血液常用检查主题讲座课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,红细胞计数,一,血红蛋白测定,二,红细胞形态检查,三,第二节血液常用检查（一）,教学目标,掌握红细胞计数、血红蛋白方法,熟悉红细胞形态特点,了解红细胞计数、血红蛋白测定临床意义,红细胞的发育过程,造血干细胞,早幼红细胞中幼红细胞晚幼红细胞,脱核网织红细胞成熟红细胞,EPO,红系祖细胞原始红细胞,（有丝分裂）,48h,成熟红细胞,铁 铁代谢,原卟啉,胆色素代谢,珠蛋白 蛋白质代谢,衰老红细胞,红细胞的发育过程,120,天,5,检测方法,1.,手工显微镜法,2.,血液分析仪法,一、红细胞计数,6,1.,手工显微镜法,（1）,血液分析仪的校正,（2）适用基层医疗单位和分散就诊患者,（3）费时、重复性差，准确性取决操作者技术水平,2,血液分析仪法,操作简便、重复性好，适用大批量集中检测,准确性取决于仪器性能及工作状态，定期校准、质控,方法学评价,手工显微镜法,7,定义：用等渗稀释液将血液稀释一定倍数后，滴入改良Neubauer计数板，在显微镜下计数一定范围内的红细胞数，经换算即可求得每升血液中的红细胞数。,8,改良牛鲍计数板,计数板,压线细胞的计数原则,：,数左不数右,，,数上不数下,11,血细胞计数室各计数区的计数对象、范围和单位换算,计数区域 计数细胞种类 换算方式（以细胞个数,/L,计）,四角,4,个大方格,白细胞,N/4,10,稀释倍数,10,6,四角及中央,5,个中方格,红细胞、血小板,N510,稀释倍数,10,6,两侧计数室四角及中央,嗜酸性粒细胞、体,N,稀释倍数,10,6,5,个大方格共,10,个大方格,腔液细胞、精子,12,红细胞稀释液组成与作用,稀释液 组成 作用 备注,Hayem液,NaCl、Na,2,SO,4,、HgCl,2,调节渗透压、增加红细,胞悬浮性和防腐作用,高球蛋白血症时，蛋白质沉淀致红细胞凝集,枸橼酸钠稀释液,NaCl、枸橼酸钠、甲醛,NaCl和枸橼酸钠调,节渗透压,，枸橼酸钠,具抗凝，甲醛防腐,生理盐水,生理盐水,急诊时用,1%甲醛生理盐水,甲醛、生理盐水,急诊时用,13,1.,准备计数板,2.,加稀释液：,2ml,3.,加血：,10,l,混匀,4.,充池,5.,计数,6.,计算：红细胞数,=N/5*25*10*200*10,6,/L,结果报告方式：,X.X,10,12,/L,红细胞计数操作,14,成年：男性（,4,5.5,）,10,12,/L,女性（,3.5,5.0,）,10,12,/L,新生儿：（,6.0,7.0,）,10,12,/L,参考值,15,1,.分析前质量控制,患者准备、标本采集、存储温度和时间,2,.分析中质量控制,计数误差（技术误差和固有误差）、白细胞影响,3.分析后质量控制,结合临床资料,质量控制,血红蛋白,(,血色素，,Hb,或,HGB),组成,二、血红蛋白测定,珠蛋白：4条，种属特异性,亚铁血红素：4个，无种属特异性,珠,Pr,N N,Fe,N N,亚铁血红素结构示意图,O,2,HbA,：,2,2,成人占,95%,以上,HbA,2,：,2,2,成人约占,2,3%,HbF(,胎儿,Hb),：,2,2,成人,1%,以下,每个,Hb,分子由,2,条,类肽链和,2,条非,类肽链组成，每条珠蛋白肽链含有 1,个亚铁血红素,HbO,2,(,氧合血红蛋白,),各种血红蛋白衍生物,(据铁原子第六配位键的结合情况),Hbred,(,还原血红蛋白,),HbCO,(,碳氧血红蛋白,),Hi,(,高铁血红蛋白,),SHb,(,硫化血红蛋白,),主要成分,少量,与氧结合,未结合,与,CO,结合,Fe,2,Fe,3,与,S,结合,20,氰化高铁血红蛋白,(HiCN),测定法,十二烷基硫酸钠血红蛋白（,SDS-Hb,）法,叠氮高铁血红蛋白,(HiN3),法,碱羟血红蛋白法,叠,氮高铁,血红蛋白,测定法,溴代十六烷基三甲胺血红蛋白测定法（,CTAB,）,检测方法,一,.,原理,Hb,CN,氧化,HiCN,为棕红色，最大吸收峰,540nm,。,根据标本的吸光度可知,Hb,浓度。,HiCN,Hi,氰化高铁血红蛋白测定法,(HiCN,法,),注：,硫化血红蛋白,(SHb),不能被转化,氰化钾,0.05g,高铁氰化钾,0.2g,磷酸二氢钾,0.14g,非离子表面活性剂,1.0,ml,蒸馏水 加至,1000,ml,二,.,试剂,HiCN,转化液,(,文齐液,),调,pH7.0,7.4,，置,棕色玻璃瓶,中密封保存。,氧化,调节,pH,促溶,防混浊,提供,CN,-,氰化高铁血红蛋白测定法,(HiCN,法,),三,.,方法,4.,实际工作中，可用,HiCN,参考液，按生化方,法绘制标准曲线，或求出,K,值后计算。,K,Hb,（,g,）,/A,1.,5.0,ml,Hb,转化液血,20ul,混匀,静置,5min,。,2.,分光光度计比色，波长,540nm,，以空白转化,液调零，测定吸光度“,A”,。,3.,如用符合,WHO,标准的光度计，则可据“,A”,直,接计算,Hb,浓度。,氰化高铁血红蛋白测定法,24,血红蛋白浓度计算公式：,Hb(g/L)=A,540,HiCN,/44,64458/,1,000,251,=A,367.7,A,540,HiCN,：测定管吸光度,44：毫摩尔消光系数,64458/,1,000,：1mmol/L Hb溶液中所含Hb克数,251为稀释倍数,三,.,方法,4.,实际工作中，可用,HiCN,参考液，按生化方,法绘制标准曲线，或求出,K,值后计算。,K,Hb,（,g,）,/A,1.,5.0,ml,Hb,转化液血,20ul,混匀,静置,5min,。,2.,分光光度计比色，波长,540nm,，以空白转化,液调零，测定吸光度“,A”,。,3.,如用符合,WHO,标准的光度计，则可据“,A”,直,接计算,Hb,浓度。,氰化高铁血红蛋白测定法,Hb(g/L)A,50 0.128,100 0.265,150 0.385,200 0.523,K=Hb/A,=500/1.301,=384.32,Hb=K A,氰化高铁血红蛋白测定法,1.,KCN,为剧毒药品,，防污染。,2.HiCN,转化液不能存于塑料瓶中。,否则,CN,-,下降，结果偏低。,3.,分光光度计应定期校正并使用,配套的比色杯。,4.,标准曲线或,K,值应,定期校正,。,四,.,注意事项,氰化高铁血红蛋白测定法,28,血红蛋白,SDS-Hb,SDS,540nm,血红蛋,白浓度,吸光度,十二烷基硫酸钠血红蛋白（,SDS-Hb,）法,方法学评价,HiCN,法,SDS-Hb,法,优点：操作简便；显色快，结果稳定。,缺点：氰化钾有剧毒；,高白细胞或高球蛋白血症等可致浑浊；,HbCO,转化慢。,参考方法,优点：操作简单；结果稳定；无公害。,缺点：摩尔消光系数未确定；,破坏白细胞；,质量差异大,。,次选方法,如何采用,SDS-Hb,法进行血红蛋白测定？,1.HiCN,法绘制标准曲线,2.SDS-Hb,法标准工作曲线绘制,1),取,4,份不同浓度抗凝血或溶血液用,HiCN,法,测定吸光度，并求出其,Hb,浓度。,2),再用,SDS-Hb,法测定,4,份标本的吸光度。,3),以,4,份标本,Hb,浓度为横坐标,，,SDS-Hb,法测得,的吸光度为纵坐标，绘制标准工作曲线。,31,分析前质量控制：同红细胞计数,分析中质量控制,技术误差：稀释倍数、分光光度计波长、光缝、比色杯光径需校正,HiCN转化液：棕色玻璃瓶,HiCN参考液：关键,质控物：室内质控,分析后质量控制：同红细胞计数,质量控制,32,成年：男性：,120,160g,L,；,女性：,llO,150g,L,。,新生儿：,170,200g,L,。,老年,(70,岁以上,),：,男性：,94,122g,L,；女性,87,112g,L,。,参考值,33,轻度贫血，成年男性,Hb,1,2,0g/L,，,成年女性,1,1,0g/L,；,中度贫血,90g/L,；,重度贫血,60g/L,；,极度贫血,30g/L,。,临床意义,34,三、红细胞形态检查,红细胞大小、形态、染色和内涵物的是否异常,1,显微镜分析法 采用人工显微镜法血涂片染色观察，,是仪器法校准的参考方法和检测的复核方法。,2,计算机图像分析 建立统计模型，以正常红细胞形态,为参比、作出分析，,可用于与红细胞形态变化疾病的辅助诊断。,3.,血液分析仪法 提供红细胞数量及其他相关参数，对异,常结果报警，,但不能提供确切信息，需用镜检血涂片核实。,检测原理和方法学评价,1.,有合格的血液细胞形态检验人员,2.,选择细胞分布均匀区域进行镜检,3.,注意完整规范的检查顺序,低倍镜 细胞分布和染色,油镜 细胞形态,是否存在其他异常细胞,4,减少人为影响因素 全片浏览,质量保证,37,38,正常红细胞,双凹圆盘形,大小均一，,平均,7.2m,(6.7-7.7m),；,淡粉红色，,Hb,充盈良好，,中央部位为生理性淡染区，大小约为直径的,1,3,；,胞质内无异常结。,39,外周血红细胞形态变化,红细胞大小异常,小、大、巨、大小不均,红细胞性状异常,球、椭圆、靶、口、镰、棘、钝锯齿、泪滴、裂片、形态不整,血红蛋白充盈度与着色异常,低色素、高色素、嗜多色、着色不一,红细胞内异常结构,嗜碱性点彩、豪焦小体、卡波环、寄生虫、疟色素,红细胞排列异常,缗钱状形成、自凝现象,有核红细胞,1.红细胞大小异常,(1)小红细胞：指,直径小于6m,的红细胞。提示血红蛋白合成障碍，见于缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血。,(2)大红细胞：指,直径大于l0m,的红细胞，常见于巨幼细胞性贫血，也可见于溶血性贫血、恶性贫血等。,(3),巨红细胞：指直径大于,15m,的红细胞。最常见于巨幼细胞性贫血。,(4),红细胞大小不均：指同一患者的红细胞之间直径相差一倍以上。大者红细胞直径可达,12m,，小者直径仅,2.5m,。常见于严重的增生性贫血，巨幼细胞性贫血时尤为明显,2红细胞形态异常,(1),球形细胞：该红细胞在血液中为球形，而在涂片上则显示细胞中心着色深浓，体积较小，有球形之立体感。,(2)椭圆形细胞：红细胞呈椭圆形、杆形，两端钝圆，长轴增大，短轴缩短。见于遗传性椭圆形细胞增多症、大细胞性贫血；偶见于缺铁性贫血、骨髓纤维化、巨幼细胞贫血、镰形细胞性贫血。正常人血液中约占l，但不超过15。,(3),靶形细胞：红细胞中心部位和细胞周缘染色较深，其间为不染色的苍白区环，形如射击之靶。常见于各种低色素性贫血，尤见于珠蛋白生成障碍性贫血、,HbC,病，也见于阻塞性黄疽、脾切除后状态。,(4),口形细胞：红细胞中央有裂缝，中心苍白区呈扁平状，颇似张开的口形或鱼口。常见于口形红细胞增多症，小儿消化系统疾患引起的贫血，也可见于乙醇中毒、某些溶血性贫血及肝病患者等。正常人偶见,(4,),。,(5),镰形细胞：红细胞外形呈镰刀状、线条状。镰状细胞贫血,(HbS-S,，,HbS-C),和镰状细胞特性,(HbA-S),的血标本，在缺氧的条件下，有大量镰细胞。,(6),棘形细胞：红细胞表面有针尖状突起，其间距不规则，突起的长度和宽度可不一。多见于遗传性或获得性,-,脂白缺乏症，可高达,70,80%,；也可见于脾切除后、酒精中毒性肝脏疾病、尿毒症。,(7),新月形红细胞：红细胞残缺不全，体积大，状如新月形，直径约,20m,。见于阵发性睡眠性血红蛋白尿。,(8),泪滴形细胞：成熟红细胞形如泪滴或梨状。多见于贫血、骨髓纤维化症时，偶见于正常人。,(9),缗钱状形成：红细胞表面电荷发生改变，而使其互相连接如缗钱状。,(10),裂红细胞：为红细胞碎片或不完整的红细胞。见于弥散性血管内凝血、微血管病性溶血性贫血、重型珠蛋白生成障碍性贫血、巨幼细胞性贫血、严重烧伤。正常人血涂片中裂片细胞小于,2%,。,(11),红细胞形态不整 指红细胞形态发生各种明显改变，出现不规则的奇异形状，如豆状、梨形、蝌蚪状、麦粒状和棍棒形等。此种细胞在某些感染或严重贫血时多见，最常见于巨幼细胞性贫血。,3染色异常,(1)正常色素性：见于正常人外，还见于急性失血、再生障碍性贫血和白血病等。,(2)低色素性：红细胞的生理性中心浅染区扩大，提示其血红蛋白含量明显减少。常见于缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、铁粒幼细胞性贫血、某些血红蛋白病。,(3)高色素性：中心淡染区消失，着色较深，胞体成红色，胞体大。最常见于巨幼细胞性贫血。,(4)嗜多色性：它是刚脱核而尚未完全成熟的红细胞，故其细胞体积较大。多色性红细胞增多提示骨髓造红细胞功能活跃。尤见于溶血性或急性失血性贫血。,4,红细胞内出现异常结构,(1),嗜碱性点彩红细胞：指在瑞氏染色条件下，成熟红细胞或幼红细胞的胞质内出现形态不一的蓝色点状物，即核糖核酸,(RNA),，属于未完全成熟红细胞，其颗粒大小不一、多少不等。常作为铅中毒诊断筛选指标。,(2)豪焦小体(H-Js body)：成熟红细胞或幼红细胞的胞质内含有一个或多个直径为l2m的暗紫红色圆形小体。可见于巨幼细胞贫、血脾切除术后、无脾症、脾萎缩、脾功能低下、红白血病和某些贫血患者。,（3）卡波环(Cabotring)：红细胞的胞质中出现的紫红色细线圈状结构，呈环形或8字形。可见于白血病、巨细胞性贫血、增生性贫血、铅中毒或脾切除后。,(4)有核红细胞 即幼稚红细胞。,溶血性贫血 急、慢性白血病,骨髓纤维化,脾切除后,