/12/12 周五,定义,：,抗,A,、抗,B,以外的血型抗体，多为抗体。主要是经输血或妊娠等免疫刺激产生。,血型抗体,是体内免疫系统所产生的针对血型抗原发生特异性反应的一类免疫球蛋白类物质。人类血清中有,5,种类型：,G,、,M,、,A,、,D,、,E,，其中,IgM,、,G,是最重要的,2,种抗体。,RBC,血型抗体分为：,完全抗体,：,能在盐水中凝集相应,RBC,，又称盐水抗体。,主要是分子量较大的,IgM,不完全抗体,：,能结合,RBC,上抗原致敏,RBC,，,但在盐水中不能使之凝集。主要是分子量小的,IgG,，,需用抗球蛋白,20,2025/12/12 周五,1.,筛选目的：,发现有临床意义的不规则抗体，以确保安全有效用血。,最好献血者血清也作不规则抗体的筛选，如有发现不规则抗体，鉴定此抗体，找出能与其相配合的血液，不可随便用于输血。,不规则抗体多为,IgG,抗体，盐水介质中不能凝集，只能致敏相应抗原的,RBC,必须通过特殊介质,(,酶、抗人球蛋白、,poly,等,),才能使致敏,RBC,出现凝集反应，这些方法的选择可按抗体的血清学行为和试验的具体条件来确定。,临床上通常所称的,“,同型血,”,是指,ABO,血型系统和,Rh,血型系统相同,其它红细胞血型系统未必相同。,如果交叉配血不仔细,或只用盐水介质配血,则可能检查不出,ABO,血型系统之外的不规则抗体,而此抗体与相应抗原发生免疫反应,可导致溶血性输血反应的发生。,21,2025/12/12 周五,2.,筛选细胞：,通常是由,2-3,个单人份的,O,型红细胞组成一套筛选细胞试剂，包括以下常见的抗原：,Rh,系统、,MNSs,系统、,P,系统、,Lewis,系统、,Duffy,系统等。,3.,抗体筛选试验局限性：,不一定能检出所有有临床意义的不规则抗体。一些抗低频率抗原的抗体则可能漏检。,22,2025/12/12 周五,不规则抗体筛选的操作步骤,被检血清,+,抗体筛选细胞 盐水介质或非盐水介质（凝聚胺、抗球蛋白、酶）,病人血清,病人血清,病人血清,病人血清,筛选细胞,I,筛选,II,筛选,III,病人红细胞,血清,+,病人红细胞,血清,+,筛选细胞,I,PolyGram 100ul,LIM,600ul,血清,+,筛选细胞,II,血清,+,筛选细胞,III,Resuspending 100ul,非特异性凝集,无凝集则重做,特异性凝集,低离子介质中孵育，促进抗体与,RBC,结合,凝聚胺含多价阳离子，中和,RBC,表面负电荷，减少,RBC,间距离,枸橼酸钠重悬液，为负电荷，中和凝聚胺正电荷，使正常,RBC,凝集解散,1.,2.,3.,4.,对,Kell,系统抗体不理想，阴性结果需做抗球。中国人群几乎,100%,为,kk,型，具有,K,抗原的几乎为,0,，至今未发现,Kell,系统抗体,23,2025/12/12 周五,抗筛阳性,，,交叉配血相容,自身抗,-H,抗,-Lebh,抗筛阳性，但献血者红细胞可能正好不含与相应的抗原，,因此配血可以相合。,抗筛阳性，交叉配血不相容,同种异体抗体存在，自身对照成阴性,同种异体抗体存在，自身对照成阳性,冷反应自身抗体能引起难以确定的阳性,温反应自身抗体能引起难以确定的阳性,“,钱串状,”,红细胞形成引起非真实的阳性结果,抗筛阴性,，,酶试验、抗球蛋白交叉配血试验等不相容,献血者红细胞,DAT,试验为阳性,受血者血清抗体活性很弱，则抗筛试验成阴性,抗体与低频率抗原反应,抗筛阴性,，,盐水直接离心交叉配血不相容,献血者红细胞是,ABO,血型不相容,存在在室温反应的同种异体抗体,献血者的红细胞是多凝集红细胞,4.,抗,筛,和,交,叉,配,血,结,果,分,析,24,2025/12/12 周五,输血前试验,“,三保险,”,血型、抗筛、交叉配血,相合,%,随机,64,ABO,99.4,Rh,99.8,抗筛,99.94,交叉配血,99.95,自身输血,100,25,2025/12/12 周五,交叉配血试验也称配合性试验，实际上是检查不配合性，使病人，献血者血液之间没有相对应的抗原、抗体成分（如：患者体内有抗,A,抗体，献血者,RBC,上就不能有,A,抗原）,试验应在,37,下进行。,四、交叉配血,26,2025/12/12 周五,盐水法,用于,IgM,抗体的检出、盐水配血试验、用盐水抗体鉴定的血型抗原，如,ABO,、,MN,、,P,等血型系统的抗原。,当,IgG,抗,A,、抗,B,的浓度足够大时，在盐水介质里也能与相应的红细胞发生凝集反应,聚凝胺,Poly,是带高价阳离子的多聚物，溶解后能产生正电荷，中和,RBC,表面负电荷，缩短,RBC,间距，引起正常,RBC,可逆非特异性凝集、抗体致敏的红细胞则凝集不可逆,酶技术,蛋白水解酶能消化破坏,RBC,表面唾液酸，减少,RBC,表面负电菏，缩短,RBC,间距，,IgG,抗体能与有相应抗原的,RBC,产生凝集。,适合：酶法能显著增强,Rh,和,Kidd,系统,的抗原抗体反应，,不适合：蛋白酶破坏,M,、,N,、,S,、,s,、,Fya,、,Fyb,抗原,AGT,抗人球,又称,Coombs,试验,是检查,IgG,抗体的最有效方法。,除可测定,RBC,上,IgG,抗体外,还可测定,IgM,、,IgA,、补体,C3,、,C4,直接,：,测体内致敏,RBC,用于检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏,如新生儿溶血病、溶血性输血反应、自身免疫性溶血性贫血,.,间接,：,测血清中不完全抗体,常用于血型鉴定、抗体的检出和鉴定、输血前交叉配血试验等,.,27,2025/12/12 周五,酶处理细胞的凝集试验方法,一期,酶法,也称直接法，菠萝酶和木瓜酶适用于一期法。操,作时在已标记好的试管中加入,100ul,的血清和,50ul,的红细胞悬液，再加,50ul,的酶溶液，,37,孵育,15,分钟，,1000,转,/,分离心,1,分钟，轻摇后观察结果,二期,酶法,也称间接法，木瓜酶和无花果酶适用于二期法。,二期分两步，第一步是酶处理红细胞：在,1,份洗涤,的压积红细胞中加两份木瓜酶溶液，,37,孵育,30,分钟，用大量的,Ph7,。,4,的,PBS,洗涤,3,次，用生理盐,水配成,5%,的悬液备用。第二步是在已标记好的试,管中加受检血清,100ul,再加,50ul,酶处理过的红细,胞悬液，,37,孵育,15-30,分钟观察结果，凝集和溶,血皆属于阳性反应。,28,2025/12/12 周五,交叉配血试验通常包括：,主 侧,（受者血清,+,供者,RBC,）：测对供者,RBC,反应的抗体,次 侧,（受者,RBC+,供者血清）：测对受者,RBC,反应的抗体,自身对照,（受者,RBC+,受者血清）：,显示自身抗体、,DAT,阳性、,RBC,缗钱状假阳性的存在,除作盐水介质外，至少还要做聚凝胺法,，有条件加做抗球、酶法等。在配血的任何步骤中均不产生溶血或凝集献血者的血液才能给病人输注,主管,次管,自身,29,2025/12/12 周五,实际当中难免有抗筛阴性，但交叉配血不合的情况，应依据实际情况合理解释：,缗钱状形成,：血清在室温和,37,中，使,RBC,假凝集。常见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、霍奇金病、其他表现为血沉加快的病例。,交叉配血不相容，显示有,未捡明的同种抗体,存在,室温反应中显示有,自身抗体,AGT,试验中显示有,自身抗体,抗筛阴性，交叉配血阳性,，提示可能有,未检明的抗体,存在,离心力不当,，造成假阴性,水浴箱温度,不正确，造成错误结果,RBC,不正确的洗涤和悬浮,，使,AGT,试验假阴性,血清中如含有溶血性抗体，则相应,RBC,被溶解,而不是凝集，交叉配血应为阳性。此时应灭活血清再做试验。,30,2025/12/12 周五,几种交叉配血方法的比较,方法,优点,缺点,盐水法,操作方便,费用低廉,只能检出不相配合完全抗体,不能检出不相配合的不完全抗体,酶法,增强,Rh,、,Kidd,系统,破坏,MNSs,、,Fy(a),、,Fy(b),抗原,易失活,寿命短,反应时间长,聚凝胺法,方便、应用最广,Kell,系统部分抗体如抗,K,、抗,kp(a),、抗,kp(b),检测不出,需要抗球蛋白试验,.,且肝素对其有影响,易引起假阴性,.,抗球蛋白法,检测不完全抗体最灵敏,操作复杂、不利于急诊检查和血库的大批量工作,微柱凝胶法,国际推荐方法，灵敏度高、重复性好、特异性好、检测结果可较长时间保存,费用高,31,2025/12/12 周五,谢 谢！,32,2025/12/12 周五,疑难配血病例,1.,患冷凝集素综合征,有自身冷凝集抗体,“,O,”,病人,3+,血清自身抗体,4+.,采用抗人球蛋白法配血可消除此现象,输,“,O,”,洗涤红细胞,.,2.,输血前,:,“,A,”,输,A,型红细胞,4u,无明显反应,仅见少许,Hb,尿,很快消失,但,Hb,从入院时,12g,降至,4g,该院误定血型而输血前没做交叉配血而造成本次事故,.,因与抗,A,反应管的细胞似有二群细胞,后做唾液酸血型物质测定,确定其血型为,“,B,”,型,因之前输入大量的,“,A,”,型血,.,本次不适合输,“,B,”,型血,建议输注,“,O,”,洗涤红细胞,.,3.,“,O,”,Rh(+),贫血查因,消化道出血,消化道肿瘤,直接抗人球蛋白试验,2+,检出自身抗体,经吸收处理后标本可与,“,O,”,红细胞配血,.,4.,重度贫血患者,直接抗人球蛋白试验,1+,筛选试验盐水法、抗人球蛋白试验均为阴性,交叉配血时可采用抗人球胆白法,可输注,O,型洗涤红细胞,.,-A,-B,AC,BC,正定,4+,3+,反定,-,-,