3-中药的鉴别.ppt

,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第一章 绪论,LOGO,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,药物分析教研室,第三章 中药的鉴别,第三章 中药的鉴别,1.中药鉴别的意义,中药真伪鉴别是中药、生产、应用、研究至关重要的第一步,2.中药鉴别的目的,鉴别真伪,3.中药鉴别的方法,性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别、生物鉴别,第三章 中药的鉴别,整体,细胞,分子,基因,主要内容,1,性状鉴别,2,显微鉴别,3,理化鉴别,4,生物鉴别,1 性状鉴别,定义：以眼观、手摸、鼻闻、口尝、水试和火试等方法，鉴别药材、饮片和制剂的形状、形态、气和味等外观形状，以确定中药的真伪。,1 性状鉴别,一、中药材和中药饮片的性状鉴别,1.形状,-指中药材和中药饮片的外形。,特点：固定、特异性,（1）中药材,蕨类植物、裸子植物、被子植物,（2）中药饮片,圆片：白芷、白芍等 长方形：葛根、杜仲等,斜片：黄芪 条片状：丹皮、枇杷叶,段片状：荆芥、紫苏 类圆球形：五味子,1 性状鉴别,1 性状鉴别,1 性状鉴别,1 性状鉴别,一、中药材和中药饮片的性状鉴别,5.断面,指中药材和中药饮片折断面的特征和折断时的现象。,难易程度、断面是否平坦或纤维性、颗粒性、粉性等,1 性状鉴别,一、中药材和中药饮片的性状鉴别,6.质地,指中药材、中药饮片坚硬、松软、致密、黏性、粉性等。,7.气,1 性状鉴别,一、中药材和中药饮片的性状鉴别,8.味,指中药材或饮片实际的口尝滋味，是其所含化学成分的直接反映。,9.水试,1 性状鉴别,1 性状鉴别,1 性状鉴别,一、中药材和中药饮片的性状鉴别,10.火试,指中药材或饮片实际的口尝滋味，是其所含化学成分的直接反映。,1 性状鉴别,动物类,1 性状鉴别,矿物类,1 性状鉴别,1 性状鉴别,1 性状鉴别,1 性状鉴别,二、中药提取物的性状鉴别,颜色、气、味、物理常数（如：相对密度、旋光度、折光率、皂化值等）,1 性状鉴别,三、中药制剂的性状鉴别,1 性状鉴别,1 性状鉴别,1 性状鉴别,沉香化气丸,：本品为灰棕色至黄棕色的水丸；气香，味微甜、苦。,牛黄解毒片,：本品为素片或包衣片，素片或去包衣后的片心显棕黄色；有冰片香气，味微苦、辛。,龟龄集,：本品为胶囊剂，内容物为棕褐色；气特异，味咸。,舒心口服液,：本品为棕红色的澄清液体；气微香，味甜、微苦、涩。,物理常数,：折光率、旋光度、相对密度等,2 显微鉴别,（一）、定义,显微鉴别法系指用显微镜对药材（饮片）切片、粉末、解离组织或表面制片及含药材粉末的制剂中药材的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。,鉴别时选择具有代表性的供试品，根据各种鉴别项的规定制片。制剂根据不同剂型适当处理后制片。,2 显微鉴别,（二）、分类,1 根据不同剂型适当处理后制片方法不同分为：,（1）药材（饮片）显微制片：,横切片或纵切片制片、粉末制片、表面制片、解离组织制片、花粉粒与孢子制片。,（2）含饮片粉末的制剂显微制片：按粉末制片法制片,（3）细胞壁性质鉴别：木质化细胞壁、木栓化或角质化细胞壁、纤维素细胞壁。,（4）细胞内含物性质鉴别：淀粉粒、菊糖、草酸钙结晶,2 根据切片方法分为：,徒手切片、冷冻切片、半薄切片（0.5-2.0微米）、超薄切片（50-70nm)。,2 显微鉴别,一、横切片或纵切片：选取药材适当部位，软化后用徒手或滑走切片法，切成1020m的薄片,选用甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其它试液处理后观察。必要时可包埋后切片。,二、粉末制片：取粉末少量，置载玻片上，摊平，选用甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其它适当试液处理后观察。,三、表面制片：将样品湿润软化后,切取一部分或撕取其表皮,加适宜的试液观察。,四、解离组织片：如样品中薄壁组织占大部分，木化组织少或分散存在，可用氢氧化钾法；如果品坚硬，木化组织较多或集成较大群束，可用硝铬酸法或氯酸钾法。在解离前，应先将样品切成宽或厚约2mm的小条或片。,2 显微鉴别,（三）、仪器与材料,1 仪器,生物光学显微镜（应配有目镜测微尺和载物台测微尺）、滑走切片机或徒手圆筒生物切片器、小型粉碎机、镜台测微尺、离心机、医用超声仪。,2 显微鉴别,三）、仪器与材料,2 用具,放大镜、刀片、解剖刀、镊子（包括粗镊及眼科弯镊与直镊）、剪（眼科剪与手术剪）、解剖针。载玻片、盖玻片、吸湿器、培养皿或小烧杯（放切片用，切片后的处理均可在其中进行）、酒精灯、铁三角架、石棉网、滴瓶、试管、试管架、滴管、玻璃棒（粗与细）、乳钵、量筒、毛笔（从刀上刷取切片用）、铅笔（HB、4H、6H绘图用）、带盖搪瓷盘（装切片标本用）、纱布、吸水纸（滤纸）、火柴等。,2 显微鉴别,一、中药材的显微鉴别,1.完整药材的显微鉴别,选部位（横切、纵切），制标本片，镜下观察,2.破碎药材的显微鉴别,大块：同完整药材,小块：化学试剂解剖植物组织-解离组织片,刮粉-制片,草类、叶类-表面片,2 显微鉴别,一、中药材的显微鉴别,3.粉末药材的显微鉴别-,过中国药典4号筛备用。,2 显微鉴别,二、中药饮片的显微鉴别,1.部分组织不完整：,地骨皮-去心-饮片缺少木质心-木质部不得检出,2.炮制后组织结构、细胞特征、排列产生差异,3.既可鉴别饮片真伪，又可鉴别生熟及炮制程度。,2 显微鉴别,三、中药制剂的显微鉴别,（一）、定义,是利用显微镜来观察制剂中原中药饮片的组织碎片、细胞或内含物等特征，从而鉴别制剂的处方组成。,（二）、特点,1 制剂中各饮片及辅料相互影响，需要适当预处理。,2.制备方法不同，选择药材在制剂中专属性强的显微特征。,3.中药制剂在装片镜检前需作适当处理，消除辅料影响。,2 显微鉴别,三、中药制剂的显微鉴别,3.中药制剂在装片镜检前需作适当处理，消除辅料影响。,1）散剂、胶囊剂：粉末装片或透化后装片；,2）片剂,水丸,糊丸,水蜜丸,锭剂,3）蜡丸 加极性小的有机溶剂搅拌，倾去溶剂，反复处理蜡质再装片检视。,4）需解离装片的：,（1）氢氧化钾片（2）硝铬酸法（3）氯酸钾法,乳钵研成粉末，取粉末装片,2 显微鉴别,四、六味地黄丸的显微鉴别,【处方】熟地黄、山茱萸（制）、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻,2 显微鉴别,2 显微鉴别,2 显微鉴别,2 显微鉴别,2 显微鉴别,2 显微鉴别,48,3 理化鉴别,理化鉴别的概念和意义,利用中药所含化学成分的理化性质，通过,化学反应法，光谱法和色谱法,等分析方法和技术来判断真伪的分析方法。,3 理化鉴别,目前中国药典收载的理化鉴别方法有：,化学反应法（多为试管反应）,微量升华法,色谱法：薄层色谱法、气相色谱法和高效液相色谱法,光谱法：荧光鉴别法、分光光度法（紫外、红外）,3 理化鉴别,一、化学反应法,（一）原理：,利用检测中药中所含化学成分（,有效成分或指标性成分,）,发生化学反应，根据所产生的,颜色、沉淀或气体,等现象，来判断某些成分或某些药味的有无。,一般化学反应法即通常所说的显色反应和沉淀反应等（,试管反应,）。,特点：,灵敏度高、专属性差、操作简单。,适用对象：,多用于中药制剂中,矿物药,的,无机成分,、,动物,的,蛋白质类成分,以及,植物药材成分类群,的鉴别,。,3 理化鉴别,1.显色反应,1.生物碱类；,2.黄酮类；,3.蒽醌类；,4.香豆素、内酯类；,5.皂苷类；,6.氨基酸、多糖类,7.各种矿物类成分：砷、汞等。,生物碱沉淀试剂,Borntrager反应,盐酸-镁粉反应,异羟肟酸铁反应,L-B反应,-萘酚-浓硫酸反应,取本品1ml，加1氢氧化钠溶液1ml，煮沸，放冷，滤过。取滤液2ml，加稀盐酸数滴使呈酸性，加乙醚10ml，振摇，乙醚层显黄色，分取乙醚液，加氨试液5ml，振摇，乙醚层仍显黄色，氨液层显持久的樱红色。,例：大黄流浸膏中大黄的鉴别,目标：游离蒽醌,取本品0.2g，加水湿润，加KClO,4,、HNO,3,饱和溶液2ml，振摇，静置，取上清液少许，加BaCl,2,溶液0.5ml，摇匀，呈白色沉淀，倾去上清液，加HCl溶液，沉淀不溶解。,取本品0.2g，加HCl湿润，在铜片上磨擦，铜片上呈银白色，加热，银白色消失。,例 牙痛一粒丸中雄黄、朱砂鉴别,雄黄,朱砂,2.沉淀反应,利用中药中化学成分与适宜试药发生化学反应，生成,沉淀物,进行鉴别。,取本品10g,加浓氨试液数滴及氯仿10ml,浸泡数小时,滤过,取滤液1ml蒸干,残渣加稀盐酸1ml使溶解,加碘化铋钾试液1-2滴,即生成黄棕色沉淀,。,例：马钱子散中马钱子鉴别,目标：生物碱,(1)慎重使用专属性不好的分析反应，如泡沫生成反应、三氯化铁显色反应等。,(2)分析前对样品进行分离、精制，除去干扰分析反应的物质，借此改善鉴别方法的专属性。,(3)采用阴性对照和阳性对照的方式，对拟定的鉴别方法进行反复验证，防止出现假阳性。,一般化学反应法用于中药鉴别应注意：,二、微量升华法,（一）原理：,利用某些成分的,升华性,，在一定温度下将其从制剂中升华分离出来，并以升华物所具有的某些理化性质作为制剂鉴别的依据。,（二）特点,升华法具有,简便,、,实用,等特点，由于升华性仅为少数中药化学成分所具有且升华物纯度较高，故该法,专属性亦较好,。,中药材中常见的具有升华性的成分有冰片、大黄中蒽醌类成分；牡丹皮中丹皮酚；薄荷中薄荷醇；斑蝥中斑蟊素等。,取制剂粉末，进行微量升华，收集冰片升华物，显微镜检升华物的结晶性状后，加入香草醛硫酸溶液，白色结晶发生化学反应呈现,紫红色,例：万应锭中冰片的鉴别：,三、色谱法,（一）薄层色谱法（TLC）,（二）纸色谱法（PC）,（三）高效液相色谱法（HPLC）,（四）气相色谱法（GC）,(一)薄层色谱法（TLC）,使用本法鉴定中药供试品，通常是在,同一块薄层板,上点入,样品,和适宜的,对照物,，采用,同一条件,依法层析展开，经显色或用其他方法检出,色谱斑点,后，将样品与对照物所得的色谱图进行,对比,，作出鉴定。,分离、分析同时进行,简便、快速、三维,检测成分的种类多,药典中应用最多,1.仪器与材料,（1）薄层板,常用固定相材料：,颗粒大小：,薄层板类型：,薄层色谱法,（2）点样器：,微升毛细管,手动,半自动,全自动点样器材,（3）展开容器：,平底展开缸,双槽展开缸,（4）显色装置：,玻璃喷雾瓶,专用喷雾瓶,专门器械,展开缸,双槽展开缸,干燥器,喷雾显色,浸渍显色,熏蒸显色,（5）检视装置,（6）薄层色谱扫描仪,指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于定性定量分析的仪器,薄层板制备,点样,展开,显色与检视,记录,薄层色谱法操作方法,（1）薄层板制备,市售薄层板：用前110活化30分钟,聚酰胺薄膜：不活化,铝基片薄层板：可裁剪,（2）点样,原点、点距,（3）展开,深度,展开剂饱和,单向展开、双向展开,（4）显色与检视,原可见光有颜色，直接检视,自身有荧光或加入试剂可激发荧光的成分，在365或254nm观察。,化学显色：通用型和专属性较好的显色剂,薄层色谱-生物自显影法,（5）记录,可见光,荧光,荧光淬灭,影响薄层色谱的因素有哪些？,供试品溶液的制备,展开剂的选择,薄层板的选择,对照物的选择,展开剂蒸气饱和,温度和湿度,3.影响薄层色谱鉴别的主要因素,（1）供试品溶液的制备,根据主要的检测成分选择提取溶剂,常用的预处理方法有：,升华法，蒸馏法，溶剂提取法，小型层析柱的柱色谱法、离子交换法等。,一捻金薄层色谱图（人参鉴别）,a 未经净化处理,b 经净化处理,（2）薄层板的选择,固定相选择,硅胶G、硅胶GF,254,生物碱：氧化铝,黄酮类、酚类：聚酰胺,Rf值0.2-0.8,避免拖尾问题,配比一致,避免边缘效应,低毒溶剂,温度和湿度,无水乙醇-苯（1:4）,苯-三氯甲烷（1:3）,丙酮-甲醇（1:1）,极性,注意问题,（3）展开系统选择,（4）对照物的选择,（5）湿度和温度的影响,对照提取物对照法,对照品对照法,对照药材对照法,阳性对照法,阴性对照法,标志着今后以测定一组成分逐渐取代测定单一指标成分,(二)纸色谱法（PC）,以纸为载体，以纸上所含水分或其他物质为固定相，用展开剂进行展开的分配色谱。,1.仪器与材料,（1）展开室,（2）点样器,（3）色谱滤纸,固定相：水,流动相：BAW系统,正丁醇:乙酸:水=4:1:5,(1)下行法,点样：直径2-4mm,间距1.5-2.0cm,展开前：蒸汽应饱和,展开后：标明前沿，晾干，检视,2.纸色谱法操作方法操作,(2)上行法,点样：直径2-4mm,间距1.5-2.0cm,展开前：蒸汽应饱和,展开后：标明前沿，晾干，检视,单向、双向、多次、连续,(三)气相色谱法（GC）,以气体作为流动相的色谱法。以,保留时间,作为鉴别依据。,该法主要是用于,含挥发油和挥发性成分,的制剂分析,(四)高效液相色谱法(HPLC),主要是利用供试品与对照物,保留时间是否相同,作为鉴别依据。,对于复杂组分尚可采用联机技术，如本法与质谱联用，先分离后再作定性鉴别。,（五）、毛细管电泳法（HPCE）,以弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的电泳分离分析方法。,中药分析中可以用,HP,CE分析的成分包括生物碱、有机酸、酚类、苷类、黄酮类、醌类、香豆素等。,紫外光谱法,荧光法,红外分光谱法,近红外光谱法,四、光谱法,利用光谱法对物质进行定性鉴别，通过,光谱特征或标准光谱对照,的方法来确认某一化合物。,（一）紫外光谱法-吸收光谱,特点：简单、快速、样品用料少。,缺点：特征性不强、专属性差。,检测波长200-760,1.导数光谱法,2.紫外光谱谱线法,（二）荧光法-吸收光谱,特点：操作简单、灵敏度高、专属性差。,检测波长254nm或365nm,适合检测成分：,黄酮类、蒽醌类、香豆精类、鞣质类、酚酸类和某些生物碱类成分。,（三）红外光谱法和近红外光谱法-吸收光谱,红外光谱法,特点：特征性强、取样量小、简便迅速、准确。,近红外光谱法,4 生物鉴别,生物鉴别的概念,利用药效学和分子生物学等技术来鉴定中药品质的方法。,生物鉴别的特点,专属性强、准确性高,一、分 类,1.免疫鉴定法：特异蛋白,2.细胞生物学鉴定法：染色体,3.生物效价测定法：强度指标,4.纯指标测定法：药理特征,5.DNA分子遗传标记鉴定法：DNA,6.mRNA差异显示鉴定法：基因表达差异,4 生物鉴别,二、DNA分子遗传标记鉴定法,确定DNA序列的特征达到鉴别目的,分类：,1.以电泳技术和分子杂交为核心的分子标记技术：,2.以电泳技术和PCR技术为核心的分子标记技术：,3.以DNA序列为核心的分子标记技术：,