分解纤维素的微生物的分离知识点.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,分解纤维素的微生物的分离知识点,纤维素酶：,纤维素酶是一种,复合酶,，一般认为它至少包括三种组分，即,CX酶,、,C1酶,和,葡萄糖苷酶,，前两种酶使,纤维素,分解成,纤维二糖,，第三种酶将纤维二糖分解成,葡萄糖,。,纤维素,C,1,酶,C,x,酶,纤维二糖,葡萄糖苷酶,葡萄糖,甲 乙,在2支20mL的试管中，分别放入,16cm,的滤纸条，再分别加入pH为,4.8,、物质的量浓度为,0.1mol/L,的醋酸-醋酸钠缓冲液,10mL、11mL,。在加入,10mL,缓冲液的试管中加入1mL纤维素酶（7080U/mL）。将二支试管固定在50mL的锥形瓶中，在摇床上以140r/min的转速振荡反应1h，观察结果。,4、纤维素酶活性的测定实验：,.纤维素分解细菌的筛选：,1.方法：,刚果红染色法,这种方法能够通过,颜色,反应,直接对微生物进行筛选,刚果红,可以与,纤维素,形成,红色复合物,，当纤维素被,纤维素酶,分解后，红色复合物无法形成，,出现以,纤维素分解菌,为中心的,透明圈,，我们可以通过,是否产生透明圈,来筛选纤维素分解菌。,2.原理：,土壤取样,选择培养,梯度稀释,将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上,挑选产生透明圈的菌落,二、实验设计,（此步可以省略）,2、选择培养的操作方法,将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在,摇床,上，在一定温度下振荡培养1-2d，直至培养液变,混浊,。,吸取一定量的培养液，转移至另一瓶新鲜的选择培养基中，以同样的方法培养到培养液变混浊。,选择培养,（,富集培养）,增加纤维素分解菌的浓度,，,以确保能够从样品中分离所需要的微生物。,1、,目的：,刚果红染色法,方法一：,先,培养微生物,，再加入刚果红进行颜色反应,方法二：,在,倒平板时,就加入刚果红,为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行_实验，纤维素酶的发酵方法有_ 发酵和_ 发酵。纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的_ 含量进行定量测定。,课题延伸,发酵产纤维素酶,液体,固体,葡萄糖,碳源,氮源,生长因子,无机盐,水,微生物需要的五大类营养要素物质,（一）微生物需要的营养物质及功能,概念,来源,常见的生长因子,微生物生长,不可缺少,的,微量有机物,酵母膏、蛋白胨、动植物组织的提取液,维生素、氨基酸、碱基等,生长因子,思考,是否培养所有微生物的培养基中都需要,加生长因子？,1、碳源,2、自养型微生物利用无机碳源，,异养型微生物利用有机碳源；,有机碳源：如糖类,无机碳源：如CO,2,5自养型微生物的,能源,是光能或无机物氧化释放的化学能；,异养型微生物的,能源,是和碳源一样（有机碳源）,3、自养型微生物利用无机氮源，,异养型微生物可能利用无机氮源也可能利用有机氮源,4、有机碳源也是,异养型微生物的主要能源,8有些微生物能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研究和应用，使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。纤维素酶可以通过微生物发酵来生产，为了提高酶的产量，请你设计一个实验，利用诱变育种的方法，获得产生纤维素酶较多的菌株。,(1)写出实验步骤：,_.,制备含有_的固体培养基。,_.,_.,(2)预期实验结果结论：,8.答案（1）将培养好的菌株分为两组，一组用一定剂量的诱变剂处理，另一组不处理作对照。把诱变组的大量菌株接种到多个含有纤维素的固体培养基上，同时对照组,接种,未处理的菌株。把它们置于相同的条件下培养一段时间后，取培养基用,刚果红染色,，观察记录菌落周围透明圈的大小情况,(2)诱变组中菌落周围的透明圈与对照组相比较大，说明诱变育种获得了高纤维素酶产量的菌株诱变组中菌落周围的透明圈与对照组相同，说明诱变育种没有使菌株发生相关变化,诱变组中菌落周围的透明圈与对照组相比较小，说明诱变育种获得了低纤维素酶产量的菌株,